一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，属于生物检测技术领域。该试剂盒由试剂R1和试剂R2组成；试剂R1包括：表面活性剂、氯化镁、4‑氨基安替比林和缓冲液；试剂R2包括：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、脱氧胆酸钠、显色剂、氯化镁和缓冲液；试剂R1还包括叔丁基‑4‑羟基苯甲醚。该试剂盒采用直接法来进行测定，具有准确性高、特异性高且线性范围广等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用。
技术介绍
人血清中的脂蛋白根据密度不同，主要分为：乳糜微粒(chylomicrons，CM)、极低密度脂蛋白(very-low-densitylipoprotein，VLDL)、中间密度脂蛋白(intermediate-densitylipoprotein，IDL)、低密度脂蛋白(low-densitylipoprotein，LDL)和高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein，HDL)。其中，HDL是颗粒最小的脂蛋白，促进胆固醇从外周组织移去，转运胆固醇至肝脏或其他组织再分布，可减少胆固醇在血管壁的沉积，起到抗动脉粥样硬化作用。胆固醇又称胆甾醇，以游离胆固醇的形式或以和脂肪酸结合的胆固醇酯的形式存在于血液脂蛋白中，例如：极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等。HDL主要由肝脏和小肠合成，是颗粒最小的脂蛋白，其中脂质和蛋白质部分几乎各占一半。HDL是一类异质性脂蛋白，由于HDL颗粒中所含脂质、载脂蛋白、酶和脂质转运蛋白的量和质各不相同，采用不同分离方法，可将HDL分为不同亚组分。这些HDL亚组分在形状、密度、颗粒大小、电荷和抗动脉粥样硬化特性等方面均不相同。HDL将胆固醇从周围组织(包括动脉粥样硬化斑块)转运到肝脏进行再循环或以胆酸的形式排泄，此过程称为胆固醇逆转运。Gotto等人研究发现，血清HDL-C水平与动脉粥样硬化性心血管疾病(atheroscleroticcardiovasculardisease，ASCVD)发病危险呈负相关(GottoAMJr,BrintonEA.Assessinglowlevelsofhigh-densitylipoproteincholesterolasariskfactorincoronaryheartdisease:aworkinggroupreportandupdate.JAmCollCardiol,2004,43:717-724.)。因此，临床上将HDL-C的高低作为冠心病和动脉粥样硬化的辅助诊断指标之一。根据我国《中国成人血脂异常防治指南(2016年修订版)》提出的临床血脂测定建议，血清HDL-C的测定主要使用超速离心法、电泳法、色谱法，沉淀法、匀相法等。早期HDL-C常规测定主要采用的是沉淀法，该法可实现较高的分析特异性，但其主要缺点是需预先对标本进行沉淀、离心等处理，结果易受高血脂的影响；超速离心法主要用于靶值的确定及各种HDL-C检测方法学评价，但该法对设备和技术操作有严格要求，一般实验室难以开展。目前通常使用匀相法测定HDL-C含量，其中过氧化氢酶清除法最为常用。比如，中国专利CN107449748A公开了高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其使用方法，采用多种混合表面活性剂，包括泊洛沙姆系列、聚乙烯硫酸盐、十二烷基硫酸钠等，但是大量表面活性剂的添加极有可能对HDL-C进行消耗，进而导致含量测定不准确。再如，中国专利CN106383116A公开了一种检测高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒，该专利在选择性抑制法的基础上进行改良，加入优选的复合表面活性剂，根本上是使用聚乙二醇修饰胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶，并添加硫酸α-环糊精与非高密度脂蛋白形成复合物，但硫酸化环糊精会降低胆固醇的活性，导致HDL-C含量的测定存在极大误差。因此，急需一种准确度高的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒。
技术实现思路
针对现有技术在高密度脂蛋白胆固醇含量测定过程中存在的准确性差的缺陷，本专利技术提供一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，该试剂盒准确性高、特异性高且具有较宽的线性范围的，适用于临床全白动或半自动生化分析。为了实现上述技术效果，本专利技术采用如下技术方案实现：一方面，本专利技术提供了一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的试剂R1包括：表面活性剂、氯化镁、4-氨基安替比林和缓冲液；所述的试剂R2包括：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、脱氧胆酸钠、显色剂、氯化镁和缓冲液。所述的试剂R1还包括叔丁基-4-羟基苯甲醚。所述的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述试剂R1包括：表面活性剂10.0-30.0mmol/L、氯化镁5.0-15.0mmol/L、4-氨基安替比林0.2-2.0mmol/L、缓冲液50.0-150.0mmol/L和叔丁基-4-羟基苯甲醚0.1-0.7g/L；所述的试剂R2包括：胆固醇酯酶0.2-3.0KU/L、胆固醇氧化酶1.0-5.0KU/L、过氧化物酶5.0-15.0KU/L、脱氧胆酸钠40.0-70.0mmol/L、显色剂1.0-5.0mmol/L、氯化镁5.0-15.0mmol/L和缓冲液50.0-150.0mmol/L。优选地，所述的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述的试剂R1包括：表面活性剂15.0-25.0mmol/L、氯化镁6.0-10.0mmol/L、4-氨基安替比林0.3-1.5mmol/L、缓冲液70.0-120.0mmol/L和叔丁基-4-羟基苯甲醚0.2-0.6g/L；所述的试剂R2包括：胆固醇酯酶0.5-2.5KU/L、胆固醇氧化酶2.0-4.5KU/L、过氧化物酶7.0-12.0KU/L、脱氧胆酸钠45.0-65.0mmol/L、显色剂2.0-4.0mmol/L、氯化镁6.0-10.0mmol/L和缓冲液70.0-120.0mmol/L。再优选地，所述的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述的试剂R1包括：表面活性剂18.0-23.0mmol/L、氯化镁7.0-9.0mmol/L、4-氨基安替比林0.5-1.0mmol/L、缓冲液80.0-100.0mmol/L和叔丁基-4-羟基苯甲醚0.3-0.5g/L；所述的试剂R2包括：胆固醇酯酶0.8-1.5KU/L、胆固醇氧化酶2.5-3.5KU/L、过氧化物酶9.0-11.0KU/L、脱氧胆酸钠50.0-62.0mmol/L、显色剂2.5-3.5mmol/L、氯化镁7.5-9.0mmol/L和缓冲液80.0-100.0mmol/L。其中，所述的表面活性剂为鲸蜡醇聚醚-23、吐温-60和Span-60中的一种或几种；优选地，所述的表面活性剂为鲸蜡醇聚醚-23。其中，所述的显色剂为2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸、2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠和苯酚中的一种或几种；优选地，所述的显色剂为2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸。其中，所述的缓冲液为pH值为7.0的3-吗啉丙磺酸缓冲液、pH值为7.0的磷酸盐缓冲液和pH值为7.0的硼酸盐缓冲液中的一种或几种；优选地，所述的缓冲液为pH值为7.0的3-吗啉丙磺酸缓冲液。在一个优选实施方案中，所述的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述的试剂1包括：鲸蜡醇聚醚-2322.5mmol/L、氯化镁8.0mmol/L、4-氨基安替比林0.6mmol/L、pH值为7.0的3-吗啉丙磺酸缓冲液90mmol/L和叔丁基-4-羟基苯甲醚0.4g/L；所述的试剂R2包括：2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸3.0mmol/L、胆固醇酯酶1.0KU/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的试剂R1包括：表面活性剂、氯化镁、4‑氨基安替比林和缓冲液；所述的试剂R2包括：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、脱氧胆酸钠、显色剂、氯化镁和缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的试剂R1包括：表面活性剂、氯化镁、4-氨基安替比林和缓冲液；所述的试剂R2包括：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、脱氧胆酸钠、显色剂、氯化镁和缓冲液。2.根据权利要求1所述的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1还包括叔丁基-4-羟基苯甲醚。3.根据权利要求2所述的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1包括：表面活性剂10.0-30.0mmol/L、氯化镁5.0-15.0mmol/L、4-氨基安替比林0.2-2.0mmol/L、缓冲液50.0-150.0mmol/L和叔丁基-4-羟基苯甲醚0.1-0.7g/L；所述的试剂R2包括：胆固醇酯酶0.2-3.0KU/L、胆固醇氧化酶1.0-5.0KU/L、过氧化物酶5.0-15.0KU/L、脱氧胆酸钠40.0-70.0mmol/L、显色剂1.0-5.0mmol/L、氯化镁5.0-15.0mmol/L和缓冲液50.0-150.0mmol/L。4.根据权利要求3所述的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1包括：表面活性剂15.0-25.0mmol/L、氯化镁6.0-10.0mmol/L、4-氨基安替比林0.3-1.5mmol/L、缓冲液70.0-120.0mmol/L和叔丁基-4-羟基苯甲醚0.2-0.6g/L；所述的试剂R2包括：胆固醇酯酶0.5-2.5KU/L、胆固醇氧化酶2.0-4.5KU/L、过氧化物酶7.0-12.0KU/L、脱氧胆酸钠45.0-65.0mmol/L、显色剂2.0-4.0mmol/L、氯化镁6.0-10.0mmol/L和缓冲液70.0-120.0mmol/L。5.根据权利要求4所述的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1包括：表面活性剂18...

【专利技术属性】
技术研发人员：林耀文，李传清，
申请(专利权)人：浙江夸克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33