基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用制造技术

本发明专利技术公开了基于DNA‑铜纳米簇构建的电化学生物传感器及其应用，具体步骤如下：(1)巯基DNA修饰裸金电极(Au)表面，记为Electrode1；(2)取3‑吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液、5×TdT缓冲液、dTTP和TdT制备TdT反应液，滴于Electrode 1表面，在37℃下放置0.5～1.5h，记为Electrode2；(3)向Electrode2中电极表面滴加Cu

【技术实现步骤摘要】
基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用
本专利技术涉及一种电化学生物传感器及其检测方法，尤其是涉及基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用，属于功能生物材料和生物传感

技术介绍
遗传物质的稳定传递是生命繁衍的根本。基因组DNA的精确复制和分配是遗传物质传递的基础，也是细胞周期两大最核心的生物学事件。DNA相关酶是复制过程中最重要的因子之一。尽管对这类酶的研究已有将近60年的历史，但依然是生命科学基础研究的前沿之一。它们不仅参与正常基因组DNA合成过程，也参与DNA损伤情况下多种修复过程。最近的肿瘤细胞比较基因组数据表明，多种DNA相关酶基因突变与某些肿瘤和遗传疾病相关。因此，对DNA相关酶的研究能够为这些疾病致病机理研究与诊治提供新思路和新方法。末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)能够通过将脱氧核糖核苷酸等温和重复添加到DNA分子的3′-OH末端来催化具有三个或更多个核苷酸长度的DNA的延伸。TdT仅在未成熟淋巴细胞和急性淋巴细胞白血病细胞中表达，因此TdT是急性白血病的常规诊断的重要生物标志物。此外，TdT被广泛用作分子生物工具，用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于DNA‑铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用，其特征在于，机理如下：在底物dTTP存在的条件下，TdT催化单链DNA上的3’‑OH末端进行延伸聚合作用，得到富T DNA长链，通过该长链形成CuNCs，利用铜的溶出产生电化学信号，实现TdT活性检测，而单链DNA在Exo I的存在下被水解，无法实现TdT延伸聚合作用，无法产生电化学信号。Exo I和TdT的浓度变化会影响电化学传感器的电化学响应。

【技术特征摘要】
1.基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用，其特征在于，机理如下：在底物dTTP存在的条件下，TdT催化单链DNA上的3’-OH末端进行延伸聚合作用，得到富TDNA长链，通过该长链形成CuNCs，利用铜的溶出产生电化学信号，实现TdT活性检测，而单链DNA在ExoI的存在下被水解，无法实现TdT延伸聚合作用，无法产生电化学信号。ExoI和TdT的浓度变化会影响电化学传感器的电化学响应。2.基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用，具体步骤如下：(1)将巯基DNA(2.5～7.5μL，0.25～0.75μM)和三(2-羧乙基)膦(TCEP)(0.5～1.5μL，0.5～1.5mM)全称，混合均匀，在37℃下放置30～90min，滴于干净的裸金电极(Au)表面，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode1。(2)取1～3μL3-吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液(10mMMOPS，150mMNaCl，pH7.6)、0.5～1.5μL5×TdT缓冲液、dTTP(0.5～1.5μL，5～15mM)和TdT(0.1～1.5μL，5～15U/mL)制备TdT反应液，控制总体积为2.5～7.5μL，混合均匀，滴于Electrode1表面，在37℃下放置0.5～1.5h，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode2。(3)向Electrode2中电极表面滴加Cu2+(2.5～7.5μL，0.5～1.5mM)，室温孵育10～30min，蒸...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡宇芳，张青青，胡丹丹，马少华，郭智勇，王邃，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33