一种富硒双歧杆菌微胶囊制造技术

本发明专利技术公开了一种富硒双歧杆菌微胶囊，采用如下方法制备而成：将海藻酸钠溶液与富硒双歧杆菌菌体、碳酸钙粉末混合均匀，滴加到含有乳化剂的植物油中，搅拌形成乳状液，再依次加入含有冰醋酸的植物油和乳化剂溶液，搅拌后静置，分离油相，将水相离心，得到微胶囊。本发明专利技术通过对微胶囊制备、包衣以及冻干工艺中的试剂、材料及其用量比例的筛选，提高了富硒双歧杆菌微胶囊的包埋率，包埋率高达98％，粒径小于200μm，冻干存活率高达85％。常温稳定性结果显示，在180d内，富硒双歧杆菌微胶囊的活菌数仍在10

【技术实现步骤摘要】
一种富硒双歧杆菌微胶囊
本专利技术属于微生物制剂领域，具体涉及一种富硒双歧杆菌微胶囊。
技术介绍
双歧杆菌是人体肠道内重要的生理性益生菌之一，对人体健康十分有益，主要有调节肠道菌群、抗氧化、增强机体免疫力等功效，富硒双歧杆菌是指通过在培养双歧杆菌的培养基中加入硒元素而得到的一种富硒益生菌，可以将硒元素和益生菌的功效结合，在此前的公开专利(CN107164295A、CN108721337A)中，已分别详细阐述了具体的制备过程和突出的预防肿瘤化疗肠道毒性的功效。由于双歧杆菌是一类生长在pH为4.5～8.5之间的严格厌氧的革兰氏阳性细菌，对外界的不利环境如氧气、湿度、温度以及胃肠道内的胃酸、胆盐等比较敏感，因此在加工成各种制剂，常温运输、和通过胃肠道的过程中其活菌数会大量的减少，因此寻找一种能够保护双歧杆菌的制剂手段是十分有必要的。微囊化技术是一种包埋益生菌的有效手段，采用天然或合成的高分子材料为囊材，通过化学、物理或物理化学法将活性物质即囊芯包裹起来，从而形成具有半透性或密封囊膜的微型胶囊，将益生菌微囊化之后，能在一定程度上使其与外界环境隔离，提高其对不利环境的耐受性，此外，可以通过选择具有特殊性能的壁材，赋予微囊化后的益生菌在肠道内定位、缓慢释放的能力。现有技术在益生菌微囊化制备工艺中，微囊包埋率和菌体的存活率是考察制剂质量的重要指标，同时制剂工艺的繁简以及成本等因素也是是否符合工业化大规模生产的考察因素。中国专利技术专利申请CN105105144A公开了一种制备益生菌微胶囊的方法，该方法主要采用的菌种为乳杆菌，使用乳化法，以牛乳蛋白作为壁材，利用凝乳酶降解酪蛋白，在Ca2+的存在下与酪蛋白发生交联，从而形成微胶囊，然而该方法工艺复杂，壁材成本如凝乳酶较昂贵，并且包埋率和冻干存活率低，微囊的常温储存稳定性较差。文献《MicroencapsulationinAlginateandChitosanMicrogelstoEnhanceViabilityofBifidobacteriumlongumforOralDelivery》(YeungTW,ElifF,TianiKA,etal.[J].FrontiersinMicrobiology,2016,7(e43928).)公开了一种制备长双歧杆菌微胶囊的方法，采用特殊的微胶囊装置通过挤压的形式制备得到粒径在200～300μm左右的长双歧杆菌微胶囊。这种制备益生菌微胶囊的方式受装置效率的影响不易放大生产，并且制备得到的微胶囊不耐胃酸和胆盐的侵害。目前开发包埋率高、存活率高、制备流程简单的双歧杆菌微胶囊工艺是本领域技术人员的开发重点。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术不足，提供了一种富硒双歧杆菌微胶囊，通过使用高分子成膜材料作为囊材，使用相分离法，利用内源乳化技术和静电吸附原理，显著增加了微胶囊对富硒双歧杆菌的包埋率，提高了富硒双歧杆菌的耐酸耐胆盐性质，延长了富硒双歧杆菌在常温下的保存时间。进一步的，通过使用冻干保护剂，显著提高富硒双歧杆菌的冻干存活率。本专利技术具体技术方案如下：一种富硒双歧杆菌微胶囊，采用海藻酸钙作为囊材，采用相分离法制得，具体方法为：将海藻酸钠溶液与富硒双歧杆菌菌泥、碳酸钙粉末混合均匀，滴加到含有乳化剂的植物油(优选大豆油)中，搅拌形成乳状液，再依次加入含有冰醋酸的植物油和乳化剂溶液，搅拌后静置，分离油相，将水相离心，得到微胶囊。本专利技术所述的富硒双歧杆菌可通过在培养双歧杆菌的培养基中加入硒元素而得到的一种富硒益生菌。本专利技术优选的一种双歧杆菌，所述双歧杆菌的16SrDNA核苷酸序列如SEQIDNo：1所示。所述双歧杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏时间2018.10.11，保藏编号为CGMCCNo.16573。优选的，富硒双歧杆菌菌泥的菌密度为1010～1011CFU/g。本专利技术所述的微胶囊，优选所述海藻酸钠溶液浓度为1.5％(W/V)。优选碳酸钙与海藻酸钠质量比为1:6。优选碳酸钙与冰醋酸摩尔比为1:2.8。优选乳化剂为吐温80，更优选浓度为1％(W/V)。优选加入含有冰醋酸的植物油和乳化剂溶液前、后的搅拌时间各为15min。搅拌速度为600rpm。优选所述菌泥与海藻酸钠质量比为20:3。本专利技术所述的微胶囊，还可以进一步将微胶囊进行包衣。优选包衣材料为壳聚糖。制备方法包括将未包衣的富硒双歧杆菌微胶囊重悬于壳聚糖溶液中，搅拌，待包衣完成后，离心得到包衣的富硒双歧杆菌微胶囊。本专利技术所述微胶囊可使用冻干保护剂冷冻干燥制得，所述冻干保护剂包括海藻糖、脱脂奶粉和Vc-Na，优选所述海藻糖、脱脂奶粉、Vc-Na和富硒双歧杆菌菌泥的质量比为10:20:2:100。优选的，本专利技术使用的冻干工艺为：第一阶段：-40℃，4h，预动结束后抽真空；第二阶段：5℃，10h；第三阶段：15℃，10h。本专利技术将菌液与壁材溶液混合，然后与植物油如大豆油以及乳化剂再混合，充分搅拌均匀后形成W/O型乳状液，然后再向体系中加入硬化剂，水溶性多聚物因交联作用在油相中形成微小的不可溶的胶珠颗粒，最后利用离心或膜过滤技术收集微胶囊，可以得到粒径小于200μm的粒子，不影响益生菌微囊加入到食品或饮料中的口感，通过对微胶囊以及包衣制备工艺中的试剂、材料及其用量比例的筛选，提高了富硒双歧杆菌微胶囊的包埋率并且实现工业化生产。进一步的，本专利技术利用微胶囊包衣技术又在益生菌微囊化之后，通过静电吸附法或凝聚法在其表面进行包衣(涂层)，减少益生菌在高氧、高pH环境中的暴露，提高其稳定性。本专利技术通过对冻干保护剂的筛选，提高富硒双歧杆菌的存活率，最终获得理想的富硒双歧杆菌微胶囊制剂(制备示意图如图1所示)。本专利技术优点：1.本专利技术的操作步骤和需要的设备简单，容易实现工业化放大生产；2.本专利技术使用的材料均为食品级材料，制备过程快速温和，包埋率高达98％，粒径小于200μm，具有很好的分散性，不会影响加入到饮料、酸奶、牛奶中的口感；3.本专利技术制备得到的微胶囊能够显著提高富硒双歧杆菌的耐酸和耐胆盐性质，能够保证足够数量的富硒双歧杆菌通过胃部到达肠道内发挥作用；提高富硒双歧杆菌在常温环境下的储存稳定性，因此可以延长富硒双歧杆菌制品的保存期，降低冷链运输成本；4.本专利技术采用的冻干保护剂可以显著的提高富硒双歧杆菌的冻干存活率，冻干存活率高达85％。常温稳定性结果显示，在180d内，富硒双歧杆菌微胶囊的活菌数仍在108cfu/g左右。附图说明图1为富硒双歧杆菌微胶囊制备示意图。图2为富硒双歧杆菌微胶囊冻干后的扫描电镜图。图3为富硒双歧杆菌微胶囊的耐胃酸和耐胆盐结果图。图4为富硒双歧杆菌微胶囊的耐常温贮藏结果图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细描述，但是本专利技术不限于所给出的例子。下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实例。实施例1富硒双歧杆菌的制备本专利技术所用长双歧杆菌DD98(拉丁名Bifidobacteriumlongum)，16SrDNA核苷酸序列如SEQIDNo：1所示。所述双歧杆菌保藏于中国普通微生物菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种富硒双歧杆菌微胶囊，其特征采用海藻酸钙作为囊材，采用相分离法制得。

【技术特征摘要】
1.一种富硒双歧杆菌微胶囊，其特征采用海藻酸钙作为囊材，采用相分离法制得。2.如权利要求1所述的微胶囊，其特征在于采用如下方法制备而成：将海藻酸钠溶液与富硒双歧杆菌菌体、碳酸钙粉末混合均匀，滴加到含有乳化剂的植物油中，搅拌形成乳状液，再依次加入含有冰醋酸的植物油和乳化剂溶液，搅拌后静置，分离油相，将水相离心，得到微胶囊。3.如权利要求2所述的微胶囊，其特征在于所述海藻酸钠溶液浓度为1.5％。4.如权利要求2所述的微胶囊，其特征在于所述碳酸钙与海藻酸钠质量比为1:6。5.如权利要求2所述的微胶囊，其特征在于所述碳...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪瑞，陈代杰，邹振荣，邵雷，吴佳慧，谭俊，张骏梁，张旭东，王桃，周艳，
申请(专利权)人：江苏德禧生物科技有限公司，上海医药工业研究院，
类型：发明
国别省市：江苏,32