有机磷降解酶高密度发酵制备方法技术

本发明专利技术公开了一种有机磷降解酶的高密度发酵制备方法，包括：(1)构建机磷降解酶毕赤酵母酵母表达载体并转入到毕赤酵母得到重组毕赤酵母酵母菌株；(2)将重组毕赤酵母酵母菌株依次在一级种子发酵罐、二级种子发酵罐和三级种子发酵罐中进行扩培得到三级种子；(3)将三级种子接入到发酵罐中的高密度发酵培养基中进行诱导培养；期间，通过补料罐补加发酵培养基。本发明专利技术主要通过对酵母细胞在种子罐和发酵罐生长和表达的分析，结合酵母生长和外源蛋白表达所需的营养物质、溶氧浓度、培养温度、发酵液的pH值，补料方式以及诱导过程中甲醇浓度、温度、pH、溶氧、残糖等因素对菌体表达的影响,有效提高了机磷降解酶的产量并降低了生产成本。

【技术实现步骤摘要】
有机磷降解酶高密度发酵制备方法
本专利技术涉及有机磷降解酶的制备方法，尤其涉及有机磷降解酶高密度发酵的制备方法，属于有机磷降解酶的制备领域。
技术介绍
针对农药残留对农副产品出口绿色壁垒的限制和对广大人民群众身体健康的威胁，此外，如何突破和解决农产品出口农药残留达标的难题，采用高科技手段和高科技技术势在必行，这也是中国出口企业面前必须解决的问题。为解决农药残留等问题，有机磷降解酶的研究开发，自本世纪初启动了对有机磷降解酶的研究工作，并列入了中国国家‘863’计划项目。在培养时采用了表达有机磷降解酶的重组毕赤酵母，其具有良好的安全性，无抗药性标记，培养过程中不分泌有毒物质和热源。“酶”属生物制剂，用“酶”来降解农药安全、彻底，没有毒副作用。“酶”可与蔬菜、水果等农产品的表面残留的农药发生化学反应，能破坏剧毒成分的结构，使剧毒农药瞬间变为无毒、可溶于水的小分子，以达到蔬菜水果的迅速脱毒，这种酶做成的洗涤液对环境不会有二次污染。本专利技术人实验室已经完成利用毕赤酵母(Pichiapastoris)来高效表达有机磷降解酶，可通过高细胞密度发酵低成本生产有机磷降解酶制剂。酵母高效表达了降解酶，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种有机磷降解酶的高密度发酵制备方法，其特征在于，包括：(1)构建含有机磷降解酶的毕赤酵母酵母表达载体并转入到毕赤酵母得到重组毕赤酵母酵母菌株；(2)将重组毕赤酵母酵母菌株依次在一级种子发酵罐、二级种子发酵罐和三级种子发酵罐中进行扩培得到三级种子液；(3)将三级种子液接入到发酵罐中的高密度发酵培养基中进行发酵并进行诱导培养表达；期间，通过补料罐补加甘油或甲醇。

【技术特征摘要】
2018.01.25 CN 20181007456481.一种有机磷降解酶的高密度发酵制备方法，其特征在于，包括：(1)构建含有机磷降解酶的毕赤酵母酵母表达载体并转入到毕赤酵母得到重组毕赤酵母酵母菌株；(2)将重组毕赤酵母酵母菌株依次在一级种子发酵罐、二级种子发酵罐和三级种子发酵罐中进行扩培得到三级种子液；(3)将三级种子液接入到发酵罐中的高密度发酵培养基中进行发酵并进行诱导培养表达；期间，通过补料罐补加甘油或甲醇。2.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法，其特征在于，步骤(2)将重组毕赤酵母酵母菌株依次在一级种子发酵罐、二级种子发酵罐和三级种子发酵罐中进行扩培得到三级种子液时，增大一级种子罐、二级种子罐以及三级种子罐的配料体积。3.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法，其特征在于，按体积比计，所述种子罐的接种量为10％。4.按照权利要求1所述的高密度发酵制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李立公，管立忠，王璋，
申请(专利权)人：北京森根比亚生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11