一种HPLC法同时测定四种激素类药物含量的方法技术

一种HPLC法同时测定四种激素类药物含量的方法，包括以下步骤：S1、供试品溶液配制：取经超声提取法所得样品溶液，用稀释剂溶解制成供试品溶液；S2、对照品溶液配制：分别称取庚酸睾酮、醋酸去甲雄三烯醇酮、群勃龙庚酸酯和癸酸南诺龙四种激素类药物，用稀释剂溶解制成对照品溶液；S3、检测分析：分别取S1中供试品溶液和S2中对照品溶液进样高效液相色谱仪，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定各成分保留时间，按外标法以峰面积计算供试品溶液中四种激素类药物的含量。本发明专利技术的方法能有效将四种成分分开，灵敏度高、重复性及耐用性好，结果稳定可靠，对于实现食品动物中禁用的人工合成激素类药物的定量检测具有重要意义。

A Method for Simultaneous Determination of Four Hormone Drugs by High Performance Liquid Chromatography

A method for simultaneous determination of four hormone drugs by HPLC includes the following steps: S1, preparation of sample solution: sample solution obtained by ultrasonic extraction and dissolved with diluent to prepare sample solution; S2, preparation of reference solution: testosterone heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanolone heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptanoate heptano The diluent was dissolved into the reference solution; S3, detection and analysis: Sampling the reference solution in S1 and S2 respectively by high performance liquid chromatography (HPLC), recording the chromatogram, determining the retention time of each component, and calculating the content of four hormone drugs in the sample solution according to the peak area of external standard method. The method of the invention can effectively separate the four components, has high sensitivity, good repeatability and durability, and the results are stable and reliable. It is of great significance for the quantitative detection of prohibited synthetic hormone drugs in food animals.

【技术实现步骤摘要】
一种HPLC法同时测定四种激素类药物含量的方法
本专利技术涉及分析化学领域，具体涉及一种HPLC法同时测定四种激素类药物含量的方法。
技术介绍
兽药种类繁多，根据用途可分为促生长剂、抗生素、抗寄生虫药、镇静剂等。许多药物使用后容易在动物体内残留并最终通过食物链进入人体。人们长期摄入含有兽药残留的动物性产品可能导致中毒现象，甚至有致畸、致癌、致突变等效应，严重危害人体健康。目前为止，尚未有文献和公开的方法报道可以同时测定动物组织中庚酸睾酮、醋酸去甲雄三烯醇酮、群勃龙庚酸酯和癸酸南诺龙四种激素类药物含量的方法，为了满足社会对食品动物的质量安全需求，开发一种高灵敏度和稳定可靠的检测方法势在必行。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种HPLC法同时测定四种人工合成激素类药物的方法，本专利技术的方法可以有效的将四种人工合成激素类药物分开，且该方法灵敏度高、重复性及耐用性好，结果稳定可靠，对于实现食品动物中禁用的人工合成激素类药物的定量检测具有重要意义。一种HPLC法同时测定四种激素类药物含量的方法，包括以下步骤：S1、供试品溶液的配制：取经超声提取法所得样品溶液，用稀释剂溶解制成供试品溶液；S2、对照品溶液的配制：分别称取庚酸睾酮、醋酸去甲雄三烯醇酮、群勃龙庚酸酯和癸酸南诺龙四种激素类药物，用稀释剂溶解制成对照品溶液；S3、检测分析：分别取S1中所述供试品溶液和S2中所述对照品溶液进样高效液相色谱仪，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定各成分保留时间，按外标法以峰面积计算供试品溶液中四种激素类药物的含量。所述高效液相色谱分析采用十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱，采用水为流动相A、有机溶剂为流动相B进行梯度洗脱后，进入紫外检测器进行检测，所述有机溶剂为乙腈或甲醇。所述稀释剂为80%乙腈水溶液(V/V)。高效液相色谱分析的色谱柱的规格为100×4.6mm，5μm，所述色谱柱的柱温为30-40℃。高效液相色谱分析中紫外检测器的检测波长为254nm或220nm。梯度洗脱和流动相A、B的体积百分比具体设置如下：梯度1：0-8min，流动相A：B=50%-60%：40%-50%，A+B=100%；梯度2：8-30min，流动相A：B=15%-20%：80%-85%，A+B=100%；梯度3：流动相A：B=15%-20%：80%-85%，A+B=100%；梯度洗脱的流速：1.0ml/min，柱温：30℃，检测波长：220nm，进样体积：10ul。本专利技术的方法可以有效的将四种成分分开，且该方法灵敏度高、重复性及耐用性好，结果稳定可靠，对于实现食品动物中禁用的人工合成激素类药物的定量检测具有重要意义。附图说明图1为对照品溶液色谱图。图2为供试品溶液色谱图。具体实施方式以下将参考附图，对本专利技术的优选实施例进行详细描述。图1为对照品溶液色谱图（注：1-庚酸睾酮，2-醋酸去甲雄三烯醇酮，3-群勃龙庚酸酯，4-癸酸南诺龙）；图2为供试品溶液色谱图（注：1-醋酸去甲雄三烯醇酮，2-群勃龙庚酸酯，3-癸酸南诺龙）。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好的对本专利技术的内容进行说明，但并不是本专利技术的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述
技术实现思路
对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。实施例1色谱条件：色谱柱：KinetexXB-C18柱（100×4.6mm，5um），流动相A:水，流动相B:乙腈，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序设置如下：流速：1.0ml/min，柱温：30度，检测波长：220nm，进样体积：10ul2方法与结果2.1溶液配置供试品溶液的配制：称取经冷冻干燥处理并粉碎后的动物组织样品5g，加入50ml乙酸乙酯超声提取30min，提取液过滤后减压干燥，再加10ml甲醇超声提取10min，8000r/min离心5min，取上清液置25ml量瓶中，加稀释剂定容至刻度，得供试品溶液；对照品溶液的配制：精密称取庚酸睾酮、醋酸去甲雄三烯醇酮、群勃龙庚酸酯和癸酸南诺龙对照品适量至量瓶中，加80%乙腈水溶液（V/V）溶解并稀释至刻度，制成浓度为1.0mg/ml的对照品溶液。2.2系统适应性和专属性试验精密吸取上述对照品溶液10ul，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，其中各峰保留时间、理论塔板数、分离度及拖尾因子见表1：表1系统适应性和专属性测定结果2.3精密度试验精密吸取上述对照品溶液10ul，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，各峰面积标准偏差（RSD）分别为0.15%、0.35%、0.21%、0.14%，表明仪器精密度良好。2.4线性和范围精密称取庚酸睾酮、醋酸去甲雄三烯醇酮、群勃龙庚酸酯和癸酸南诺龙对照品适量至量瓶中，加稀释剂制成浓度约为1.0mg/ml的线性储备液，分别精密吸取4μl、8μl、20μl、40μl、80μl线性储备液至10ml量瓶中，稀释至刻度，进行测定。以峰面积（A）为纵坐标，浓度C（μg/ml）为横坐标，建立标准曲线，得线性回归方程（表2），庚酸睾酮、醋酸去甲雄三烯醇酮、群勃龙庚酸酯及癸酸南诺龙在线性范围内均具有良好线性关系。表2线性测定结果2.5定量限和检测限精密称取庚酸睾酮、醋酸去甲雄三烯醇酮、群勃龙庚酸酯和癸酸南诺龙对照品适量至量瓶中，加稀释剂制成浓度为5μg/ml的混合溶液，精密吸取混合溶液适量，逐级稀释并进行测定，得各成分定量限和检测限浓度，结果见表3。表3定量限和检测限结果测定结果精密吸取上述供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。其中群勃龙庚酸酯未检出，庚酸睾酮、醋酸去甲雄三烯醇酮、癸酸南诺龙按外标法以峰面积计算，含量分别为2.2ppm、3.0ppm、1.6ppm。2.6结论在该色谱条件下，四种激素成分均能完全分离，结果稳定可靠，可用于食品动物中该种类激素类药物的定量检测。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种HPLC法同时测定四种激素类药物含量的方法，其特征在于包括以下步骤：S1、供试品溶液的配制：取经超声提取法所得样品溶液，用稀释剂溶解制成供试品溶液；S2、对照品溶液的配制：分别称取庚酸睾酮、醋酸去甲雄三烯醇酮、群勃龙庚酸酯和癸酸南诺龙四种激素类药物，用稀释剂溶解制成对照品溶液；S3、检测分析：分别取S1中所述供试品溶液和S2中所述对照品溶液进样高效液相色谱仪，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定各成分保留时间，按外标法以峰面积计算供试品溶液中四种激素类药物的含量。

【技术特征摘要】
1.一种HPLC法同时测定四种激素类药物含量的方法，其特征在于包括以下步骤：S1、供试品溶液的配制：取经超声提取法所得样品溶液，用稀释剂溶解制成供试品溶液；S2、对照品溶液的配制：分别称取庚酸睾酮、醋酸去甲雄三烯醇酮、群勃龙庚酸酯和癸酸南诺龙四种激素类药物，用稀释剂溶解制成对照品溶液；S3、检测分析：分别取S1中所述供试品溶液和S2中所述对照品溶液进样高效液相色谱仪，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定各成分保留时间，按外标法以峰面积计算供试品溶液中四种激素类药物的含量。2.根据权利要求1所述的一种HPLC法同时测定四种激素类药物含量的方法，其特征在于所述高效液相色谱分析采用十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱，采用水为流动相A、有机溶剂为流动相B进行梯度洗脱后，进入紫外检测器进行检测，所述有机溶剂为乙腈或甲醇。3.根据权利要求1所述的一种HPLC法同时测定四种激素类药物含量的方法，其特征在于所述稀释剂为8...

【专利技术属性】
技术研发人员：何枭宇，李立威，王琴，
申请(专利权)人：荆门医药工业技术研究院，荆楚理工学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42