一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种乙醇‑硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法。本发明专利技术包括：步骤1:积雪草晒干粉碎；步骤2：将积雪草粉末投入圆底烧瓶中，用70％乙醇溶剂，60℃水浴加热回流提取2h，提取后过滤得到积雪草提取液；步骤3：将积雪草提取液进行真空浓缩，得到积雪草浓缩液；步骤4：利用双水相体系的选择性分离富集积雪草总苷；步骤5：按照体积比在积雪草总苷的样品层中加入一定量的无水乙醇，震荡，混匀，离心，取出离心液上层；步骤6：将上层减压浓缩，真空干燥，最终得到积雪草总苷。本发明专利技术制得产品安全性高，提高了提取物纯度，改善了其品质，有效降低其生产成本。

Separation and enrichment of asiaticoside by ethanol-ammonium sulfate aqueous two-phase system

The invention discloses a method for separating and enriching the total asiaticoside in an aqueous two-phase system of ethanol and ammonium sulfate. The invention comprises the following steps: step 1: drying and crushing Centella asiatica; step 2: putting Centella asiatica powder into a round bottom flask, extracting Centella asiatica extract by 70% ethanol solvent, heating and refluxing at 60 ~C for 2 hours, then filtering to obtain Centella asiatica extract; step 3: vacuum concentration of Centella asiatica extract to obtain Centella asiatica concentrated liquid; step 4: selective separation and enrichment of Centella asiatica total by two-phase system Step 5: Add a certain amount of absolute ethanol into the sample layer of Centella asiatica total glycosides according to volume ratio, shake, mix, centrifuge, and take out the upper layer of centrifugal liquid; Step 6: Concentrate the upper layer under vacuum, and finally get Centella asiatica total glycosides. The product prepared by the invention has high safety, improves the purity of the extract, improves its quality and effectively reduces its production cost.

【技术实现步骤摘要】
一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法
本专利技术涉及植物提取的制备方法，特别是涉及一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法。
技术介绍
积雪草为伞形科植物积雪草(Centellaasiatica(L.)Urban)的干燥全草，广泛分布于长江流域以南各地，全草入药，常年可采，资源丰富，在许多国家的医药领域中应用己有几千年历史，其始载于《神农本草经》，列为中品，性寒，味苦，辛，具有清热利湿、解毒消肿之功效，主要用于湿热黄疽、中暑腹泻、痈肿疮毒、跌打损伤等。积雪草中的化学成分包括三萜皂苷、三萜酸、多炔烯类和挥发油等。现代研究证明，积雪草提取物可有效促进皮肤损伤、局部胶原合成代谢，并在皮肤损伤后的组织修复方面有中药作用。近年来研究还发现，积雪草具有抗氧化、抗抑郁、保肝、抑制肿瘤细胞增生等作用。积雪草苷等活性成分具有美白功效，其作为化妆品的功效成分而被广泛使用。目前富集积雪草总苷的方法主要采用大孔树脂方法纯化，例如专利一种积雪草总苷的制备方法(201210071147.0)：以水提取，大活性炭脱色，大孔树脂吸附-洗脱富集积雪草总苷，工艺流程复杂耗时，洗脱时产生大量溶剂导致浓缩时能耗较大。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，本方法工序少，成本低，耗时短，适合工业化大规模生产的需求。本专利技术是通过以下技术方案来实现：步骤1:积雪草晒干，粉碎至一定粒度制得积雪草粉末。步骤2：将积雪草粉末投入圆底烧瓶中，用70％乙醇溶剂，60℃水浴加热回流提取2h，提取后过滤，得到积雪草提取液。步骤3：将积雪草提取液进行真空浓缩，得到积雪草浓缩液。步骤4：利用双水相体系的选择性分离富集积雪草总苷：将步骤3中的积雪草浓缩液配置成密度为1.00～1.5g/ml的积雪草水溶液。取一定体积的积雪草水溶液加入到双水相体系中，震荡摇匀后静置，离心，分离上下相即含有积雪草总苷的上层及含有蛋白质、多糖等杂质的下层，取出含有积雪草总苷的样品层。所述的双水相体系由乙醇、硫酸铵和蒸馏水组成；所述双水相体系中，乙醇的体积分数为15～85％，硫酸铵的质量分数为5～45％。步骤5：按照体积比在积雪草总苷的样品层中加入一定量的无水乙醇，震荡，混匀，离心，取出离心液上层。步骤6：将上层减压浓缩，真空干燥，得到最终产品。作为优选，所述步骤1具体为，积雪草粉碎至20～50目作为优选，所述步骤2具体为，积雪草粉末与70％乙醇溶剂的料液比为1：5，提取次数为2次。作为优选，所述步骤3具体为，浓缩温度为65℃。作为优选，所述步骤4具体为，离心转速为4000r/min，离心10min。作为优选，所述步骤4具体为，双水相体系的配置过程：将硫酸铵用蒸馏水溶解后，加入无水乙醇，充分搅拌混匀。作为优选，所述步骤5具体为，积雪草总苷样品层与无水乙醇体积比为1:3～6，离心具体为4000r/min，15min。作为优选，所述步骤6具体为，减压浓缩温度为45～65℃，真空干燥温度为45～60℃。本专利技术以纯天然的积雪草植物为原料，用水、乙醇进行提取，然后双水相萃取技术富集积雪草总苷。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：操作过程绿色环保，未使用任何有毒有害试剂，保护环境。使用的原料试剂，简单易得，且易于运输，储存，适合工业化生产。工艺流程稳定可靠，重复性高，稳定性强。本专利技术未采用大孔树脂纯化工艺，避免了大孔树脂残留导致的安全风险。具体实施方式下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对专利技术的解释而不是限定。实施例1：取350g干燥积雪草粉末(过50目筛)投入2000ml圆底烧瓶，加入1750ml的70％乙醇，60℃水浴加热回流2h，过滤后，残渣重复提取一次，合并滤液，减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液，取出测定其体积为535ml，密度为1.06g/ml；配置双水相体系：在50ml离心管中加入11.5g硫酸铵，加入23.5ml蒸馏水，充分震荡混匀，加入10ml无水乙醇，摇匀，得到双水相萃取剂；向双水相体系中加入12.5ml积雪草浓缩液，震荡混匀后，4000r/min离心10min，取出上层有机层15ml置于烧杯中，加入60ml无水乙醇，充分搅拌，静置15min后4000r/min离心10min，取出上层，45℃浓缩至膏状，转入60℃真空干燥箱干燥，得到1.3g最终产品，经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测，以羟基积雪草苷做对照品，其含量为66.7％。实施例2：取350g干燥积雪草粉末(过50目筛)投入2000ml圆底烧瓶，加入1750ml的70％乙醇，60℃水浴加热回流2h，过滤后，残渣重复提取一次，合并滤液，65℃减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液，取出测定其体积为535ml，密度为1.06g/ml；配置双水相体系：在50ml离心管中加入7.5g硫酸铵，加入13ml蒸馏水，充分震荡混匀，加入37ml无水乙醇，摇匀，得到双水相萃取剂；向双水相体系中加入12.5ml积雪草浓缩液，震荡混匀后，4000r/min离心10min，取出上层有机层21ml置于烧杯中，加入84ml无水乙醇，充分搅拌，静置15min后4000r/min离心10min，取出上层，65℃浓缩至膏状，转入45℃真空干燥箱干燥，得到1.1g最终产品，经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测，以羟基积雪草苷做对照品，其含量为69.3％。实施例3：取200g干燥积雪草粉末(过20目筛)投入2000ml圆底烧瓶，加入1000ml的70％乙醇，60℃水浴加热回流2h，过滤后，残渣重复提取一次，合并滤液，65℃减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液，取出测定其体积为220ml，密度为1.47g/ml；配置双水相体系：在50ml离心管中加入4g硫酸铵，加入25ml蒸馏水，充分震荡混匀，加入25ml无水乙醇，摇匀，得到双水相萃取剂；向双水相体系中加入10ml积雪草浓缩液，震荡混匀后，4000r/min离心10min，取出上层有机层17ml置于烧杯中，加入68ml无水乙醇，充分搅拌，静置15min后4000r/min离心10min，取出上层，65℃浓缩至膏状，转入45℃真空干燥箱干燥，得到1.4g最终产品，经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测，以羟基积雪草苷做对照品，其含量为67.3％。实施例4：取100g干燥积雪草粉末(过40目筛)投入2000ml圆底烧瓶，加入1000ml的70％乙醇，60℃水浴加热回流2h，过滤后，残渣重复提取一次，合并滤液，65℃减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液，取出测定其体积为120ml，密度为1.24g/ml；配置双水相体系：在50ml离心管中加入7.5g硫酸铵，加入15ml蒸馏水，充分震荡混匀，加入15ml无水乙醇，摇匀，得到双水相萃取剂；向双水相体系中加入8ml积雪草浓缩液，震荡混匀后，4000r/min离心10min，取出上层有机层12ml置于烧杯中，加入48ml无水乙醇，充分搅拌，静置15min后4000r/min离心10min，取出上层，65℃浓缩至膏状，转入45℃真空干燥箱干燥，得到0.9g最终产品，经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测，以羟基积雪草苷做对照品，其含量为69.9％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乙醇‑硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1:积雪草晒干，粉碎至一定粒度制得积雪草粉末；步骤2：将积雪草粉末投入圆底烧瓶中，用70％乙醇溶剂，60℃水浴加热回流提取2h，提取后过滤，得到积雪草提取液；步骤3：将积雪草提取液进行真空浓缩，得到积雪草浓缩液；步骤4：利用双水相体系的选择性分离富集积雪草总苷：将步骤3中的积雪草浓缩液配置成密度为1.00～1.5g/ml的积雪草水溶液；取一定体积的积雪草水溶液加入到双水相体系中，震荡摇匀后静置，离心，分离上下相即含有积雪草总苷的上层及含有蛋白质、多糖杂质的下层，取出含有积雪草总苷的样品层；所述的双水相体系由乙醇、硫酸铵和蒸馏水组成；所述双水相体系中，乙醇的体积分数为15～85％，硫酸铵的质量分数为5～45％；步骤5：按照体积比在积雪草总苷的样品层中加入一定量的无水乙醇，震荡，混匀，离心，取出离心液上层；步骤6：将上层减压浓缩，真空干燥，最终得到积雪草总苷。

【技术特征摘要】
1.一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1:积雪草晒干，粉碎至一定粒度制得积雪草粉末；步骤2：将积雪草粉末投入圆底烧瓶中，用70％乙醇溶剂，60℃水浴加热回流提取2h，提取后过滤，得到积雪草提取液；步骤3：将积雪草提取液进行真空浓缩，得到积雪草浓缩液；步骤4：利用双水相体系的选择性分离富集积雪草总苷：将步骤3中的积雪草浓缩液配置成密度为1.00～1.5g/ml的积雪草水溶液；取一定体积的积雪草水溶液加入到双水相体系中，震荡摇匀后静置，离心，分离上下相即含有积雪草总苷的上层及含有蛋白质、多糖杂质的下层，取出含有积雪草总苷的样品层；所述的双水相体系由乙醇、硫酸铵和蒸馏水组成；所述双水相体系中，乙醇的体积分数为15～85％，硫酸铵的质量分数为5～45％；步骤5：按照体积比在积雪草总苷的样品层中加入一定量的无水乙醇，震荡，混匀，离心，取出离心液上层；步骤6：将上层减压浓缩，真空干燥，最终得到积雪草总苷。2.根据权利要求1所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法，其特征在于积雪草粉碎至20～50目。3.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟晓明，朱云，
申请(专利权)人：浙江大学自贡创新中心，
类型：发明
国别省市：四川,51