用于检测生物样品中蜱传微生物的方法和固体支持物技术

本发明专利技术涉及用于检测生物样品中抗体的存在的固体支持物，所述固体支持物包含固定在所述固体支持物上的微生物抗原，其中所述微生物抗原包含至少一种由疏螺旋体(例如伯氏疏螺旋体，埃氏疏螺旋体和伽氏疏螺旋体)的多形性圆形体制备的抗原。本发明专利技术还涉及检测生物样品中蜱传微生物的方法，其中所述固体支持物与生物样品接触。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测生物样品中蜱传微生物的方法和固体支持物专利
本专利技术涉及莱姆病和其他蜱传疾病的检测。本专利技术还涉及生物样品中抗体的检测。特别地，本专利技术提供了用于蜱传疾病(TBD)微生物的多重且多功能检测平台。专利技术背景蜱传微生物(TBM)被定义为通过蜱叮咬传播到宿主的肉眼可见的有毒实体。蜱虫是疾病传播的特殊载体，几乎遍布各大洲，全球物种数量超过850种。欧洲和北美最常见的蜱传疾病(TBD)是由螺旋体疏螺旋体属物种引起的莱姆病1，2。在全球范围内，莱姆病在80个国家流行，包括27个欧盟国家和中亚地区3,4。除了疏螺旋体外，还有许多共感染的其他细菌，甚至是病毒，如巴贝虫，立克次氏体，埃里希氏体，巴尔通体，蜱传脑炎病毒等5,6。美国和欧洲的疾病控制中心分别报告了300,000例和85,000例年度TBD病例。然而，正如世界卫生组织所强调的那样，年度TBD病例总数被严重低估7。对于患者的临床诊断可能具有挑战性，因为TBM感染最初表现为非特异性发热性疾病，伴有或不伴有特定器官系统受累，类似流感样症状2,5,8。为了进一步使治疗方案复杂化，这些患者常常发生支原体，衣原体，爱泼斯坦-巴尔病毒或其他病毒的继发感染6。由于低估，误诊，合并感染和继发感染，治疗不当可能导致严重的临床病况，如疲劳，肌肉/关节疼痛，心血管/认知障碍等的发展9。由于诊断不当，患者会出现严重的临床病况，并且治疗会降低他们的生活质量；因此增加了医疗负担9,10。由于临床症状多种多样且不明确，可靠的诊断方法对于及时准确地治疗患者至关重要4,6,11,12。蜱传感染诊断的挑战在于，由于患者活组织检查中存在的活病原体数量较少而难以实施直接的检测方法，例如培养和聚合酶链式反应(PCR)。这导致了阴性结果，并且不排除患者可能患有的活动性感染或疾病的不同阶段2,5,13。诸如酶联免疫吸附测定(ELISA)的间接方法是有限的抗体测试，其可能在感染或疾病的早期阶段微弱存在或不存在。由于不同细菌物种之间的交叉反应性问题，在这些基于抗体的测定中还出现相当多的假阳性结果。然而，在成功治疗感染后，阳性特异性抗体应答可持续数月或数年。这些现有的方法高达80％不能检测到蜱传疾病第一阶段，并且无法区分急性和慢性感染4,11。进一步增加挑战的是，大多数基于ELISA的诊断是针对动物而不是人类，并且通常针对一种TBM而不是多种TBM3。正在使用的诊断工具并没有配备当前的研究结果。近年来，与疏螺旋体的圆形体相关的科学发展14，疏螺旋体物种形成的重要性15,16，多种微生物感染12和TBD患者中的IgM免疫功能障碍17对于我们对TBD的临床理解提出了挑战。疏螺旋体的圆形体是疏螺旋体的螺旋体多形性结构之一14。多年来，疏螺旋体的多形性形式被标记为细胞壁缺陷(CWD)，L-形式，原生质球，原生质体，繁殖体或囊肿5,8,18-20。直到最近，等人(2015)通过电镜分析得出疏螺旋体为圆形体(RB)而解决了疏螺旋体多形性形态的差异。等人(2015)在人血清中诱导了疏螺旋体RB并且展示了具有完整且柔性细胞壁的球形RB，其代谢不活跃且具有独特生化特征。尽管有关疏螺旋体多形性形态的临床表现已被多次报道，但其在TBD中的致病作用一直存在争议和批评。正在使用的诊断工具无法检测TBD患者的疏螺旋体的圆形体8,21-25。目前的诊断工具可以单独或共同测试不同的疏螺旋体的螺旋体，因为它们在个体中呈现不同的临床表现16。最近，多重TBD诊断工具可以测试不同的重组疏螺旋体蛋白，但TBD已被公认为多种微生物感染疾病，并且正在使用的诊断工具无法诊断个体的继发性机会性感染，共感染以及与感染有关的自身免疫病症5,13,22-25。为了解决正在使用的TBD检测工具中的缺陷，本专利技术提供了一种新的固体支持物，其包含至少一种由疏螺旋体属(伯氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi)，埃氏疏螺旋体(Borreliaafzelii)和伽氏疏螺旋体(Borreliagarinii))的多形性圆形体制备的固定化抗原。本专利技术的结果首次表明，个体的免疫系统可以只对疏螺旋体的圆形体特异性应答，并且这种免疫应答可能与莱姆病的持续阶段有关。专利技术概述本说明书的目的是提供一种新的检测平台，其概述了患者正在经历的TBD的急性，过去且特别是慢性或持续的阶段。另外，本说明书还可以解决与TBD相关的多种微生物和免疫功能障碍方面。因此，在一方面，本说明书提供了用于检测生物样品中抗体的存在的固体支持物，所述固体支持物包含固定在所述固体支持物上的微生物抗原，其中所述微生物抗原包含至少一种由疏螺旋体的多形性圆形体制备的抗原。另一方面，本说明书提供了检测生物样品中蜱传微生物的方法，所述方法包括：(a)使生物样品与固体支持物接触，所述固体支持物包含固定在所述固体支持物上的微生物抗原，以形成包含固定在所述固体支持物上的微生物抗原和源自所述生物样品的抗体的复合物，所述抗体与所述微生物抗原结合，其中所述微生物抗原包含至少一种由疏螺旋体的多形性圆形体制备的抗原；和(c)检测步骤(a)中获得的复合物的存在，其中包含由疏螺旋体属至少一种物种的多形性圆形体制备的抗原的复合物的存在是所述生物样品中存在蜱传微生物的指示。另一方面，本说明书提供了如上定义的固体支持物，其用于诊断莱姆病。另一方面，本说明书提供了如上定义的固体支持物在制备用于检测生物样品中蜱传微生物的诊断测定法中的用途。附图简要说明图1.(A)对所有疏螺旋体抗原的总IgM免疫应答，(B)仅对疏螺旋体的螺旋体的总IgM免疫应答，和(C)仅对疏螺旋体的圆形体的总IgM免疫应答。在1A和1B中，缩写Bb，Ba和Bg分别是狭义伯氏疏螺旋体B31，埃氏疏螺旋体P12和伽氏疏螺旋体FujiP1。图2.(A)对所有疏螺旋体抗原的总IgG免疫应答，(B)仅对疏螺旋体的螺旋体的总IgG免疫应答，和(C)仅对疏螺旋体的圆形体的总IgG免疫应答。在2A和2B中，缩写Bb，Ba和Bg分别是狭义伯氏疏螺旋体B31，埃氏疏螺旋体P12和伽氏疏螺旋体FujiP1。图3.()()针对一种或多种微生物抗原的(A)IgM和(B)IgG免疫应答的评估。使用一定量的443份人血清来评估个体是否仅响应一种微生物抗原还是多种微生物抗原。另外，评估了对20种抗原没有免疫应答的个体。图4.对个体微生物抗原的IgG免疫应答。使用一定量的443份人血清来评估对本研究中使用的每种微生物抗原的免疫应答总数。另外，评估了对20种抗原没有免疫应答的个体。图5.对个体微生物抗原的IgM免疫应答。使用一定量的443种人血清来评估对本研究中使用的每种微生物抗原的免疫应答总数。另外，评估了对20种抗原没有免疫应答的个体。图6：(A)在有和无疏螺旋体的情况下，个体对其他微生物的总IgM免疫应答比例，(B)在有和无疏螺旋体的情况下，个体对多种其他微生物数量的IgM免疫应答，和(C)在有和无疏螺旋体的情况下，个体对特定其他微生物的IgM免疫应答。使用一定量的443份人血清来比较对仅疏螺旋体的螺旋体、仅疏螺旋体的圆形体或者疏螺旋体的螺旋体和圆形体的组合应答的个体之间，对多种其他微生物及其特定类型的IgM免疫应答的频率。术语“其他微生物”包括共感染，继发性和自身免疫抗原，例如汉氏巴尔通体(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测生物样品中抗体的存在的固体支持物，所述固体支持物包含固定在所述固体支持物上的微生物抗原，其中所述微生物抗原包含至少一种由疏螺旋体的多形性圆形体制备的抗原。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.06.03 EP 16397518.81.用于检测生物样品中抗体的存在的固体支持物，所述固体支持物包含固定在所述固体支持物上的微生物抗原，其中所述微生物抗原包含至少一种由疏螺旋体的多形性圆形体制备的抗原。2.根据权利要求1所述的固体支持物，其中所述疏螺旋体选自伯氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi)，埃氏疏螺旋体(Borreliaafzelii)和伽氏疏螺旋体(Borreliagarinii)。3.根据权利要求1或2所述的固体支持物，其中所述固体支持物是微孔板或抗原微阵列。4.根据权利要求1-3中任一项所述的固体支持物，其中所述抗原是所述疏螺旋体的多形性圆形体的裂解物或蛋白质或肽制备物。5.根据权利要求1-4中任一项所述的固体支持物，其中所述固体支持物还包含至少一种由天然螺旋体形式的疏螺旋体制备的固定化抗原。6.根据权利要求5所述的固体支持物，其中所述疏螺旋体选自伯氏疏螺旋体，埃氏疏螺旋体和伽氏疏螺旋体。7.根据权利要求1-6中任一项所述的固体支持物，其中所述固体支持物包含由伯氏疏螺旋体的多形性圆形体制备的固定化抗原和由天然螺旋体形式的伯氏疏螺旋体制备的固定化抗原。8.根据权利要求1-6中任一项所述的固体支持物，其中所述固体支持物包含由埃氏疏螺旋体的多形性圆形体制备的固定化抗原和由天然螺旋体形式的埃氏疏螺旋体制备的固定化抗原。9.根据权利要求1-6中任一项所述的固体支持物，其中所述固体支持物包含由伽氏疏螺旋体的多形性圆形体制备的固定化抗原和由天然螺旋体形式的伽氏疏螺旋体制备的固定化抗原。10.根据权利要求1-6中任一项所述的固体支持物，其中所述固体支持物包含由伯氏疏螺旋体，埃氏疏螺旋体和伽氏疏螺旋体的多形性圆形体制备的固定化抗原。11.根据权利要求1-10中任一项所述的固体支持物，其还包含至少一种由以下制备的固定化抗原：发酵支原体(Mycoplasmafermentans)，肺炎支原体(Mycoplasmapneumonia)，汉氏巴尔通体(Bartonellahenselae)，流产布鲁氏菌(Brucellaabortus)，微小巴贝虫(Babesiamicroti)，沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)，肺炎衣原体(Chlamydiapneumonia)，查菲埃立克体(Ehrlichiachaffeensis)，柯萨奇病毒A16，爱泼斯坦-巴尔病毒，巨细胞病毒，人类细小病毒B19Apobod，蜱传脑炎病...

【专利技术属性】
技术研发人员：莱昂纳·吉尔伯特，库纳尔·加格，莱纳·美利林，卡诺普·普塔塔卡，
申请(专利权)人：泰兹特有限公司，
类型：发明
国别省市：芬兰,FI