杂交用缓冲液组合物和杂交方法技术

本发明专利技术的目的在于，在为了防止目标核酸与核酸探针非特异性杂交而使用封闭用核酸时，实现更优异的目标核酸的检测效率。本发明专利技术中相对于由所述目标核酸和非目标核酸组成的核酸混合物的核酸浓度，用于目标核酸与核酸探针杂交的缓冲液组合物含有浓度为1倍以上的封闭用核酸，所述封闭用核酸含有与非目标核酸中至少包含非检测对象碱基的区域互补的碱基序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】杂交用缓冲液组合物和杂交方法
本专利技术涉及一种杂交用缓冲液组合物及使用该杂交用缓冲液组合物的杂交方法，所述杂交用缓冲液组合物含有封闭用核酸，该封闭用核酸具有与非目标核酸中至少包含非检测对象碱基的区域互补的碱基序列，所述非目标核酸包含非检测对象碱基。
技术介绍
通过与核酸探针杂交来准确检测测定对象的核酸分子，关键在于核酸探针准确识别核酸分子。因此，目前在进行杂交时，使用适当调节反应液的盐浓度和反应温度的方法、使用抑制核酸探针与测定对象以外的核酸分子非特异性杂交的封闭剂的方法。作为封闭剂，例如已知有：鲑鱼精DNA和酵母tRNA等不具有与测定对象的核酸分子和核酸探针互补的碱基序列的核酸成分；SDS(十二烷基硫酸钠)、N月桂酰肌氨酸(N-LS)等表面活性剂；牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白等蛋白质。但是，当非测定对象的核酸分子较多时，由于由核酸成分组成的封闭剂的封闭效果不充分，且表面活性剂和蛋白质不能准确识别碱基序列，因此会出现封闭效果差的问题。另外，专利文献1公开了使用与测定对象的核酸分子中的固有序列杂交，且与含有捕获到固相上的核酸序列的捕获序列探针特异性杂交的封闭探针的方法。专利文献1记载的方法中，捕获序列探针与测定对象的核酸分子杂交后，向反应液中加入封闭探针，由此防止未杂交的捕获序列探针与存在于测定对象的核酸分子中的交叉反应性核酸序列杂交，因此可以提高检测的特异性。另外，专利文献2公开了在使用微阵列检测测定对象的核酸分子时，使用含有锁核酸(LNA)这种修饰核苷酸的寡核苷酸作为封闭剂。此外，专利文献3公开了一种用核酸探针检测测定对象的核酸分子的方法，该方法使用5’末端侧封闭核酸和3’末端侧封闭核酸，所述5’末端侧的封闭核酸与从测定对象的核酸分子中的检测对象碱基起的5’末端侧杂交，而所述3’末端侧的封闭核酸与从检测对象碱基起的3’末端侧杂交。根据专利文献3，探针核酸与目的核酸的杂交中的碱基序列特异性高，可以提高需要高精度检测碱基序列中只有一个碱基不同的SNP分型及具有特定碱基序列的核酸的检测和分离的效率及特异性。另外，专利文献4公开了：当试样中包含目标核酸和非目标核酸时，通过使用含有与非目标核酸互补的碱基序列的封闭用核酸，可以大幅提高基于目标核酸与探针核酸特异性杂交的目标核酸的检测效率，其中，所述目标核酸含有检测对象碱基，所述非目标核酸含有与上述检测对象碱基对应的非检测对象碱基。专利文献4中，优选地，相对于核酸探针的碱基长度，封闭用核酸的长度为60％以上。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特表2004-511220号公报专利文献2：日本特表2005-502346号公报专利文献3：日本特开2010-200701号公报专利文献4：国际公布WO2015/045741号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的问题如上所述，本专利技术的目的在于，在为了防止非目标核酸与核酸探针非特异性杂交而使用封闭用核酸时，实现更优异的目标核酸的检测效率。解决问题的技术方案本专利技术人为了实现上述目的而进行了潜心研究，结果成功地发现能够有效抑制核酸探针与非目标核酸非特异性杂交的封闭用核酸的浓度，从而完成了本专利技术。本专利技术包含以下内容：(1)一种杂交用缓冲液组合物，其是用于目标核酸与核酸探针杂交的缓冲液组合物，其中，所述目标核酸含有检测对象碱基，所述核酸探针含有与所述目标核酸中至少包含检测对象碱基的区域互补的碱基序列，相对于由所述目标核酸和非目标核酸组成的核酸混合物的核酸浓度，所述杂交用缓冲液组合物含有浓度为1倍以上的封闭用核酸，其中，所述非目标核酸含有与所述检测对象碱基对应的非检测对象碱基，所述封闭用核酸含有与非目标核酸中至少包含非检测对象碱基的区域互补的碱基序列。(2)根据(1)所述的杂交用缓冲液组合物，其特征在于，所述封闭用核酸的浓度为所述核酸混合物的核酸浓度的1～5倍。(3)一种杂交方法，其是目标核酸与核酸探针的杂交方法，其中，所述目标核酸含有检测对象碱基，所述核酸探针含有与所述目标核酸中至少包含检测对象碱基的区域互补的碱基序列，所述杂交方法是将含有核酸混合物的溶液与含有封闭用核酸的杂交用缓冲液组合物混合，然后进行所述核酸探针与所述目标核酸的杂交，其中，所述核酸混合物由所述目标核酸和非目标核酸组成，所述非目标核酸含有与所述检测对象碱基对应的非检测对象碱基，所述封闭用核酸含有与非目标核酸中至少包含非检测对象碱基的区域互补的碱基序列，所述杂交用缓冲液组合物含有的封闭用核酸的浓度为相对于所述核酸混合物的核酸浓度的1倍以上。(4)根据(3)所述的杂交方法，其特征在于，相对于所述核酸混合物的核酸浓度，所述杂交用缓冲液组合物含有浓度为1～5倍的封闭用核酸。(5)根据(3)所述的杂交方法，其特征在于，含有所述核酸混合物的溶液所含有的目标核酸的浓度为0.66nM以上。(6)根据(3)所述的杂交方法，其特征在于，在目标核酸和非目标核酸合计为100％时，含有所述核酸混合物的溶液含有0.5％～10％的目标核酸。(7)根据(3)所述的杂交方法，其特征在于，在目标核酸和非目标核酸合计为100％时，含有所述核酸混合物的溶液含有0.5％～10％的目标核酸，并且所含有的目标核酸的浓度为0.66nM以上。(8)根据(3)所述的杂交方法，其特征在于，将所述核酸探针固定在基板上所形成的微阵列与如下混合液接触，所述混合物是所述杂交用缓冲液组合物与含有所述核酸混合物的溶液混合而成的。(9)根据(3)所述的杂交方法，其特征在于，含有所述核酸混合物的溶液是扩增所述目标核酸的核酸扩增反应后的反应液，该反应液与所述杂交用缓冲液组合物混合。本说明书包括作为本申请的优先权基础的日本国专利申请2016-153058号说明书和/或附图所记载的内容。专利技术效果通过本专利技术的杂交用缓冲液组合物和杂交方法，可以抑制以下核酸分子与探针核酸的非特异性杂交，所述核酸分子为除了含有检测对象碱基的目标核酸以外的核酸分子。因此，通过利用本专利技术的杂交用缓冲液组合物和杂交方法，可以大幅提高基于目标核酸与探针核酸特异性杂交的目标核酸的检测效率。附图说明图1-1是表示关于实施例1，从突变型寡DNA和野生型寡DNA的核酸混合物与DNA芯片杂交时的突变型探针的荧光强度比，减去仅使野生型寡DNA杂交时的荧光强度比而得到的荧光强度比之差的特性图。图1-2是表示关于实施例1，从突变型寡DNA和野生型寡DNA的核酸混合物与DNA芯片杂交时的突变型探针的荧光强度比，减去仅使野生型寡DNA杂交时的荧光强度比而得到的荧光强度比之差的特性图。图2-1是表示关于实施例2，从突变型寡DNA和野生型寡DNA的核酸混合物与DNA芯片杂交时的突变型探针的荧光强度比，减去仅使野生型寡DNA杂交时的荧光强度比而得到的荧光强度比之差的特性图。图2-2是表示关于实施例2，从突变型寡DNA和野生型寡DNA的核酸混合物与DNA芯片杂交时的突变型探针的荧光强度比，减去仅使野生型寡DNA杂交时的荧光强度比而得到的荧光强度比之差的特性图。图3-1是表示关于实施例3，从突变型寡DNA和野生型寡DNA的核酸混合物与DNA芯片杂交时的突变型探针的荧光强度比，减去仅使野生型寡DNA杂交时的荧光强度比而得到的荧光强度比之差的特性图。图3-2是表示关于实施例3，从突变型寡DNA和野本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杂交用缓冲液组合物，其是用于目标核酸与核酸探针杂交的缓冲液组合物，其中，所述目标核酸含有检测对象碱基，所述核酸探针含有与所述目标核酸中至少包含检测对象碱基的区域互补的碱基序列，相对于由所述目标核酸和非目标核酸组成的核酸混合物的核酸浓度，所述杂交用缓冲液组合物含有浓度为1倍以上的封闭用核酸，其中，所述非目标核酸含有与所述检测对象碱基对应的非检测对象碱基，所述封闭用核酸含有与非目标核酸中至少包含非检测对象碱基的区域互补的碱基序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.03 JP 2016-1530581.一种杂交用缓冲液组合物，其是用于目标核酸与核酸探针杂交的缓冲液组合物，其中，所述目标核酸含有检测对象碱基，所述核酸探针含有与所述目标核酸中至少包含检测对象碱基的区域互补的碱基序列，相对于由所述目标核酸和非目标核酸组成的核酸混合物的核酸浓度，所述杂交用缓冲液组合物含有浓度为1倍以上的封闭用核酸，其中，所述非目标核酸含有与所述检测对象碱基对应的非检测对象碱基，所述封闭用核酸含有与非目标核酸中至少包含非检测对象碱基的区域互补的碱基序列。2.根据权利要求1所述的杂交用缓冲液组合物，其特征在于，所述封闭用核酸的浓度为所述核酸混合物的核酸浓度的1～5倍。3.一种目标核酸与核酸探针的杂交方法，其中，所述目标核酸含有检测对象碱基，所述核酸探针含有与所述目标核酸中至少包含检测对象碱基的区域互补的碱基序列，所述杂交方法是将含有核酸混合物的溶液与含有封闭用核酸的杂交用缓冲液组合物混合，然后进行所述核酸探针与所述目标核酸的杂交，其中，所述核酸混合物由所述目标核酸和非目标核酸组成，所述非目标核酸含有与所述检测对象碱基对应的非检测对象碱基，所述封闭用核酸含有...

【专利技术属性】
技术研发人员：津田稔也，龟井修一，大场光芳，山野博文，恒富亮一，硲彰一，永野浩昭，
申请(专利权)人：东洋钢钣株式会社，国立大学法人山口大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP