检测转基因成分DNA的方法及其使用的电化学传感器技术

一种检测转基因成分DNA的方法及其使用的电化学传感器，该传感机制是基于Fe3O4‑Au@Ag催化的H2O2还原电流的变化，由于形成夹心型DNA复合物，Fe3O4‑Au@Ag修饰的第三条DNA链与目标DNA杂交后被定量引入到电极表面上且与目标DNA的浓度相关。电化学信号主要来源于Fe3O4‑Au@Ag对H2O2的催化作用，应用DPV响应记录电化学信号，其随目标DNA浓度的增加信号增大。在最佳条件下，制备的生物传感器在DNA检测中具有1.0×10

【技术实现步骤摘要】
检测转基因成分DNA的方法及其使用的电化学传感器
本专利技术属于食品检测及电化学传感器
，具体涉及一种检测转基因成分DNA的方法及其使用的电化学传感器。
技术介绍
DNA是遗传信息的载体，具有储存和传递遗传信息的功能。因此当今时代DNA的序列分析尤为重要。DNA检测分析技术可以定性和定量检测特异性DNA和RNA序列片段、可以应用于肿瘤和传染病的检测、食品质量与安全检测、遗传疾病的早期诊断和基因分子识别及重组DNA的筛选。近年来，随着转基因食品的出现，转基因食品的安全问题成为公正担心的问题。转基因食品特定碱基序列的检测成为目前研究热点。因此目前研究出集快速、准确、简便、价廉等优点于一身的DNA检测分析技术是关键所在。DNA生物传感器可以将电化学、光学、分子生物学及微电子学等结合在一起，而且它快速、简单、便捷、无污染、可定性又可定量、灵敏度高、选择性好等优点成为目前DNA检测分析的重要手段。现已广泛应用于法医鉴定、遗传疾病早期诊断及治疗、转基因食品中DNA的检测等。电化学传感检测方法凭借检测设备简单、使用方便、能耗低、检测快速和易微型化等特点受到研究者广泛的关注，其检测原理主要是利本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种电化学传感器，其特征在于：包括三电极体系和检测池，该三电极体系包括工作电极、Ag/AgCl参比电极和铂丝对电极，所述工作电极为修饰的玻碳电极，该玻碳电极的修饰方法包括下列步骤：第一步：将多壁碳纳米管复合物修饰到预处理后的玻碳电极表面，干燥后电沉积金纳米粒子，蒸馏水洗涤后得到AuNPs/MWCNTs/GCE电极；第二步：将捕获DNA溶液修饰到所述AuNPs/MWCNTs/GCE电极表面，在3～5℃条件下自组装过夜，然后用0.1M的PB缓冲溶液淋洗，以除去未结合的捕获DNA，即得到pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极；第三步：将pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极在35...

【技术特征摘要】
1.一种电化学传感器，其特征在于：包括三电极体系和检测池，该三电极体系包括工作电极、Ag/AgCl参比电极和铂丝对电极，所述工作电极为修饰的玻碳电极，该玻碳电极的修饰方法包括下列步骤：第一步：将多壁碳纳米管复合物修饰到预处理后的玻碳电极表面，干燥后电沉积金纳米粒子，蒸馏水洗涤后得到AuNPs/MWCNTs/GCE电极；第二步：将捕获DNA溶液修饰到所述AuNPs/MWCNTs/GCE电极表面，在3～5℃条件下自组装过夜，然后用0.1M的PB缓冲溶液淋洗，以除去未结合的捕获DNA，即得到pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极；第三步：将pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极在35～39℃下用牛血清白蛋白溶液封闭25～35min，得到BSA/pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极；第四步：将第三步得到的BSA/pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极浸入不同浓度的目标DNA溶液，35～38℃温育0.8～1.2h，然后用0.1M的PB缓冲溶液淋洗，随后再将电极浸入Fe3O4-Au@Ag-sDNA溶液，35～38℃温育0.8～1.2h，用0.1M的PB缓冲溶液淋洗，得到不同浓度的目标DNA修饰的Fe3O4-Au@Ag-sDNA/tDNA/BSA/pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极；所述检测池内容纳有电活性指示剂与缓冲液组成的检测底液，所述电活性指示剂为20mM的过氧化氢溶液，所述缓冲液为pH7.4的0.1M磷酸盐缓冲溶液；在检测过程中，始终保持检测池中通入氮气；不同浓度的目标DNA修饰的Fe3O4-Au@Ag-sDNA/tDNA/BSA/pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极作为工作电极、Ag/AgCl参比电极和铂丝对电极构成三电极体系插入检测池的检测底液中，即为电化学传感器；用0.1M的TE缓冲溶液将硫醇修饰的捕获DNA和信号DNA分别配制成浓度为1μM的pDNA溶液和sDNA溶液，用0.1M的TE缓冲溶液将捕获DNA和信号DNA的互补序列配制不同浓度的目标DNA溶液。2.根据权利要求1所述的电化学传感器，其特征在于：所述玻碳电极的预处理是指依次用粒径为1.0μm、0.3μm和0.05μm的Al2O3粉末抛光打磨，使玻碳电极表面至镜面，再用无水乙醇和双蒸水超声清洗后，氮气吹干备用。3.根据权利要求1所述的电化学传感器，其特征在于：捕获DNA可以与目标DNA部分序列杂交，目标DNA剩余部分序列可以和信号DNA杂交。4.根据权利要求1所述的电化学传感器，其特征在于：所述Fe3O4-Au@Ag-sDNA的制备是将200μL的1μM硫醇修饰的信号DNA与1mL浓度为2.5mg/mL的Fe3O4-Au@Ag混合，并在3～5℃下搅拌过夜得...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶永康，毛慎，操小栋，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34