养精种玉方剂的指纹图谱构建方法和检测方法技术

本发明专利技术公开一种养精种玉方剂的指纹图谱构建方法和检测方法。该构建方法包括如下步骤：供试品溶液制备；对照品溶液制备；指纹图谱的构建：吸取所述的供试品溶液、对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，得到具有共有特征峰的养精种玉方剂指纹图谱。发明专利技术人在长久经验积累的基础上以及大量实验后，挑选阿魏酸、芍药苷、莫诺苷、马钱苷作为参照品构建指纹图谱，不仅能够很好的表征养精种玉汤这一经典剂型的质量而且还能够表征其现代制剂养精种玉煎膏、养精种玉颗粒剂的质量。特别是，配合选用合适的色谱条件构建指纹图谱，不仅能够定性、定量表征养精种玉汤，而且还能定性、定量的表征养精种玉煎膏、养精种玉颗粒剂。

【技术实现步骤摘要】
养精种玉方剂的指纹图谱构建方法和检测方法
本专利技术涉及中药制剂质量控制领域，特别是涉及养精种玉方剂的指纹图谱构建方法和检测方法。
技术介绍
养精种玉汤是传统的中药方剂，来源于《傅青主女科》卷上，其处方为大熟地30克(九蒸)、当归15克(酒洗)、白芍15克(酒炒)、山萸肉15克(蒸熟)，主要用于肾亏血虚，身体瘦弱，久不受孕。目前市场上在售的养精种玉方的制剂有养精种玉煎膏和养精种玉颗粒，已有文献对养精种玉煎膏进行了指纹图谱和含量测定研究，对养精种玉颗粒进行了含量测定研究，但研究仅是分别建立了多批养精种玉煎膏的指纹图谱比较方法，并对煎膏和颗粒剂中的芍药苷和马钱苷两个成分的建立了含量测定。关于养精种玉方的制剂的检测，目前还没有统一的方法标准对汤剂、颗粒剂、煎膏进行全面测定。因此，亟待提供一种统一的方法对养精种玉汤剂、养精种玉颗粒剂、养精种玉煎膏等养精种玉方剂进行测定。
技术实现思路
基于此，本专利技术的主要目的是提供一种养精种玉方剂的指纹图谱的构建方法。本专利技术的主要目的是通过以下技术方案实现的：一种养精种玉方剂的指纹图谱的构建方法，该构建方法包括如下步骤：供试品溶液制备：将养精种玉汤剂制备成冻干粉，将所述冻干粉溶于有机溶剂，过滤，得供试品溶液；对照品溶液制备：将阿魏酸、芍药苷、莫诺苷、马钱苷对照品溶于有机溶剂，得对照品溶液；指纹图谱的构建：吸取所述的供试品溶液、对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，得到具有共有特征峰的养精种玉方剂指纹图谱。在其中一些实施例中，所述测定采用的色谱条件包括：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.08％～0.12％的磷酸水溶液为流动相B；梯度洗脱方式：0min～25min，流动相A的体积百分数由5％变化至15％，流动相B的体积百分数由95％变化至85％；流动相由25min～40min，流动相A的体积百分数由15％变化至20％，流动相B的体积百分数由85％变化至80％；40min～60min，流动相A的体积百分数由20％变化至50％，流动相B的体积百分数由80％变化至50％。在其中一些实施例中，所述的流动相的流速为0.8mL/min～1.2mL/min；所述的色谱柱的柱温为25℃～35℃；所述测定采用的检测波长为210nm～250nm。在其中一些实施例中，所述的有机溶剂为体积浓度为70％～100％的甲醇溶液。在其中一些实施例中，每25mL～50mL所述的有机溶剂中加入所述冻干粉0.5g～1g。在其中一些实施例中，所述冻干粉的制备包括：取熟地黄、酒当归、酒白芍、酒萸肉饮片，按重量比为2：1：1：1混合，用水浸泡30分钟；煎煮两次：第一次加水为饮片总重量的8倍，煎煮1小时，滤过，滤液备用；第二次加水为饮片总重量的8倍，煎煮1小时，滤过，滤液与第一次煎煮所得滤液合并，减压浓缩至投料量与浓缩液重量比为1：1～1：1.5的清膏后，加入占所述清膏重量为7％～15％的微粉硅胶，在-20℃到-45℃预冻，再在-80℃、＜100Pa的条件下冻干成粉末，即得冻干粉。在其中一些实施例中，每1mL所述的对照溶液中含阿魏酸0.6μg～24μg、芍药苷2.1μg～84.2μg、莫诺苷2.0μg～80.6μg、马钱苷2.5μg～101.3μg。本专利技术的另一目的是提供一种养精种玉方剂的测定方法，该测定方法包括如下步骤：供试品溶液制备：将待测养精种玉方剂溶于有机溶剂，过滤，得供试品溶液；对照品溶液制备：将阿魏酸、芍药苷、莫诺苷、马钱苷对照品溶于有机溶剂，得对照品溶液；供试品溶液测定：吸取所述的供试品溶液、对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行测定，得到待测养精种玉方剂的图谱；比较所述待测养精种玉方剂的图谱与杉树构建的指纹图谱中各峰的相对保留时间和/或各峰的峰面积，完成对待测养精种玉方剂的定性和/或定量测定。本专利技术所述的养精种玉方剂包括颗粒剂、浸膏、汤剂。在其中一些实施例中，所述测定采用的色谱条件包括：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.08％～0.12％的磷酸水溶液为流动相B；梯度洗脱方式：0min～25min，流动相A的体积百分数由5％变化至15％，流动相B的体积百分数由95％变化至85％；流动相由25min～40min，流动相A的体积百分数由15％变化至20％，流动相B的体积百分数由85％变化至80％；40min～60min，流动相A的体积百分数由20％变化至50％，流动相B的体积百分数由80％变化至50％。在其中一些实施例中，所述的流动相的流速为0.8mL/min～1.2mL/min；所述的色谱柱的柱温为25℃～35℃；所述测定采用的检测波长为210nm～250nm。在其中一些实施例中，所述的有机溶剂为体积浓度为70％～100％的甲醇溶液。与现有技术相比，本专利技术具备如下有益效果：专利技术人在长久经验积累的基础上以及大量实验后，挑选阿魏酸、芍药苷、莫诺苷、马钱苷作为参照品构建指纹图谱，不仅能够很好的表征养精种玉汤这一经典剂型的质量而且还能够表征其现代制剂养精种玉煎膏、养精种玉颗粒剂的质量。特别是，配合选用合适的色谱条件构建指纹图谱，不仅能够定性、定量表征养精种玉汤，而且还能定性、定量的表征养精种玉煎膏、养精种玉颗粒剂。以此指纹图谱构建的测定方法，不仅可使养精种玉汤标准汤剂定性、定量同步进行，关键是还能够同时适用于养精种玉汤现代制剂养精种玉煎膏、养精种玉颗粒剂的定性定量测试，很好的揭示养精种玉方的物质传递。并且该测定方法具有简便、稳定、精密度高及重现性好等特点。附图说明图1为实施例1中养精种玉标准汤剂的指纹图谱和含量(专属性试验)图谱；其中，峰6为莫诺苷，峰7为马钱苷，峰11为芍药苷，峰8为异绿原酸C，峰12为阿魏酸；图2为实施例1中9批养精种玉标准汤剂的指纹图谱和含量图谱；图3为实施例1中养精种玉标准汤剂的对照指纹图谱；图4为实施例1中9批养精种玉标准汤剂的相似度评价结果；图5为实施例1中精密度试验结果叠加图；图6为实施例1中重复性实验结果叠加图；图7为实施例1中中间精密度试验-不同人员结果叠加图；图8为实施例1中中间精密度试验-不同日期结果叠加图；图9为实施例1中中间精密度试验-不同仪器结果叠加图；图10为实施例1中稳定性试验结果叠加图；图11为实施例1中阿魏酸标准曲线；图12为实施例1中芍药苷标准曲线；图13为实施例1中莫诺苷标准曲线；图14为实施例1中马钱苷标准曲线；图15为实施例2的实验结果；图16为对比例1的图谱结果；图17为对比例2的图谱结果；图18为对比例3的图谱结果；图19为对比例4的图谱结果；图20为对比例5的图谱结果；图21为对比例6的图谱结果；图22为对比例7的图谱结果。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种养精种玉方剂的指纹图谱的构建方法，其特征在于，该构建方法包括如下步骤：供试品溶液制备：将养精种玉汤剂制备成冻干粉，将所述冻干粉溶于有机溶剂，过滤，得供试品溶液；对照品溶液制备：将阿魏酸、芍药苷、莫诺苷、马钱苷对照品溶于有机溶剂，得对照品溶液；指纹图谱的构建：吸取所述的供试品溶液、对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，得到具有共有特征峰的养精种玉方剂指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.一种养精种玉方剂的指纹图谱的构建方法，其特征在于，该构建方法包括如下步骤：供试品溶液制备：将养精种玉汤剂制备成冻干粉，将所述冻干粉溶于有机溶剂，过滤，得供试品溶液；对照品溶液制备：将阿魏酸、芍药苷、莫诺苷、马钱苷对照品溶于有机溶剂，得对照品溶液；指纹图谱的构建：吸取所述的供试品溶液、对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，得到具有共有特征峰的养精种玉方剂指纹图谱。2.根据权利要求1所述的养精种玉方剂的指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述测定采用的色谱条件包括：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.08％～0.12％的磷酸水溶液为流动相B；梯度洗脱方式：0min～25min，流动相A的体积百分数由5％变化至15％，流动相B的体积百分数由95％变化至85％；流动相由25min～40min，流动相A的体积百分数由15％变化至20％，流动相B的体积百分数由85％变化至80％；40min～60min，流动相A的体积百分数由20％变化至50％，流动相B的体积百分数由80％变化至50％。3.根据权利要求2所述的养精种玉方剂的指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述的流动相的流速为0.8mL/min～1.2mL/min；所述的色谱柱的柱温为25℃～35℃；所述测定采用的检测波长为210nm～250nm。4.根据权利要求1至3任一项所述的养精种玉方剂的指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述的有机溶剂为体积浓度为70％～100％的甲醇溶液。5.根据权利要求1至3任一项所述的养精种玉方剂的指纹图谱的构建方法，其特征在于，每25mL～50mL所述的有机溶剂中加入所述冻干粉0.5g～1g。6.根据权利要求1至3任一项所述的养精种玉方剂的指纹图谱的构建方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚娜，陈桂生，康志英，李雪银，汪静，黄燕明，曾锦丽，
申请(专利权)人：广州市香雪制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44