一种同时测定地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时测定地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物含量的方法，包括：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备和高效液相色谱检测分析等步骤。本发明专利技术首次同时检测地蜈蚣药材中5种黄酮类活性成分，即阿福豆素‑3‑O‑α‑L‑鼠李糖、紫云英苷、Multiflorin B、阿福豆苷和Multiflorin A。本发明专利技术的检测方法灵敏度高，重复性好，回收率高。本发明专利技术建立了以地蜈蚣中主要化学成分为检测指标的地蜈蚣药材的检测方法，对于地蜈蚣药材的质量控制研究和指导临床应用具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物的方法
本专利技术属于检测
，具体涉及一种同时测定地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物的方法。
技术介绍
地蜈蚣来源于水龙骨科植物多羽节肢蕨Arthromerismairei（Brause）Ching。别名搜山虎、过山龙等，是云南彝族习用药材，彝药名为“我背诺”，意译为“肚子胀的药”。其味苦，性微寒，归脾、胃经，具活络、消积滞、通便、降火之功，用于治疗食积胃痛、腹胀、便秘、风湿筋骨疼痛、坐骨神经痛、头痛、牙痛。该植物主要分布在云南、西藏、四川等地，缅甸和印度北部也有。地蜈蚣药材为制剂“清肠通便胶囊”处方药材之一，目前被收载于《云南省药材标准》（一册）（2005版）。目前，已报道从地蜈蚣中分离出4个黄酮苷类化合物，如：蔷薇苷、山奈素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖（1→4）-α-L-吡喃鼠李糖苷、arthromerinA、arthromerinB。专利技术人在研究过程中，首次从地蜈蚣药材中分离得到5个黄酮类化合物：MultiflorinA、MultiflorinB、紫云英苷、阿福豆苷和阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖，其中MultiflorinA、MultiflorinB、阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖是其主要成分，紫云英苷和阿福豆苷是具有较强生理活性的黄酮苷类成分。这5个黄酮苷类成分是地蜈蚣药材的活性成分，建立以这5个黄酮苷类成分为检测指标的地蜈蚣药材检测方法，对于地蜈蚣药材和相关制剂的质量控制具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种同时测定地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物的方法。本专利技术通过以下方法实现本专利技术目的，包括供试品溶液制备、对照品溶液制备、检测和分析步骤，具体包括（1）供试品溶液的制备：取地蜈蚣药材粉末约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇水50mL，称定质量，加热回流；放冷，再称定重量，加溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取滤液5mL置25mL的容量瓶中，加甲醇水定容，摇匀，即得供试品溶液；（2）对照品溶液制备：A、精密称定阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖对照品，用50%甲醇配制成浓度为20μg•mL-1的对照品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤，即得对照品溶液A，备用；B、分别精密称定紫云英苷、MultiflorinB、阿福豆苷、MultiflorinA对照品，混合后用甲醇配制成紫云英苷浓度0.8μg•mL-1、MultiflorinB浓度54μg•mL-1、阿福豆苷浓度1.5μg•mL-1、MultiflorinA浓度20μg•mL-1的混合溶液，得到对照品溶液即得对照品溶液B，备用；（3）检测：将供试品溶液、对照品溶液A和对照品溶液B注入高效液相色谱仪进行检测；（4）以外标法进行地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物成分的定量分析：以已知浓度的黄酮类化合物的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，对供试品溶液进行测定，测得检出供试品溶液中5种黄酮类化合物成分的色谱峰面积，代入标准曲线，求得地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物成分的含量。步骤（1）中所述的地蜈蚣药材粉末的粒度为65目。步骤（1）中所述的甲醇水浓度为75%甲醇。步骤（1）中所述的加热回流时间为1h。步骤（1）中所述的提取温度为70℃±2℃。步骤（3）中所述的供试品溶液的高效液相色谱仪色谱条件为：A、色谱柱：WatersC18（4.6nm×250mm，5μm），流动相为：V(甲醇)∶V(水)=35：65等度洗脱；流速为1.0mL·min-1，柱温为25℃，检测波长为230nm，进样量10μL；B、色谱柱：WatersSunFireC18(4.6×250mm，5μm)，流动相为0.2%磷酸水溶液(C)-甲醇(D)，梯度洗脱：0～30min，C：D=53：47；30～40min，47%D→66%D；流速1.0mL·min-1，检测波长265nm，柱温25℃，进样量10μL；步骤（3）中所述的对照品溶液A的高效液相色谱仪色谱条件为：色谱柱：WatersC18（4.6nm×250mm，5μm），流动相为：V(甲醇)∶V(水)=35：65等度洗脱；流速为1.0mL·min-1，柱温为25℃，检测波长为230nm，进样量10μL。步骤（3）中所述的对照品溶液B的高效液相色谱仪色谱条件为：色谱柱：WatersSunFireC18(4.6×250mm，5μm)，流动相为0.2%磷酸水溶液(C)-甲醇(D)，梯度洗脱：0～30min，C：D=53：47；30～40min，47%D→66%D；流速1.0mL·min-1，检测波长265nm，柱温25℃，进样量10μL。本专利技术首次明确地蜈蚣药材中含有MultiflorinA、MultiflorinB、阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖、紫云英苷和阿福豆苷这5个黄酮类化合物，并以这5个化合物为检测指标，分别建立了测定阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖的方法，以及同时测定MultiflorinA、MultiflorinB、紫云英苷和阿福豆苷的方法，对于地蜈蚣药材及其相关制剂的质量控制研究和指导临床应用具有重要意义。附图说明图1为5个黄酮类化合物结构式其中：1、阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖；2、紫云英苷；3、MultiflorinB；4、阿福豆苷；5、MultiflorinA。图2为阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖对照品溶液的高效液相色谱图其中：1、阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖。图3为地蜈蚣药材样品溶液的高效液相色谱图（测定阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖，色谱条件A）其中：1、阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖。图4为阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖标准曲线。图5为阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖的核磁共振氢谱（1HNMR）图。图6为阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖的核磁共振碳谱（13CNMR）图。图7为MultiflorinA、MultiflorinB、紫云英苷和阿福豆苷混合对照品溶液的高效液相色谱图其中：1、紫云英苷；2、MultiflorinB；3、阿福豆苷；4、MultiflorinA。图8为地蜈蚣药材样品溶液的高效液相色谱图（同时测定MultiflorinA、MultiflorinB、紫云英苷和阿福豆苷，色谱条件B）其中：1、紫云英苷；2、MultiflorinB；3、阿福豆苷；4、MultiflorinA。图9为紫云英苷的核磁共振氢谱（1HNMR）图。图10为紫云英苷的核磁共振碳谱（13CNMR）图。图11为MultiflorinB的核磁共振氢谱（1HNMR）图。图12为MultiflorinB的核磁共振碳谱（13CNMR）图。图13为阿福豆苷的核磁共振氢谱（1HNMR）图。图14为阿福豆苷的核磁共振碳谱（13CNMR）图。图15为MultiflorinA的核磁共振氢谱（1HNMR）图。图16为MultiflorinA的核磁共振碳谱（13CNMR）图。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术方法作进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不局限于所述内容，实施例中如无特殊说明，使用试剂为常规市售试剂，或按常规方法制得的试剂。本专利技术涉及一种同时测定地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物的方法通过以下方法实现本专利技术目的，包括供试品溶液制备、对照品溶液制备、检测和分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时测定地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物含量的方法，其特征在于包括供试品溶液制备、对照品溶液制备、检测和分析步骤，具体包括（1）供试品溶液的制备：取地蜈蚣药材粉末约1 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇水50 mL，称定质量，加热回流；放冷，再称定重量，加溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取滤液5 mL置25 mL 的容量瓶中，加甲醇水定容，摇匀，即得供试品溶液；（2）对照品溶液制备：A、精密称定阿福豆素‑3‑O‑α‑L‑鼠李糖对照品，用50%甲醇配制成浓度为20 μg•mL‑1的对照品溶液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得对照品溶液A，备用；B、分别精密称定紫云英苷、Multiflorin B、阿福豆苷、Multiflorin A对照品，混合后用甲醇配制成紫云英苷浓度0.8 μg•mL‑1、Multiflorin B浓度54 μg•mL‑1、阿福豆苷浓度1.5 μg•mL‑1、Multiflorin A浓度20 μg•mL‑1的混合溶液，得到对照品溶液即得对照品溶液B，备用；（3）检测：将供试品溶液、对照品溶液A和对照品溶液B注入高效液相色谱仪进行检测；（4）以外标法进行地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物成分的定量分析：以已知浓度的黄酮类化合物的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，对供试品溶液进行测定，测得检出供试品溶液中5种黄酮类化合物成分的色谱峰面积，代入标准曲线，求得地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物成分的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种同时测定地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物含量的方法，其特征在于包括供试品溶液制备、对照品溶液制备、检测和分析步骤，具体包括（1）供试品溶液的制备：取地蜈蚣药材粉末约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇水50mL，称定质量，加热回流；放冷，再称定重量，加溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取滤液5mL置25mL的容量瓶中，加甲醇水定容，摇匀，即得供试品溶液；（2）对照品溶液制备：A、精密称定阿福豆素-3-O-α-L-鼠李糖对照品，用50%甲醇配制成浓度为20μg•mL-1的对照品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤，即得对照品溶液A，备用；B、分别精密称定紫云英苷、MultiflorinB、阿福豆苷、MultiflorinA对照品，混合后用甲醇配制成紫云英苷浓度0.8μg•mL-1、MultiflorinB浓度54μg•mL-1、阿福豆苷浓度1.5μg•mL-1、MultiflorinA浓度20μg•mL-1的混合溶液，得到对照品溶液即得对照品溶液B，备用；（3）检测：将供试品溶液、对照品溶液A和对照品溶液B注入高效液相色谱仪进行检测；（4）以外标法进行地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物成分的定量分析：以已知浓度的黄酮类化合物的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，对供试品溶液进行测定，测得检出供试品溶液中5种黄酮类化合物成分的色谱峰面积，代入标准曲线，求得地蜈蚣药材中5种黄酮类化合物成分的含量。2.根据权利要求1所述的测定方法，步骤（1）中所述的地蜈蚣药材粉末的粒度为65目。3.根据权利要求1所述的测定方法，步骤（1）中所述的甲醇水浓度为75%甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨竹雅，李晓红，
申请(专利权)人：云南中医学院，
类型：发明
国别省市：云南,53