The present invention provides a separated mutant DNA polymerase and its preparation method and application. The mutant DNA polymerase consists of (1) or (2) proteins: (1) proteins with amino acid sequences as shown in SEQ ID NO: 2; (2) proteins with at least 80% homology to (1) proteins with the functions of (1) proteins. The mutant DNA polymerase in the invention has better blood tolerance than the wild type and can be used in direct amplified PCR reaction system without nucleic acid extraction, such as in samples containing blood, plasma, serum, hemoglobin and/or hemoglobin.
【技术实现步骤摘要】
一种突变体DNA聚合酶及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物学领域，特别是涉及一种突变体DNA聚合酶及其制备方法和应用。
技术介绍
传统的PCR是将样本中的DNA提取纯化之后进行扩增，实际应用时，提取纯化DNA需要消耗大量的时间，并且可能导致目的基因的丢失，所以市场更需要能够用于直接扩增样本的TaqDNA聚合酶。而未经DNA提取纯化的样本中含有很多抑制剂会严重抑制PCR反应，含有较强抑制剂的样本主要包括血液、土壤等。其中的抑制剂主要作用于TaqDNA聚合酶，主要是通过降低酶的延伸速度，也有报道说主要是与DNA聚合酶的失活或靶DNA和引物的捕获或降解相关。用血液进行直接PCR广泛应用于诊断和法医分析，例如：遗传病的诊断、微生物和病毒感染的诊断、血型分析、环境检测、人类DNA鉴定等。血液对PCR有很强的抑制作用，目前广泛使用的TaqDNA聚合酶在0.2％的全血液存在下就不能扩增了。因此，需要对上述抑制剂更具抗性且适用于使用血样的PCR反应的试剂，如DNA聚合酶。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术提供一种突变体DNA聚合酶及其制备方法和应用。本专利技术的...
【技术保护点】
1.一种分离的突变体DNA聚合酶，其特征在于，所述突变体DNA聚合酶为如下(1)或(2)的蛋白质：(1)氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的蛋白质；(2)与(1)中所述蛋白质具有至少80％同源性，且能在含有血液、血浆、血清、血红蛋白和/或红血素的样本中发挥DNA聚合酶功能。
【技术特征摘要】
1.一种分离的突变体DNA聚合酶，其特征在于，所述突变体DNA聚合酶为如下(1)或(2)的蛋白质：(1)氨基酸序列如SEQIDNO：2所示的蛋白质；(2)与(1)中所述蛋白质具有至少80％同源性，且能在含有血液、血浆、血清、血红蛋白和/或红血素的样本中发挥DNA聚合酶功能。2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述分离的多核苷酸编码如权利要求1所述的突变体DNA聚合酶。3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有如权利要求2所述的分离的多核苷酸。4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求3所述的重组表达载体或基因组中整合有外源的如权利要求2所述的分离的多核苷酸。5.一种制备如权利要求1所述的突变体DNA聚合酶的方法，包括如下步骤：在合适的条件下培养如权利要求4所述的宿主细胞，使之表达所述突变体DNA聚合酶。6.一种如权利要求1所述的突变体DNA聚合酶的纯化方法，包括如下步骤：(i)将表达目的蛋白的宿主细胞离心，重悬后用溶菌酶进行处理；(ii)水浴，离心，弃沉淀，收集上清液一；(iii)去除上清液一中的核酸和其他杂质，离心，收集上...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晨曦，吴晓渊，张斌，
申请(专利权)人：南京市胸科医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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