对微生物群恢复治疗(MRT)组合物所包含活细菌进行定量的分析方法技术

用于对经由鼻胃管、灌肠和/或胶囊或片剂而递送的药品中的活细菌微生物的定量。可将基于分子的方法，如PMA(叠氮溴化丙啶)‑qPCR(定量聚合酶链式反应)检测用于活细菌的定量。通过应用PMA处理并结合qPCR，可以测定样品中活细菌细胞的数量。

Quantitative analysis of live bacteria contained in microbial community recovery therapy (MRT) compositions

Used to quantify living bacteria and microorganisms in drugs delivered via nasogastric tube, enema and/or capsules or tablets. Molecular-based methods such as PMA (propidium azide bromide)qPCR (quantitative polymerase chain reaction) can be used to quantify living bacteria. The number of living bacterial cells in the samples could be determined by PMA treatment combined with qPCR.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对微生物群恢复治疗(MRT)组合物所包含活细菌进行定量的分析方法相关申请的交叉引用依据美国法典第35章第119条，本申请要求于2016年5月13日提交的美国临时专利申请序列号62/336,184的优先权，该专利申请的全部内容以参考的方式并入本文中。
本公开是关于对用于患者治疗的组合物进行分析的方法。
技术介绍
已开发出用于对消化道疾病和/或病况进行治疗的多种组合物和方法。就已知的组合物和方法而言，各自具有某些优点和缺点。对于提供用于对消化道疾病和/或病况进行治疗的替代组合物和方法存在着持续的需求。
技术实现思路
用于对微生物群恢复治疗(MRT)药物中的活细菌微生物进行定量的方法可包括：由MRT药物制备MRT药物测试样品、和由对照样品制备对照测试样品。可用叠氮溴化丙啶(PMA)对MRT药物测试样品和对照测试样品进行处理，然后等分入测试板的多个独立孔中。可使测试板暴露于光达在10分钟范围内的时间。可从在多个独立孔的每个孔中的MRT药物测试样品和在多个独立孔中的每个孔中的对照测试样品中提取出DNA样品。可用分子级水将来自在多个独立孔的每个孔中的MRT药物测试样品和在多个独立孔的每个孔中的对照测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于对微生物群恢复治疗(MRT)药物中的活细菌微生物进行定量的方法，所述方法包括：由微生物群恢复治疗药物制备微生物群恢复治疗药物测试样品；由对照样品制备对照测试样品；用叠氮溴化丙啶(PMA)对所述MRT药物测试样品和所述对照测试样品进行处理；将一部分的所述微生物群恢复治疗药物测试样品等分入测试板的多个独立孔中；将一部分的所述对照测试样品等分入所述测试板的多个独立孔中；使所述测试板暴露于光达在10分钟范围内的时间；从在所述多个独立孔的每个孔中的所述微生物群恢复治疗药物测试样品和在所述多个独立孔的每个孔中的所述对照测试样品中提取出DNA样品；用分子级水将来自在所述多个独立孔的每个孔中的所述...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.13 US 62/336,1841.一种用于对微生物群恢复治疗(MRT)药物中的活细菌微生物进行定量的方法，所述方法包括：由微生物群恢复治疗药物制备微生物群恢复治疗药物测试样品；由对照样品制备对照测试样品；用叠氮溴化丙啶(PMA)对所述MRT药物测试样品和所述对照测试样品进行处理；将一部分的所述微生物群恢复治疗药物测试样品等分入测试板的多个独立孔中；将一部分的所述对照测试样品等分入所述测试板的多个独立孔中；使所述测试板暴露于光达在10分钟范围内的时间；从在所述多个独立孔的每个孔中的所述微生物群恢复治疗药物测试样品和在所述多个独立孔的每个孔中的所述对照测试样品中提取出DNA样品；用分子级水将来自在所述多个独立孔的每个孔中的所述微生物群恢复治疗药物测试样品和在所述多个独立孔的每个孔中的所述对照测试样品的所述DNA样品加以稀释；将定量聚合酶链式反应(qPCR)混合物添加到第二测试板的多个孔中；将来自在所述多个独立孔的每个孔中的所述微生物群恢复治疗药物测试样品和在所述测试板的多个独立孔的每个孔中的所述对照测试样品的经稀释DNA样品添加到所述第二测试板的所述多个孔中；将所述第二测试板离心；将所述第二测试板置于qPCR检测系统中并启动热循环器程序；和计算在所述第二测试板的多个独立孔中的各测试样品的总集落形成单位(CFU)每毫升(mL)(CFU/mL)。2.根据权利要求1所述的方法，其中制备所述微生物群恢复治疗药物包括将大约9.9毫升的0.9％生理盐水添加到100微升的所述微生物群恢复治疗产品中。3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述对照样品包括阳性对照样品。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述阳性对照样品包括包含微生物群恢复治疗药物的产品参考标准品。5.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述对照样品包括阴性对照样品。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述对照样品包括多于一个的对照样品。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述多于一个的对照样品包括阳性对照样品和阴性对照样品。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中用PMA对所述MRT药物测试样品和所述对照测试样品进行处理包括：将20毫摩尔PMA储备溶液的1.25微升(μL)添加到所述微生物群恢复治疗药物测试样品和所述对照测试样品的500μL等分部分中。9.根据权利要求8所述的方法，其中用叠氮溴化丙啶(PMA)对所述微生物群恢复治疗药物测试样品和所述对照测试样品进行处理还包括：将所述微生物群恢复治疗药物测试样品和所述对照测试样品与所述叠氮溴化丙啶机械地混合。10.根据权利要求8-9中任一项所述的方法，其中用叠氮溴化丙啶(...

【专利技术属性】
技术研发人员：贝丝·安妮舒库德拉克·布朗，约舒亚·埃里克森，马亚·伯勒斯，伊恩·辛克莱，考特尼·R·琼斯，
申请(专利权)人：雷柏奥提斯有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US