一种石油污染土壤微生物处理方法技术

本发明专利技术涉及一种石油污染土壤微生物处理方法，属于污染土壤修复技术领域。技术方案是：用污染土壤为基材培养石油降解混合菌液，从中筛选出即能降解石油又产生表面活性剂能力最强的单菌落；石油降解混合菌液和表面活性剂菌均分别通过石油降解菌培养基制成体积为0.5m

【技术实现步骤摘要】
一种石油污染土壤微生物处理方法
本专利技术涉及一种石油污染土壤微生物处理方法，属于污染土壤修复

技术介绍
原油在加工、使用及运输工程中容易造成泄漏事故，造成了大面积的土壤污染。石油烃是石油用于人类不同活动而产生的化学物质，是一类普遍存在于环境中的优先有毒有机污染物，在环境中的持久性很强，很难被降解。其中一些PAHs不仅具有强烈的致癌、致畸和致突变毒性，还能通过食物链在动植物体内逐级富集和放大，进而对人类健康造成严重的威胁。随着石油类污染土壤面积的迅速扩大，如何经济有效地加以修复和控制已成为当今环境保护领域一大技术难点。石油污染土壤修复方法，主要有物理、化学和生物的三种方法，这些技术只是在小面积范围内的理论性研究。物理和化学方法主要是热处理和化学浸出和水洗法，热处理法是通过焚烧或煅烧，可净化土壤中大部分有机污染物，但同时亦破坏土壤结构和组分，且价格昂贵而很难实施；化学浸出和水洗也可以获得较好的除油效果，但所用的化学试剂的二次污染问题限制了其应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种石油污染土壤微生物处理方法，通过石油降解液体培养基培养降解石油污染物的微生物，菌剂中微生物全部为污染土壤中菌种，无外来菌种，从而解决了菌剂使用过程的拒抗效应，通过微生物来修复受污染的土壤，解决
技术介绍
存在的上述问题。本专利技术的技术方案是：一种石油污染土壤微生物处理方法，步骤如下：（1）提取石油污染物：用萃取剂从污染土壤中提取石油污染物，并将萃取剂蒸发掉待用；（2）石油污染物降解菌的富集和培养：取10g污染土壤加入已无菌的100ml石油降解液体培养基中，在温度为30℃，在转速为150转/min的摇床中培养5天后，再按10%接种率，接种在另一100ml石油降解液体培养基中，连续富集培养6次，形成石油降解混合菌液；所述石油降解液体培养基：将3g的NaNO3、1g的K2HPO4、0.5g的MgSO4·7H2O、0.5g的KCl、0.01g的FeSO4·7H2O和0.02gCaCl2加入步骤（1）中提取的石油污染物中，提取的石油污染物的体积为1ml，用蒸馏水稀释至1000ml，PH为7.2-7.6；（3）用步骤（2）中富集培养的石油降解混合菌液做为种子液，按10%接种率，连续用石油降解液体培养基发酵培养至0.5m3，形成体积为0.5m3的石油降解菌；（4）表面活性剂菌的筛选：用石油降解液体培养基将步骤②培养的石油降解混合菌液划线分离，将分离出的单菌落，分别用石油降解液体培养基发酵培养3天，得到培养液；取1ml培养液放入盛有60ml蒸馏水和8ml液体石蜡的90mm玻璃平皿中；在玻璃平皿中，如果产生排油圈，证明培养液中存在表面活性剂，排油圈越大，表面活性剂能力越强，从中筛选出表面活性剂能力最强的菌，该菌为表面活性剂菌；（5）表面活性剂产生菌培养：将步骤（4）选出的表面活性剂菌，按10%接种率，连续用石油降解液体培养基发酵培养至0.5m3，形成体积为0.5m3的表面活性剂菌；（6）将步骤（3）和步骤（5）制成的体积为0.5m3的石油降解菌和体积为0.5m3的表面活性菌用9m3牛肉蛋白胨液体培养基混合发酵至10m3，形成菌剂；所述牛肉蛋白胨液体培养基：牛肉蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g和蒸馏水1000ml；（7）测定污染土壤中有机碳、氮、磷的含量，按重量比，C：Ｎ：Ｐ=100：10：1的比例进行补充营养；按重量比，将6%的木屑和5-10%的菌剂与污染土壤混合搅拌均匀，铺在地面上，厚度为300mm；维持污染土壤的水份为饱和含水量的30－60%，每2-5天翻耕一次，修复周期50-80天。本专利技术的积极效果：通过微生物土壤得到原位修复，没有二次污染，成本低、处理效果好。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明：实施例一：一种石油污染土壤微生物处理方法，步骤如下：（1）提取石油污染物：用萃取剂从污染土壤中提取石油污染物，并将萃取剂蒸发掉待用；（2）石油污染物降解菌的富集和培养：取10g污染土壤加入已无菌的100ml石油降解液体培养基中，在温度为30℃，在转速为150转/min的摇床中培养5天后，再按10%接种率，接种在另一100ml石油降解液体培养基中，连续富集培养6次，形成石油降解混合菌液；所述石油降解液体培养基：将3g的NaNO3、1g的K2HPO4、0.5g的MgSO4·7H2O、0.5g的KCl、0.01g的FeSO4·7H2O和0.02gCaCl2加入步骤（1）中提取的石油污染物中，提取的石油污染物的体积为1ml，用蒸馏水稀释至1000ml，PH为7.3；（4）用步骤（2）中富集培养的石油降解混合菌液做为种子液，按10%接种率，连续用石油降解液体培养基发酵培养至0.5m3，形成体积为0.5m3的石油降解菌；（4）表面活性剂菌的筛选：用石油降解液体培养基将步骤②培养的石油降解混合菌液划线分离，将分离出的单菌落，分别用石油降解液体培养基发酵培养3天，得到培养液；取1ml培养液放入盛有60ml蒸馏水和8ml液体石蜡的玻璃平皿中，玻璃平皿的体积为90mm；在玻璃平皿中，如果产生排油圈，证明培养液中存在表面活性剂，排油圈越大，表面活性剂能力越强，从中筛选出表面活性剂能力最强的菌，该菌为表面活性剂菌；（5）表面活性剂产生菌培养：将步骤（4）选出的表面活性剂菌，按10%接种率，连续用石油降解液体培养基发酵培养至0.5m3，形成体积为0.5m3的表面活性剂菌；（6）将步骤（3）和步骤（5）制成的体积为0.5m3的石油降解菌和体积为0.5m3的表面活性菌用9m3牛肉蛋白胨液体培养基混合发酵至10m3，形成菌剂；所述牛肉蛋白胨液体培养基：牛肉蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g和蒸馏水1000ml；（7）测定污染土壤中有机碳、氮、磷的含量，按重量比，C：Ｎ：Ｐ=100：10：1的比例进行补充营养；按重量比，将6%的木屑和8%的菌剂与污染土壤混合搅拌均匀，铺在地面上，厚度为300mm；维持污染土壤的水份为饱和含水量的45%，每3天翻耕一次，修复周期63天。实施例二：一种石油污染土壤微生物处理方法，步骤如下：（1）提取石油污染物：用萃取剂从污染土壤中提取石油污染物，并将萃取剂蒸发掉待用；（2）石油污染物降解菌的富集和培养：取10g污染土壤加入已无菌的100ml石油降解液体培养基中，在温度为30℃，在转速为150转/min的摇床中培养5天后，再按10%接种率，接种在另一100ml石油降解液体培养基中，连续富集培养6次，形成石油降解混合菌液；所述石油降解液体培养基：将3g的NaNO3、1g的K2HPO4、0.5g的MgSO4·7H2O、0.5g的KCl、0.01g的FeSO4·7H2O和0.02gCaCl2加入步骤（1）中提取的石油污染物中，提取的石油污染物的体积为1ml，用蒸馏水稀释至1000ml，PH为7.4；（5）用步骤（2）中富集培养的石油降解混合菌液做为种子液，按10%接种率，连续用石油降解液体培养基发酵培养至0.5m3，形成体积为0.5m3的石油降解菌；（4）表面活性剂菌的筛选：用石油降解液体培养基将步骤②培养的石油降解混合菌液划线分离，将分离出的单菌落，分别用石油降解液体培养基发酵培养3天，得到培养液；取1ml培养液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种石油污染土壤微生物处理方法，其特征在于如下步骤：（1）提取石油污染物：用萃取剂从污染土壤中提取石油污染物，并将萃取剂蒸发掉待用；（2）石油污染物降解菌的富集和培养：取10g污染土壤加入已无菌的100ml石油降解液体培养基中，在温度为30℃，在转速为150转/min的摇床中培养5天后，再按10%接种率，接种在另一100ml石油降解液体培养基中，连续富集培养6次，形成石油降解混合菌液；所述石油降解液体培养基：将3g 的NaNO3、1g 的K2HPO4、0.5g 的MgSO4· 7H2O、0.5g的KCl、0.01g 的FeSO4·7H2O和0.02g CaCl2加入步骤（1）中提取的石油污染物中，提取的石油污染物的体积为1ml，用蒸馏水稀释至1000ml，PH为7.2‑7.6；用步骤（2）中富集培养的石油降解混合菌液做为种子液，按10%接种率，连续用石油降解液体培养基发酵培养至0.5m3，形成体积为0.5m3的石油降解菌；（4）表面活性剂菌的筛选：用石油降解液体培养基将步骤②培养的石油降解混合菌液划线分离，将分离出的单菌落，分别用石油降解液体培养基发酵培养3天，得到培养液；取1ml培养液放入盛有60ml蒸馏水和8ml液体石蜡的90mm玻璃平皿中；在玻璃平皿中，如果产生排油圈，证明培养液中存在表面活性剂，排油圈越大，表面活性剂能力越强，从中筛选出表面活性剂能力最强的菌，该菌为表面活性剂菌；（5）表面活性剂产生菌培养：将步骤（4）选出的表面活性剂菌，按10%接种率，连续用石油降解液体培养基发酵培养至0.5m3，形成体积为0.5m3的表面活性剂菌；（6）将步骤（3）和步骤（5）制成的体积为0.5m3的石油降解菌和体积为0.5m3的表面活性菌用9m3牛肉蛋白胨液体培养基混合发酵至10 m3，形成菌剂；所述牛肉蛋白胨液体培养基：牛肉蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g和蒸馏水1000ml；（7）测定污染土壤中有机碳、氮、磷的含量，按重量比，C：Ｎ：Ｐ=100：10：1的比例进行补充营养；按重量比，将6%的木屑和5‑10%的菌剂与污染土壤混合搅拌均匀，铺在地面上，厚度为300mm；维持污染土壤的水份为饱和含水量的30－60%，每2‑5天翻耕一次。...

【技术特征摘要】
1.一种石油污染土壤微生物处理方法，其特征在于如下步骤：（1）提取石油污染物：用萃取剂从污染土壤中提取石油污染物，并将萃取剂蒸发掉待用；（2）石油污染物降解菌的富集和培养：取10g污染土壤加入已无菌的100ml石油降解液体培养基中，在温度为30℃，在转速为150转/min的摇床中培养5天后，再按10%接种率，接种在另一100ml石油降解液体培养基中，连续富集培养6次，形成石油降解混合菌液；所述石油降解液体培养基：将3g的NaNO3、1g的K2HPO4、0.5g的MgSO4·7H2O、0.5g的KCl、0.01g的FeSO4·7H2O和0.02gCaCl2加入步骤（1）中提取的石油污染物中，提取的石油污染物的体积为1ml，用蒸馏水稀释至1000ml，PH为7.2-7.6；用步骤（2）中富集培养的石油降解混合菌液做为种子液，按10%接种率，连续用石油降解液体培养基发酵培养至0.5m3，形成体积为0.5m3的石油降解菌；（4）表面活性剂菌的筛选：用石油降解液体培养基将步骤②培养的石油降解混合菌液划线分离，将分离出的单菌落，...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯军亮，田西昭，闫绍才，李淑辉，张丽黎，单强，闫朔，李红超，赵亮，陈业男，尚将为，张晓溪，
申请(专利权)人：河北省地质环境监测院，唐山柯林环保科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13