一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及医学及免疫学领域，具体公开了一种抗金黄色葡萄球菌α‑溶血素的抗体及其应用。所述抗体的重链可变区和轻链可变区的CDR区包括如SEQ ID NO.1‑3所示的氨基酸序列(或具有同等功能的功能性活性CDR变体)和如SEQ ID NO.4‑6所示的氨基酸序列(或具有同等功能的功能性活性CDR变体)。基于此研究成果，本发明专利技术还提供了编码所述抗体的核酸分子以及所述抗体在制备特异性结合金黄色葡萄球菌α‑溶血素的产品和制备金黄色葡萄球菌疫苗等方面的应用。同时，基于该抗体所得到的可治疗或辅助治疗抗金黄色葡萄球菌感染的产品，也为寻找新颖、高效低毒的抗MRSA药物成为近年来治疗MRSA研究领域的重要方向。

Antibody against Staphylococcus aureus alpha-hemolysin and its application

The invention relates to the field of medicine and immunology, in particular to an antibody against Staphylococcus aureus alpha hemolysin and its application. The CDR regions of the heavy-chain variable region and light-chain variable region of the antibody include amino acid sequences (or functional active CDR variants with the same functions) as shown in SEQ ID NO.1_3 and amino acid sequences (or functional active CDR variants with the same functions) as shown in SEQ ID NO.4_6. Based on this research result, the present invention also provides nucleic acid molecules encoding the antibody and applications of the antibody in the preparation of products specifically binding to Staphylococcus aureus alpha hemolysin and the preparation of Staphylococcus aureus vaccine, etc. At the same time, the therapeutic or adjuvant anti-Staphylococcus aureus products based on this antibody have become an important research direction in the field of MRSA treatment in recent years, as well as the search for novel, highly effective and low toxic anti-MRSA drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体及其应用
本专利技术涉及医学及免疫学领域，具体地说，涉及一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体。
技术介绍
人类病原体来源多为革兰氏阳性菌，而其中重要成员则是金黄色葡萄球菌，人类中金黄色葡萄球菌的长期携带者约有20％。其引起的感染以急性、化脓性为特征，可导致皮肤、黏膜、深部组织感染以及心内膜炎、肺炎、脓毒症、骨髓炎、脑膜炎、烫伤样皮肤综合征、中毒休克综合征等多种疾病，严重感染及并发症的感染病死率高达20％。同时，金黄色葡萄球菌在自然界中广泛分布、抵抗力强，是引起细菌性食物中毒的重要病原菌。金黄色葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的细菌，自从上世纪40年代青霉素问世后，金黄色葡萄球菌引起的感染性疾病受到较大的控制。随着抗生素长期、广泛地使用，细菌耐药性问题日益突出。典型耐药菌代表即被称作“超级病菌”——耐甲氧西林金葡菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA)，目前MRSA感染已超过艾滋病、结核和病毒性肝炎成为患者首位致死原因，严重威胁公共卫生安全，目前已成为全球ICU病房、术后感染、烧伤、战创伤等感染率最高的院内感染病原菌之一。虽然FDA已批准多款新药用于MRSA的治疗，但已在临床使用多年的万古霉素仍然是治疗MRSA感染的一线药物。但是，近年来越来越多耐万古霉素MRSA病例被报道。因此，寻找新颖、高效低毒的抗MRSA药物成为近年来治疗MRSA研究领域的重要方向。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体及其应用。为了实现本专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：第一方面，本专利技术提供了一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体，所述抗体包括轻链可变区和重链可变区：所述重链可变区包括：(1)CDR1区中如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(2)CDR2区中如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(3)CDR3区中如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体；和/或，所述轻链可变区包括：(1)CDR1区中如SEQIDNO.4所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(2)CDR2区中如SEQIDNO.5所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(3)CDR3区中如SEQIDNO.6所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体。作为优选，所述抗体包含三个CDR的重链可变区和三个CDR的轻链可变区。其中，所述重链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO.1、2、3所示，所述轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO.4、5、6所示。所述具有同等功能的功能性活性CDR变体指保留了原氨基酸序列的生物学特性，同样能够特异性结合金黄色葡萄球菌的α-溶血素的相应片段的CDR变体。所述功能性活性CDR变体包括在亲代CDR序列中的至少一个氨基酸被修饰的氨基酸序列，并包括与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性，优选具有至少70％、至少80％、至少90％序列一致性的氨基酸序列，或者由与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性，优选具有至少70％、至少80％、至少90％序列一致性的氨基酸序列组成。所述修饰可以是氨基酸序列的化学变化或部分更改，所述修饰使变体保留未修饰序列的生物学特性所述部分更改可以是删除或替换一个至几个氨基酸，例如，1、2、3、4或5个氨基酸，或加入或插入一个至几个氨基酸，例如1、2、3、4或5个氨基酸，或通过化学衍生一个至几个氨基酸，例如，1、2、3、4或5个氨基酸，或它们的组合。氨基酸残基的替换可以是保守替换，例如，以一个疏水氨基酸替换一个替代疏水氨基酸。本文使用的术语“变体”指的是通过插入、删除或替换一个或多个氨基酸，或通过化学衍生化氨基酸序列中一个或多个氨基酸残基，或核苷酸序列中的核苷酸，或序列的一个或两个远端来修饰这一序列所得到的序列，还包括天然等位突变，其中，修饰不会影响(特别是不会损失)这一序列的活性。本专利技术中，术语“CDR区”意指抗体的互补决定区，即决定抗体对特定抗原的特异性的区域。轻链和重链两者上的三个CDR区(CDR1至CDR3)负责抗原结合。重链的CDR区位置如下：VH外显子内的CDR1区氨基酸26至33，VH外显子内的CDR2区氨基酸51至58，VH外显子内的CDR3区氨基酸97至107。轻链的CDR区位置如下：Vλ外显子内的CDR1区氨基酸26至33，Vλ外显子内的CDR2区氨基酸51至54，Vλ外显子内的CDR3区氨基酸90至100。可以用VBase数据库(http：//imgt.cines.fr/)分析获得抗体基因家族、突变率、亚型及CDR区。更进一步地，所述重链可变区的氨基酸序列具有如SEQIDNO.7所示的序列，或具有与SEQIDNO.7所示序列至少70％相同的序列，和/或，所述轻链可变区的氨基酸序列具有如SEQIDNO.8所示的序列，或具有与SEQIDNO.8所示序列至少70％相同的序列。进一步地，所述抗体能够特异性结合金黄色葡萄球菌的α-溶血素，所述金黄色葡萄球菌的α-溶血素包含全长或其中的部分片段或部分氨基酸的序列。作为优选，所述全长氨基酸序列包含SEQIDNO.9所示的氨基酸序列；作为优选，所述部分片段包括但不限于：SEQIDNO.10或SEQIDNO.11或SEQIDNO.12所示的氨基酸序列。本专利技术经过实验研究发现，本专利技术所述抗体可与金黄色葡萄球菌的α-溶血素的上述部分片段发生特异性结合。在一个优选的实施方案中，所述的单克隆抗体以不高于1*10-5M，例如1*10-6M、1*10-7M、1*10-8M、1*10-9M或1*10-10M或更小的KD与金黄色葡萄球菌α-溶血素解离。其中，术语“KD”是指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数，表示处于平衡状态时抗体和抗原的解离程度。KD越小说明解离越小，代表抗体与抗原间的亲和力越强。通常，抗体(例如，本专利技术的单克隆抗体TRN1016)以不高于10-5M，例如小于大约10-6M、10-7M、10-8M、10-9M或10-10M或更小的平衡解离常数(KD)与抗原(例如，金黄色葡萄球菌α-溶血素)解离，例如，如使用表面等离子体共振术(SPR)在BIACORE仪中测定的。特别地，本专利技术所提供的抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体，为人源抗体或人抗体和单结构域抗体。本文使用的术语“抗体”是全长抗体或其抗体片段，其中所述抗体片段包括至少一个带有前述结合位点的抗体区。优选地，抗体选自人源化或人抗体和单结构域抗体，如VH、VHH或VL，和/或包含或由VL/VH区域对和抗体恒定域组成的抗体，如重链抗体、Fab、F(ab’)、(Fab)2、scFv、Fd、Fv或全长抗体，如IgG型(如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型)抗体、IgA1、IgA2、IgD、IgE或IgM抗体。术语“全长抗体”能用于指代任意抗体分子，其包含至少大多数Fc域和其他在天然抗体单体中普遍找到的区域。优选地，本专利技术的单克隆抗体的轻链可以是κ型或λ型的。在一个优选的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗金黄色葡萄球菌α‑溶血素的抗体，其特征在于，所述抗体包括轻链可变区和重链可变区：所述重链可变区包括：(1)CDR1区中如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(2)CDR2区中如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(3)CDR3区中如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体；和/或，所述轻链可变区包括：(1)CDR1区中如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(2)CDR2区中如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(3)CDR3区中如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体。

【技术特征摘要】
1.一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体，其特征在于，所述抗体包括轻链可变区和重链可变区：所述重链可变区包括：(1)CDR1区中如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(2)CDR2区中如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(3)CDR3区中如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体；和/或，所述轻链可变区包括：(1)CDR1区中如SEQIDNO.4所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(2)CDR2区中如SEQIDNO.5所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体，(3)CDR3区中如SEQIDNO.6所示的氨基酸序列或具有同等功能的功能性活性CDR变体。2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列具有如SEQIDNO.7所示的序列，或具有与SEQIDNO.7所示序列至少70％相同的序列，和/或，所述轻链可变区的氨基酸序列具有如SEQIDNO.8所示的序列，或具有与SEQIDNO.8所示序列至少70％相同的序列。3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述抗体能够特异性结合金黄色葡萄球菌的α-溶血素，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖化新，郑伟宏，王孝丽，袁晓辉，王月明，李成明，
申请(专利权)人：珠海泰诺麦博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44