一种泌尿生殖道支原体双相培养基制造技术

本发明专利技术公开一种泌尿生殖道支原体双相培养基，属于微生物检测领域。本发明专利技术培养基包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/4‑1/2浸没在液体培养基中；培养基成分主要有酵母浸粉、牛心浸粉、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸锰、半胱氨酸盐酸盐、尿素、精氨酸、谷氨酰胺、马血清、DMEM液体培养基、丙酮酸钠、酚红指示剂、制霉素、青霉素以及琼脂；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件以及一个滤网，滤网内放置有二氧化碳发生片，在培养过程中可以吸收水汽从而释放二氧化碳，因此不再需要二氧化碳培养箱，整个过程操作简单，特异性高，易于实验室操作。

A biphasic culture medium for Mycoplasma in genitourinary tract

The invention discloses a biphasic culture medium for mycoplasma of urogenital tract, which belongs to the field of microbial detection. The culture medium of the invention comprises two parts: liquid medium and solid medium. The solid medium is placed in a container to form an inclined plane, while one quarter of the inclined plane is immersed in the liquid medium; the main components of the culture medium are yeast extract powder, bovine heart extract powder, soybean peptone, sodium chloride, potassium hydrogen phosphate, manganese sulfate, cysteine hydrochloride, urea, arginine and glutamine. Amide, horse serum, DMEM liquid medium, sodium pyruvate, phenol red indicator, nystatin, penicillin and agar; the container also includes a sealed part which can seal the inner space of the container and a filter, in which a carbon dioxide generating sheet is placed to absorb water vapor and release carbon dioxide during the culture process, so carbon dioxide culture is no longer needed. Maintenance box, the whole process is simple to operate, high specificity, easy to operate in the laboratory.

【技术实现步骤摘要】
一种泌尿生殖道支原体双相培养基
本专利技术属于微生物检测领域，具体涉及一种泌尿生殖道支原体培养基。
技术介绍
支原体，又名霉形体，是目前发现的一类大小介于病毒与细菌之间、无细胞壁、呈高度多形性、能通过滤菌器的最简单的原核生物之一。目前已发现的寄居于人体的支原体至少16种，其中7种为条件致病菌，而又以这7种中的人型支原体(Mh)和解脲支原体(Uu)最为常见，能在约70％的性活跃人群的泌尿生殖系统中检测到。泌尿生殖道支原体作为导致非淋菌性尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌，约有20-30％的非淋菌性尿道炎是由Mh及Uu感染引起。该细菌感染甚至还可以引起宫颈炎、产后感染、自发性流产乃至不孕不育等严重后果。故快速准确地诊断泌尿生殖道支原体感染，并对其进行针对性抗感染治疗有很高实用价值和临床意义常规的支原体诊断方法如下：(1)分子生物学方法：核酸杂交、PCR、LCR等方法，快速、敏感、特异性高，但是，对操作要求较高，成本高，且易出现污染；(2)液体培养法；(3)固体培养法。Uu和Mh主要通过体外培养进行检测，在临床应用比较广泛。生殖支原体营养要求高,在一般支原体培养基不生长。由于培养难度大，临床主要通过聚合酶链反应(PCR)技术来检测生殖支原体。支原体培养是目前国内医疗机构进行Uu和Mh检测的重要手段，主要是使用液体培养基直接检测并同时进行支原体药敏试验，以达到尽早为临床治疗用药提供依据的目的。但液体培养法有时候会受到细菌或真菌的污染导致假阳性，给临床带来误诊。固体培养是经24-48h小时后用显微镜直接观察培养基上支原体属典型的菌落形态，是诊断支原体感染的“金标准”。但固体培养法报告检测时间太长，不利于临床的快速诊断。因此，本领域目前亟需检测特异性高同时又能够达到快速检测目的的泌尿生殖道支原体检测方法。
技术实现思路
为解决目前泌尿生殖道检测中，液体培养法存在假阳性，而采用固体培养基检测又太耗费时间的缺陷，且需要专业的设备二氧化碳培养箱和显微镜观察，整个检测过程费时费力且准确度不高的问题。本专利技术为解决这一问题，针对泌尿生殖道支原体提供一种固液双相培养基，该培养基检测过程不需要另外配制二氧化碳培养箱，简化检测流程，提高检测效率，同时对泌尿生殖道支原体具备针对性，培养效果好，有利于临床的快速诊断，提高检测特异性。本专利技术所采用的技术方案是：一种泌尿生殖道支原体双相培养基，包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/4-1/2浸没在液体培养基中；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件；其中液体培养基的成分包括：2～10g/L酵母浸粉、2～10g/L牛心浸粉、2～10g/L大豆蛋白胨、1～10g/L氯化钠、1～10g/L磷酸氢二钾、0.05～1.5g/L硫酸锰、0.01～8g/L半胱氨酸盐酸盐、0.5～8g/L尿素、0.5～8g/L精氨酸、0.1～4.0g/L谷氨酰胺、300～500mL/L马血清、5～50mL/LDMEM液体培养基、0.05～15g/L丙酮酸钠、1～10mL/L质量体积百分数为0.1～0.5％酚红指示剂、0.001～0.050g/L制霉素和300～8000IU/L青霉素；固体培养基的成分除包括10～30g/L琼脂外，其余组分与所述的液体培养基的组分相同。所述密封部件与所述容器之间还有一个滤网，该滤网内放置二氧化碳发生片。二氧化碳发生片是由酒石酸和碳酸氢钠所制备的片剂。当将所述的二氧化碳发生片放到滤网中，放入培养箱后的培养瓶下方的液体培养基会挥发产生水蒸气，二氧化碳发生片会受潮，受潮后其中的酒石酸和碳酸氢钠反应会缓慢释放二氧化碳。所述滤网是金属材质、塑料材质或者尼龙材质中的任意一种。优选的可以选择的容器的直径为3-7cm，长度为6-15cm。所述密封部件为与所述容器可以紧密贴合的盖子或者是用于封口的塑料封口膜。一种泌尿生殖道支原体双相培养基的制备方法，包括以下步骤：(1)固体培养基制备：将所述固体培养基各组分混合均匀，用1000ml蒸馏水溶解，调节pH后，以0.22μm的滤菌膜进行过滤除菌，然后加热至60-80℃溶化后，转到所述的容器中冷却形成斜面；(2)液体培养基配制：将所述的液体培养基的各组分简单混合，用1000ml蒸馏水溶解，调节pH后，以0.22μm的滤菌膜进行过滤除菌，然后加热至60-80℃溶化后，转到所述容器中，并覆盖所述固体培养基形成的斜面的1/4-1/2。其中，步骤(1)中pH的调节范围为5.8-7.3。一种泌尿生殖道支原体双相培养基的使用方法，包括以下步骤：(1)将待测样本接种于所述的液体培养基中，轻摇混匀后倾斜容器，使一部分混有待测样本的液体培养基平铺于所述的固体培养基上，即完成接种，然后于滤网内放入一片二氧化碳发生片，将容器密封；(2)将步骤(1)完成接种的培养容器置于培养箱中培养，培养温度为36-38℃；(3)培养18-36小时判断初步检测结果，对阳性样本继续培养3-7天，得到最终检测结果；所述的判断初步检测结果的标准为：若液体培养基变红且清晰透明，可以初步报告阳性；所述的最终检测结果的判断标准为：若固体斜面上有油煎蛋样菌落生长，且符合泌尿生殖道支原体生化特征，最终报告泌尿生殖道支原体阳性。本专利技术所用的试剂和原料均市售可得。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果：1、本专利技术配方科学配比固液两相培养基中各组分配比，营养成分丰富，满足Uu以及Mh生长繁殖的需求；本专利技术的培养基含尿素适合Uu需要、精氨酸适合Mh需要，而且pH调节至5.8-7.3，基本符合二者生长要求，可得到单克隆菌落，方便基于检测结果作下游的进一步研究工作；2、本专利技术打破传统的培养模式，将固体培养基形成斜面后浸润于液体培养基中，该方法结合液相培养快速、敏感、结果易观察和固体培养准确、特异、抗污染强等特点，提高了鉴定结果的特异度和敏感度；双相培养基使液相和固相培养同步进行，优于先液体培养，后根据颜色变化再转种固体培养，既可避免液体培养假阳性造成的鉴定错误，又能节省时间，尽早出报告；3、本专利技术设置滤网，滤网内设置有二氧化碳发生片，在培养过程中可以吸收水气从而释放二氧化碳，因此不再需要二氧化碳培养箱；且只需要对一份标本进行一次接种，整个过程操作简单，特异性高，易于实验室操作。附图说明图1为本专利技术泌尿生殖道支原体双相培养基的示意图；图2为镜检人型支原体阳性结果镜检图；图3为镜检解脲支原体阳性结果镜检图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术的技术方案做进一步说明，但不限于此。实施例1一种泌尿生殖道支原体双相培养基，包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/4浸没在液体培养基中；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件；其中液体培养基的成分包括：2g/L酵母浸粉、2g/L牛心浸粉、2g/L大豆蛋白胨、1g/L氯化钠、1g/L磷酸氢二钾、0.05g/L硫酸锰、0.01g/L半胱氨酸盐酸盐、0.5g/L尿素、0.5g/L精氨酸、0.1g/L谷氨酰胺、300mL/L马血清、5mL/LDMEM液体培养基、0.05g/L丙酮酸钠、1mL/L质量体积百分数为0.1％酚红指示剂、0.001g/L制霉素和300IU/L青霉素；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种泌尿生殖道支原体双相培养基，其特征在于，包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/4‑1/2浸没在液体培养基中；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件以及一个滤网；其中液体培养基的成分包括：2～10g/L酵母浸粉、2～10g/L牛心浸粉、2～10g/L大豆蛋白胨、1～10g/L氯化钠、1～10g/L磷酸氢二钾、0.05～1.5g/L硫酸锰、0.01～8g/L半胱氨酸盐酸盐、0.5～8g/L尿素、0.5～8g/L精氨酸、0.1～4.0g/L谷氨酰胺、300～500mL/L马血清、5～50mL/LDMEM液体培养基、0.05～15g/L丙酮酸钠、1～10mL/L质量体积百分数为0.1～0.5％酚红指示剂、0.001～0.050g/L制霉素和300～8000IU/L青霉素；固体培养基的成分除包括10～30g/L琼脂外，其余组分与所述的液体培养基的组分相同。

【技术特征摘要】
1.一种泌尿生殖道支原体双相培养基，其特征在于，包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/4-1/2浸没在液体培养基中；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件以及一个滤网；其中液体培养基的成分包括：2～10g/L酵母浸粉、2～10g/L牛心浸粉、2～10g/L大豆蛋白胨、1～10g/L氯化钠、1～10g/L磷酸氢二钾、0.05～1.5g/L硫酸锰、0.01～8g/L半胱氨酸盐酸盐、0.5～8g/L尿素、0.5～8g/L精氨酸、0.1～4.0g/L谷氨酰胺、300～500mL/L马血清、5～50mL/LDMEM液体培养基、0.05～15g/L丙酮酸钠、1～10mL/L质量体积百分数为0.1～0.5％酚红指示剂、0.001～0.050g/L制霉素和300～8000IU/L青霉素；固体培养基的成分除包括10～30g/L琼脂外，其余组分与所述的液体培养基的组分相同。2.根据权利要求1所述泌尿生殖道支原体双相培养基，其特征在于，所述密封部件与所述容器之间还有一个滤网，该滤网内放置二氧化碳发生片。3.根据权利要求2所述泌尿生殖道支原体双相培养基，其特征在于，所述二氧化碳发生片为由酒石酸和碳酸氢钠等比例混合所得的片剂。4.根据权利要求2所述泌尿生殖道支原体双相培养基，其特征在于，所述滤网是金属材质、塑料材质或者尼龙材质中的任意一种。5.根据权利要求1所述泌尿生殖道支原体双相培养基，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖爱美，范立飞，张金蓬，
申请(专利权)人：山东恒辰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37