复合荧光探针在肿瘤活体细胞成像检测中的应用制造技术

本发明专利技术公开了复合荧光探针在肿瘤活体细胞成像检测中的应用。本发明专利技术的技术方案要点为：复合荧光探针在肿瘤活体细胞成像检测中的应用，采集波段为580‑620nm的范围复合荧光探针在肿瘤活体细胞内呈现明显的荧光信号，其中复合荧光探针为3‑(4‑氨基)‑丁酸‑苊并吡嗪‑8,9‑二腈复合二氧化钛量子点。本发明专利技术利用二氧化钛具有较强吸光度的特性，使二氧化钛吸收能量传递到有机物3‑(4‑氨基)‑丁酸‑苊并吡嗪‑8,9‑二腈，使得量子点总体的发射强度增加，得到较强的荧光信号，由于有机物聚集在二氧化钛纳米颗粒上，使其具有良好的水溶性，且具有良好的细胞膜通透性。

Application of Compound Fluorescent Probe in Imaging Detection of Tumor Cells in Vivo

The invention discloses the application of a composite fluorescent probe in imaging detection of tumor living cells. The main points of the technical scheme of the present invention are: the application of the composite fluorescent probe in the imaging detection of tumor living cells, the acquisition band of the composite fluorescent probe in the range of 580 to 620 nm shows obvious fluorescent signals in the tumor living cells, in which the composite fluorescent probe is 3 (4 amino)butyric acid pyrazine 8,9 dinitrile composite titanium dioxide quantum dots. The invention utilizes the characteristics of strong absorbance of titanium dioxide to transfer the absorbed energy of titanium dioxide to organic substance 3 (4 amino)butyric acid pyrazine 8,9 Membrane permeability.

【技术实现步骤摘要】
复合荧光探针在肿瘤活体细胞成像检测中的应用
本专利技术属于荧光探针的应用
，具体涉及一种复合荧光探针在肿瘤活体细胞成像检测中的应用。
技术介绍
在生物成像领域与传统的染料分子相比，量子点确实具有多种优势。无机微晶能够承受多次的激发和光发射，而有机分子却会分解，持久的稳定性可以让研究人员更长时间地观测细胞和组织，并毫无困难地进行界面修饰连接。量子点最大的好处是有丰富的颜色。生物体系的复杂性经常需要同时观察几种组分，如果用染料分子染色，则需要不同波长的光来激发，而量子点则不存在这个问题，使用不同大小（进而不同色彩）的纳米晶体来标记不同的生物分子。使用单一光源就可以使不同的颗粒能够被即时监控。量子点特殊的光学性质使得它在生物化学、分子生物学、细胞生物学、基因组学、蛋白质组学、药物筛选、生物大分子相互作用等研究中有极大的应用前景。但是在生物成像应用方面却因常规的量子点具有较大的生物毒性，使其在活体成像中的应用受到限制。因此开发一种低生物毒性的量子点成为了量子点在活体肿瘤成像方面的一个关键问题。
技术实现思路
本专利技术解决的技术问题是提供了复合荧光探针在肿瘤活体细胞成像检测中的应用。本专利技术为解决上述技术问题采用如下技术方案，复合荧光探针在肿瘤活体细胞成像检测中的应用，采集波段为580-620nm的范围复合荧光探针在肿瘤活体细胞内呈现明显的荧光信号，其中复合荧光探针为3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点，该3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点的具体制备过程为：在50mL的两口烧瓶中加入200mg5-溴苊醌与125mg二氨基顺丁烯二腈，再加入6mL冰乙酸，于120℃搅拌加热回流2h，冰水浴冷却后，过滤，干燥，柱层析分离得到3-溴-苊并吡嗪-8,9-二腈；取100mg3-溴-苊并吡嗪-8,9-二腈和40mg4-氨基丁酸置于50mL圆底烧瓶中，加入8mL二甲亚枫，于110℃加热回流1h，反应生成红色混合物，减压蒸馏即可得到3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈；在50mL的两口烧瓶中加入6mg3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈，而后加入25mL二甲亚枫搅拌溶解后加入3mL钛酸四丁酯，搅拌均匀后加入0.6mL饱和氯化钾溶液，于120℃加热回流2h，然后离心分离即可得到3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点。本专利技术所制备的复合二氧化钛量子点利用二氧化钛具有较强吸光度的特性，使二氧化钛吸收能量传递到有机物3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈，使得量子点总体的发射强度增加，得到较强的荧光信号，由于有机物聚集在二氧化钛纳米颗粒上，使其具有良好的水溶性，且具有良好的细胞膜通透性。本专利技术的无机有机复合二氧化钛量子点具有较低的生物毒性，其光谱范围与生物样品的光谱范围有足够大的差异，从而得到一种可以用于活体肿瘤成像的低生物毒性的量子点。附图说明图1是实施例制得复合二氧化钛量子点对肿瘤细胞的标记成像图。图2是实施例制得复合二氧化钛量子点在水溶剂中以550nm激发所得的荧光光谱图。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本专利技术上述内容实现的技术均属于本专利技术的范围。实施例3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈的合成路线：合成步骤：1、在50mL的两口烧瓶中加入200mg5-溴苊醌与125mg二氨基顺丁烯二腈，而后加入6mL冰乙酸，于120℃搅拌加热回流2h，冰水浴冷却后，过滤，干燥，柱层析分离得到鲜黄色3-溴-苊并吡嗪-8,9-二腈；2、取100mg3-溴-苊并吡嗪-8,9-二腈和40mg4-氨基丁酸置于50mL圆底烧瓶中，加入8mL二甲亚枫，于110℃加热回流1h，反应生成红色混合物，减压蒸馏即可得到3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈；3、在50mL的两口烧瓶中加入6mg3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈，而后加入25mL二甲亚枫搅拌溶解后加入3mL钛酸四丁酯，搅拌均匀后加入0.6mL饱和氯化钾溶液，于120℃加热回流2h，然后高速离心分离即可得到3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点。在AgilentCaryEclipse荧光分光光度计上以550nm激发扫描3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点的荧光发射图，结果见图2，从图2可以看出3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点在606nm处具有较强的荧光发射信号。使用制得的3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点，以终浓度为2.0mg3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点分别孵育Hela细胞，在37℃，5%CO2孵育30min，然后，PBS震荡漂洗5min×3，再加入细胞培养基，激光共聚焦成像。选取代表性区域，用油镜（100×）观察，重复三次。成像显示Hela细胞中具有强荧光信号，结果见图1，采集波段为580-620nm，3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点可以在细胞内呈现明显的荧光信号。以上实施例描述了本专利技术的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本专利技术不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本专利技术的原理，在不脱离本专利技术原理的范围下，本专利技术还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本专利技术保护的范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.复合荧光探针在肿瘤活体细胞成像检测中的应用，采集波段为580‑620nm的范围复合荧光探针在肿瘤活体细胞内呈现明显的荧光信号，其中复合荧光探针为3‑(4‑氨基)‑丁酸‑苊并吡嗪‑8,9‑二腈复合二氧化钛量子点，该3‑(4‑氨基)‑丁酸‑苊并吡嗪‑8,9‑二腈复合二氧化钛量子点的具体制备过程为：在50mL的两口烧瓶中加入200mg 5‑溴苊醌与125mg二氨基顺丁烯二腈，再加入6mL冰乙酸，于120℃搅拌加热回流2h，冰水浴冷却后，过滤，干燥，柱层析分离得到3‑溴‑苊并吡嗪‑8,9‑二腈；取100mg 3‑溴‑苊并吡嗪‑8,9‑二腈和40mg 4‑氨基丁酸置于50mL圆底烧瓶中，加入8mL二甲亚枫，于110℃加热回流1h，反应生成红色混合物，减压蒸馏即可得到3‑(4‑氨基)‑丁酸‑苊并吡嗪‑8,9‑二腈；在50mL的两口烧瓶中加入6mg 3‑(4‑氨基)‑丁酸‑苊并吡嗪‑8,9‑二腈，而后加入25mL二甲亚枫搅拌溶解后加入3mL钛酸四丁酯，搅拌均匀后加入0.6mL饱和氯化钾溶液，于120℃加热回流2h，然后离心分离即可得到3‑(4‑氨基)‑丁酸‑苊并吡嗪‑8,9‑二腈复合二氧化钛量子点。...

【技术特征摘要】
1.复合荧光探针在肿瘤活体细胞成像检测中的应用，采集波段为580-620nm的范围复合荧光探针在肿瘤活体细胞内呈现明显的荧光信号，其中复合荧光探针为3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点，该3-(4-氨基)-丁酸-苊并吡嗪-8,9-二腈复合二氧化钛量子点的具体制备过程为：在50mL的两口烧瓶中加入200mg5-溴苊醌与125mg二氨基顺丁烯二腈，再加入6mL冰乙酸，于120℃搅拌加热回流2h，冰水浴冷却后，过滤，干燥，柱层析分离得到3-溴-苊并吡嗪-8,9-二腈；取1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李一达，
申请(专利权)人：李一达，
类型：发明
国别省市：河南,41