黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法和检测方法技术

本发明专利技术涉及一种黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法和检测方法。该构建方法包括：参照物溶液制备：制备黄柏对照药材参照物溶液，盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱对照品参照物溶液；供试品溶液制备：制备黄柏药材供试品溶液，汤剂供试品溶液；高效液相色谱测试：吸取所述对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液、药材供试品溶液、汤剂供试品溶液，注入液相色谱仪，比较所得药材供试品图谱与汤剂供试品图谱，确定水溶性共有峰，获得黄柏药材的HPLC特征图谱。该构建方法获得的HPLC特征图谱不仅能定性、定量分析黄柏药材的质量优劣，还能以此为参照反映黄柏标准汤剂的质量。

【技术实现步骤摘要】
黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法和检测方法
本专利技术属于医药
，具体涉及一种黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法和检测方法。
技术介绍
黄柏为芸香科植物黄皮树PhellodendronchinenseSchneid.的干燥树皮。具有清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮的功效，用于湿热泻痢，黄疽尿赤，带下阴痒，热淋涩痛，骨蒸劳热，盗汗，疮疡肿毒，湿疹湿疮等病症。黄柏主要有效成分为生物碱类，包括小檗碱、黄柏碱、药根碱、巴马汀，其中小檗碱、黄柏碱具有抗炎、抗菌、解热镇痛等药理作用，是其主要的药理活性成分。其具有较强的临床应用价值，市场需求广阔，被开发成中药配方颗粒及相关复方制剂广泛用于临床。中药的临床使用多以传统汤剂为主。中药汤剂的物质基础，是中医理论指导下防治疾病的基础。现行的法定标准仅针对单一成分进行定量控制，量效关系不能全面反映中药成分的整体作用。在现阶段，中药绝大多数有效成分未明确的情况下，中药指纹图谱/特征图谱的建立能大大提高中药质量控制的技术水平及科技含量。《中国药典》2015年版将小檗碱、黄柏碱作为黄柏质量评价指标，仅对小檗碱、黄柏碱含量进行控制并不能全面反映其质量。目前文献研究报道的关于黄柏指纹图谱多采用的是常规的HPLC法，且均只针对原药材的物质基础，指标成分多以脂溶性成分为研究对象，不能全部反映中药汤剂的物质基础特征。
技术实现思路
基于此，本专利技术的主要目的是提供一种黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法。该构建方法获得的HPLC特征图谱不仅能定性、定量分析黄柏药材的质量优劣，还能以此为参照反映黄柏标准汤剂的质量。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法，所述的构建方法包括：参照物溶液制备：取黄柏对照药材，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为对照药材参照物溶液；取盐酸小檗碱对照品、盐酸黄柏碱对照品，精密称定，加溶剂溶解，所得溶液作为对照品参照物溶液；供试品溶液制备：取黄柏药材，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为药材供试品溶液；取黄柏标准汤剂，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为标准汤剂供试品溶液；高效液相色谱测试：吸取所述对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液、药材供试品溶液、标准汤剂供试品溶液，注入液相色谱仪，比较所得药材供试品图谱与汤剂供试品图谱，确定水溶性共有峰，获得黄柏药材的HPLC特征图谱。在其中一些实施例中，供试品溶液制备中，所述的黄柏药材来自全国黄柏产量较大的4个道地或主要产区共22批次样品及不同基原的关黄柏药材4批，样品具有充分的代表性。在其中一些实施例中，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：乙腈为流动相A，0.35～0.45mol/LNH4Cl溶液为流动相B，采用梯度洗脱；洗脱梯度包括：0min～5min，5％流动相A，95％流动相B；5min～40min，5％→25％流动相A，95％→75％流动相B；40min～45min，25％→35％流动相A，75％→65％流动相B；50min～51min，55％→5％流动相A，45％→95％流动相B；51min～65min，5％流动相A，95％流动相B。在其中一些实施例中，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：固定相：WaterssymmetryC18(4.6mm×250mm，0.5μm)色谱柱；流动相：乙腈为流动相A，0.4mol/LNH4Cl溶液为流动相B，采用梯度洗脱；洗脱梯度包括：0min～5min,5％流动相A,95％流动相B；5min～40min，5％→25％流动相A，95％→75％流动相B；40min～45min，25％→35％流动相A，75％→65％流动相B；50min～51min，55％→5％流动相A，45％→95％流动相B；51min～65min，5％流动相A，95％流动相B。在其中一些实施例中，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：检测波长为210nm～280nm，柱温为25℃～35℃，流速为0.8ml/L～1.2ml/L。在其中一些实施例中，所述检测波长为210nm，柱温为30℃，流速为1.0ml/L。在其中一些实施例中，参照物溶液制备、供试品溶液制备中，所述提取采用的溶剂为水、体积分数为50％的甲醇溶液、甲醇、体积分数为50％的乙醇溶液、乙醇、乙腈与体积分数为0.1％磷酸溶液按体积比为36：64的混合溶液、乙腈与体积分数为0.1％磷酸溶液按体积比为50：50的混合溶液；所述提取的方式采用超声或者加热回流。在其中一些实施例中，所述提取采用的溶剂为体积分数为50％的甲醇溶液；所述提取的方式采用超声。本专利技术的另一目的是提供一种黄柏药材的检测方法，所述的检测方法包括：参照物溶液制备：取黄柏对照药材，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为对照药材参照物溶液；取盐酸小檗碱对照品、盐酸黄柏碱对照品，精密称定，加溶剂溶解，所得溶液作为对照品参照物溶液；供试品溶液制备：取待测黄柏药材，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为待测药材溶液；高效液相色谱测试：吸取所述对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液、待测药材溶液，注入液相色谱仪，确定水溶性共有峰，获得待测药材HPLC图谱；比较所述待测药材HPLC图谱与上述构建的HPLC特征图谱。在其中一些实施例中，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：乙腈为流动相A，0.35mol/L～0.45mol/LNH4Cl溶液为流动相B，采用梯度洗脱；洗脱梯度包括：0min～5min，5％流动相A,95％流动相B；5min～40min，5％→25％流动相A，95％→75％流动相B；40min～45min，25％→35％流动相A，75％→65％流动相B；50min～51min，55％→5％流动相A，45％→95％流动相B；51min～65min，5％流动相A，95％流动相B。在其中一些实施例中，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：固定相：WaterssymmetryC18(4.6mm×250mm，0.5μm)色谱柱；流动相：乙腈为流动相A，0.4mol/LNH4Cl溶液为流动相B，采用梯度洗脱；洗脱梯度包括：0min～5min，5％流动相A，95％流动相B；5min～40min，5％→25％流动相A，95％→75％流动相B；40min～45min，25％→35％流动相A，75％→65％流动相B；50min～51min，55％→5％流动相A，45％→95％流动相B；51min～65min，5％流动相A，95％流动相B。与现有技术相比，本专利技术具备如下有益效果：本专利技术同时以黄柏对照药材、酸小檗碱对照品和盐酸黄柏碱对照品为参照物，配合合适的色谱条件，通过对黄柏药材和黄柏标准汤剂图谱的比较确黄柏药材HPLC特征图谱。该特征图谱不仅能用于定性、定量分析黄柏药材的质量，而且能够确保采用该药材制备的黄柏传统汤剂的质量，也适用于检测汤剂的质量。具体地，本专利技术在构建黄柏药材HPLC特征图谱的过程中：通过合适的色谱条件，在构建黄柏药材HPLC特征图谱时引入黄柏标准汤剂的特征图谱进行比较分析，针对其汤剂与药材共有的水溶性成分特征成分(4个水溶性特征成分，分别为3-O-阿魏酰奎尼酸、5-O阿魏酰奎尼酸、盐本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括：参照物溶液制备：取黄柏对照药材，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为对照药材参照物溶液；取盐酸小檗碱对照品、盐酸黄柏碱对照品，精密称定，加溶剂溶解，所得溶液作为对照品参照物溶液；供试品溶液制备：取黄柏药材，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为药材供试品溶液；取黄柏标准汤剂，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为标准汤剂供试品溶液；高效液相色谱测试：吸取所述对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液、药材供试品溶液、标准汤剂供试品溶液，注入液相色谱仪，比较所得药材供试品图谱与汤剂供试品图谱，确定水溶性共有峰，获得黄柏药材的HPLC特征图谱。

【技术特征摘要】
1.一种黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括：参照物溶液制备：取黄柏对照药材，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为对照药材参照物溶液；取盐酸小檗碱对照品、盐酸黄柏碱对照品，精密称定，加溶剂溶解，所得溶液作为对照品参照物溶液；供试品溶液制备：取黄柏药材，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为药材供试品溶液；取黄柏标准汤剂，加溶剂提取，滤过，所得滤液作为标准汤剂供试品溶液；高效液相色谱测试：吸取所述对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液、药材供试品溶液、标准汤剂供试品溶液，注入液相色谱仪，比较所得药材供试品图谱与汤剂供试品图谱，确定水溶性共有峰，获得黄柏药材的HPLC特征图谱。2.根据权利要求1所述的黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：乙腈为流动相A，0.35mol/L～0.45mol/LNH4Cl溶液为流动相B，采用梯度洗脱；洗脱梯度包括：0min～5min，5％流动相A，95％流动相B；5min～40min，5％→25％流动相A，95％→75％流动相B；40min～45min，25％→35％流动相A，75％→65％流动相B；50min～51min，55％→5％流动相A，45％→95％流动相B；51min～65min，5％流动相A，95％流动相B。3.根据权利要求2所述的黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：固定相：WaterssymmetryC18(4.6mm×250mm，0.5μm)色谱柱；流动相：乙腈为流动相A，0.4mol/LNH4Cl溶液为流动相B，采用梯度洗脱；洗脱梯度包括：0min～5min,5％流动相A,95％流动相B；5min～40min，5％→25％流动相A，95％→75％流动相B；40min～45min，25％→35％流动相A，75％→65％流动相B；50min～51min，55％→5％流动相A，45％→95％流动相B；51min～65min，5％流动相A，95％流动相B。4.根据权利要求1至3任一项所述的黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：检测波长为210nm～280nm，柱温为25℃～35℃，流速为0.8ml/L～1.2ml/L。5.根据权利要求4所述的黄柏药材HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述检测波长为210nm，柱温为30℃，流速为1.0ml/L。6.根据权利要求1至3任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：霍文杰，王闽予，魏梅，程学仁，黄小丹，潘礼业，陈万发，陈向东，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44