对叶百部药材UPLC特征图谱的构建方法和检测方法技术

本发明专利技术涉及一种对叶百部药材UPLC特征图谱的构建方法和检测方法。该特征图谱构建方法步骤如下：分别以绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸为对照品制备对照品参照物溶液；以对叶百部对照药材制备对照药材参照物溶液；分别取对叶百部药材和标准汤剂样品，制备供试品溶液和标准汤剂供试品溶液；分别吸取参照物溶液、供试品溶液、标准汤剂供试品溶液注入超高效液相色谱仪，测定；比较对叶百部药材供试品图谱和标准汤剂样品供试品图谱，标定8个水溶性成分的特征峰，获得对叶百部药材的UPLC特征图谱。该特征图谱能用于定性、定量分析对叶百部药材的质量，能够确保采用该药材制备的对叶百部传统汤剂的质量，也适用于检测含对叶百部的其它制剂。

【技术实现步骤摘要】
对叶百部药材UPLC特征图谱的构建方法和检测方法
本专利技术涉及医药
，特别是涉及一种对叶百部药材UPLC特征图谱的构建方法和检测方法。
技术介绍
百部为百部科植物直立百部(StemonasessilifoliaMiq.)、蔓生百部(StemonajaponicaMiq.)或对叶百部(StemonatuberosaLour.)的干燥块根。春、秋二季采挖，除去须根，洗净，置沸水中略烫或蒸至无白心，取出，晒干。百部具有润肺下气止咳，杀虫的作用，为治疗肺痨之要药，既能抑制结核杆菌而杀痨虫，以绝其根本，又能化痰止咳，滋阴润肺，肺阴充足，化源有利，使肺恢复宣肃功能，主治百咳、久咳不止、肺结核等。百部植物的化学成分主要为生物碱，其余有二苯乙稀类化合物和其它化合物。生物碱的含量随品种不同而不同(胡君萍，张囡，毛一卿等.中国药典3种百部的止咳作用比较[J].中国中药杂志，2009，34(23):3096-3104.)，对叶百部>直立百部>蔓生百部。从结构类型的分布来看，对叶百部中以I型和II型生物碱为主，直立百部中II型生物碱较多，I型和IV型次之，蔓生百部中II型和IV型生物碱较多。在生物活性研究方面，I、II、III型生物碱均有止咳作用，但以I型最好。从文献研究结果，对叶百部品种较优。百部具有较强的临床应用价值，市场需求广阔，被开发成中药配方颗粒及相关复方制剂广泛用于临床。中药的临床使用多以传统汤剂为主。中药汤剂的物质基础，是中医理论指导下防治疾病的基础。现行的法定标准仅针对单一成分进行定量控制，量效关系不能全面反映中药成分的整体作用。在现阶段，中药绝大多数有效成分未明确的情况下，中药指纹图谱/特征图谱的建立能大大提高中药质量控制的技术水平及科技含量。《中国药典》2015年版百部无含量测定项，并不能全面反映其质量。目前文献研究报道的关于百部特征图谱的建立，均只针对药材原料，指标成分多以脂溶性成分为研究对象，主要用于中药材真伪、产地、品质差异的定性鉴别，较难全面反映对叶百部的质量特征，也不能反应传统中药汤剂的物质基础特征。
技术实现思路
基于此，本专利技术提供一种对叶百部UPLC药材特征图谱的构建方法和检测方法。构建的对百部药材的特征图谱具有8个水溶性成分的特征峰，可以快速、全面实现对对叶百部药材多个特征成分的质量监控，并能反应对叶百部的传统中药汤剂的物质基础特征。具体技术方案为：一种对叶百部药材UPLC特征图谱的构建方法，包括以下步骤：参照物溶液的制备：分别以绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸为对照品，加溶剂溶解，制备对照品参照物溶液；向对叶百部对照药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液，将所述提取液滤过，取续滤液作为对照药材参照物溶液；供试品溶液的制备：向对叶百部药材中加入提取溶剂，超声提取，得提取液I，将所述提取液I滤过，取续滤液作为供试品溶液I；向对叶百部药材标准汤剂样品中加入提取溶剂，超声提取，得提取液II，将所述提取液II滤过，取续滤液作为供试品溶液II；测定：将所述对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液、供试品溶液I、供试品溶液II注入超高效液相色谱仪中测定，标定水溶性共有峰，获得对叶百部药材的UPLC特征图谱。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：以乙腈为流动相A，以体积分数为0.05％-0.2％的磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0-10min，流动相A由体积分数为1％升高到22％，流动相B由体积分数为99％降低到78％；10min-15min，流动相A由体积分数为22％升高到50％，流动相B由体积分数为78％降低到50％；15min-18min，流动相A由体积分数为50％升高到90％，流动相B由体积分数为50％降低到10％；18min-20min，流动相A保持体积分数为90％，流动相B保持体积分数为10％；20min-20.1min，流动相A由体积分数为90％降低到1％，流动相B由体积分数为10％升高到99％；20.1min-23min，流动相A保持体积分数为1％，流动相B保持体积分数为99％。在其中一个实施例中，所述色谱柱为WATERSCORTECST3。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：柱温20℃-25℃，流速为每分钟0.25ml-0.28ml，检测波长为200nm-220nm。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件为：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％的磷酸水溶液，柱温25℃，流速为每分钟0.25ml，检测波长为210nm。在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积分数为50％-80％的甲醇水溶液。在其中一个实施例中，所述超声提取的时间为8min-20min。本专利技术还提供对叶百部药材的检测方法。具体技术方案为：一种对叶百部药材的检测方法，包括以下步骤：参照物溶液的制备：分别以绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸为对照品，加溶剂溶解，制备对照品参照物溶液；向对叶百部对照药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液，将所述提取液滤过，取续滤液作为对照药材参照物溶液；待测样品溶液的制备：向待测样品中加入提取溶剂，超声提取，得提取液III，将所述提取液III滤过，取续滤液作为待测样品溶液；测定：将所述所述对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液、待测样品溶液注入超高效液相色谱仪中测定，即可。在其中一个实施例中，供试品溶液的制备中，所述对叶百部药材包含不同产地的对叶百部药材，本专利技术的供试品原料来自全国对叶百部产量较大的3个道地或主要产区，共15批次样品，具有充分的代表性。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：以乙腈为流动相A，以体积分数为0.05％-0.2％的磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0-10min，流动相A由体积分数为1％升高到22％，流动相B由体积分数为99％降低到78％；10min-15min，流动相A由体积分数为22％升高到50％，流动相B由体积分数为78％降低到50％；15min-18min，流动相A由体积分数为50％升高到90％，流动相B由体积分数为50％降低到10％；18min-20min，流动相A保持体积分数为90％，流动相B保持体积分数为10％；20min-20.1min，流动相A由体积分数为90％降低到1％，流动相B由体积分数为10％升高到99％；20.1min-23min，流动相A保持体积分数为1％，流动相B保持体积分数为99％。在其中一个实施例中，所述色谱柱为WATERSCORTECST3。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：柱温20℃-25℃，流速为每分钟0.25ml-0.28ml，检测波长为200nm-220nm。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件为：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％的磷酸水溶液，柱温25℃，流速为每分钟0.25ml，检测波长为210nm。在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积分数为50％-80％的甲醇水溶液。在其中一个实施例中，所述超声提取的时间为8min-20min。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术采用超高效液相色谱(UPLC)法构建对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对叶百部药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：参照物溶液的制备：分别以绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸为对照品，加溶剂溶解，制备对照品参照物溶液；向对叶百部对照药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液，将所述提取液滤过，取续滤液作为对照药材参照物溶液；供试品溶液的制备：向对叶百部药材中加入提取溶剂，超声提取，得提取液I，将所述提取液I滤过，取续滤液作为供试品溶液I；向对叶百部药材标准汤剂样品中加入提取溶剂，超声提取，得提取液II，将所述提取液II滤过，取续滤液作为供试品溶液II；测定：将所述对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液、供试品溶液I、供试品溶液II注入超高效液相色谱仪中测定，标定水溶性共有峰，获得对叶百部药材的UPLC特征图谱。

【技术特征摘要】
1.一种对叶百部药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：参照物溶液的制备：分别以绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸为对照品，加溶剂溶解，制备对照品参照物溶液；向对叶百部对照药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液，将所述提取液滤过，取续滤液作为对照药材参照物溶液；供试品溶液的制备：向对叶百部药材中加入提取溶剂，超声提取，得提取液I，将所述提取液I滤过，取续滤液作为供试品溶液I；向对叶百部药材标准汤剂样品中加入提取溶剂，超声提取，得提取液II，将所述提取液II滤过，取续滤液作为供试品溶液II；测定：将所述对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液、供试品溶液I、供试品溶液II注入超高效液相色谱仪中测定，标定水溶性共有峰，获得对叶百部药材的UPLC特征图谱。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：以乙腈为流动相A，以体积分数为0.05％-0.2％的磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0-10min，流动相A由体积分数为1％升高到22％，流动相B由体积分数为99％降低到78％；10min-15min，流动相A由体积分数为22％升高到50％，流动相B由体积分数为78％降低到50％；15min-18min，流动相A由体积分数为50％升高到90％，流动相B由体积分数为50％降低到10％；18min-20min，流动相A保持体积分数为90％，流动相B保持体积分数为10％；20min-20.1min，流动相A由体积分数为90％降低到1％，流动相B由体积分数为10％升高到99％；20.1min-23min，流动相A保持体积分数为1％，流动相B保持体积分数为99％。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述色谱柱为WATERSCORTECST3。4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：柱温20℃-25℃，流速为每分钟0.25ml-0.28ml，检测波长为200nm-220nm。5.根据权利要求1-4任一项所述的构建方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱德全，彭劲源，谭吉娇，张文芳，林碧珊，赵淑晶，陈向东，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，国药集团广东环球制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44