水稻OsARF6基因在调控水稻种子粒型中的应用制造技术

本发明专利技术公开了水稻OsARF6基因在调控水稻种子粒型中的应用，属于生物化学技术领域。本发明专利技术还提供了一种长粒型种子水稻的育种方法，包括：利用CRISPR/Cas9技术定点编辑所述水稻OsARF6基因的靶位点，所述靶位点的序列分别为：GACGCTGCAGCCACTCAGCC，ACCACTGGCTAAATATGTAA。本发明专利技术利用CRISPR/Cas9系统构建水稻OsARF6基因靶位点特异性敲除的植物重组表达载体，利用转基因获得OsARF6纯合稳定的突变体植株，可用于分析OsARF6基因在水稻中的生物学功能；本发明专利技术还提供了水稻OsARF6突变体植株在水稻粒型研究的新方向，在农业开发方面具有潜在的应用价值。

Application of OsARF6 Gene in Regulation of Rice Seed Type

The invention discloses the application of rice OsARF6 gene in regulating rice seed type, belonging to the field of biochemical technology. The invention also provides a breeding method for long-grain seed rice, including: editing the target loci of OsARF6 gene in Rice by CRISPR/Cas9 technology, and the sequence of the target loci are GACGCTGCAGCCACTCAGCC and ACCACTGGCTAAATATGTAA, respectively. The present invention utilizes CRISPR/Cas9 system to construct plant recombinant expression vector with specific knockout of OsARF6 gene target site in rice, obtains homozygous and stable mutant plants of OsARF6 by transgene, which can be used to analyze the biological function of OsARF6 gene in rice, and also provides a new direction of rice OsARF6 mutant plants in rice grain type research, which has potential in agricultural development. Application value.

【技术实现步骤摘要】
水稻OsARF6基因在调控水稻种子粒型中的应用
本专利技术涉及生物化学
，具体涉及水稻OsARF6基因在调控水稻种子粒型中的应用。
技术介绍
CRISPR/Cas9是新发展起来的一项有着巨大影响力的基因编辑技术，其简单的操作以及广泛的应用而受到青睐。CRISPR/Cas9体系中的载体主要由两大元件构成：sgRNA(singleguideRNA)以及Cas9。sgRNA是一种非编码的小RNA，由U3或者U6启动子启动。Cas9编码核酸酶蛋白，分子量大于1000个氨基酸，可以切割DNA核酸序列。CRISPR/Cas9体系主要借助sgRNA来匹配到基因组的特定位置(靶点)，之后Cas9核酸酶将此处DNA切断，形成双链切口。在DNA损伤修复过程中，无论是同源重组修复(Homologousrecombination-basedrepair,HR)还是非同源末端连接修复(Nonhomologousend-joining,NHEJ)，都会在切口处引入突变。目前CRISPR/Cas9系统已成功在拟南芥、烟草、甜橙、水稻、小麦、高粱、玉米以及苔藓植物地钱等植物中实现了定点基因组编辑，但对水稻育种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的水稻OsARF6基因在调控水稻种子粒型中的应用。

【技术特征摘要】
1.核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的水稻OsARF6基因在调控水稻种子粒型中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，利用RNAi或CRISPR/CAS9技术降低水稻OsARF6基因编码蛋白的表达或活性，进而获得长粒型种子的水稻突变体。3.一种长粒型种子水稻的育种方法，其特征在于，包括：利用CRISPR/Cas9技术定点编辑核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的水稻OsARF6基因的靶位点，所述靶位点的序列分别为：GACGCTGCAGCCACTCAGCC，ACCACTGGCTAAATATGTAA。4.如权利要求3所述的育种方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)针对所述的靶位点和pGTR质粒序列分段设计PCR引物，以pGTR质粒为模板进行PCR扩增，获得含有pGTR质粒不同分段的PCR产物，将PCR产物回收并连接获得含所述靶位点序列的线性化片段；(2)以线性化片段为模块，PCR扩增获得含所述靶位点序列的目标产物，将目标产物连入终载体pRGEB质粒，构建得到CRISPR/Cas9重组载体；(3)将CRISPR/Cas9重组载体转入待基因编辑的受体水稻中，培育，筛选获得含有Cas9序列标签的T0代阳性苗；(4)T0代阳性苗自交一代得到T1代苗，通过筛选获得Cas9标签去除的T1代苗，即得具有长粒型种子表型的水稻植株。5.如权利要求4所述的育种方法，其特征在于，步骤(1)中，采用的PCR引物为：P1：L5AD5-F：5’-CGGGTCT...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐艳华，王梅，乔继月，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33