一种苹果渣半固体发酵生产生化黄腐酸的方法技术

本发明专利技术提供了一种苹果渣半固体发酵生产生化黄腐酸的方法，本发明专利技术通过在废弃的果渣中接入各种扩大培养后的发酵菌种，进行半固体发酵以生产生化黄腐酸，并在发酵过程中以混合菌剂接种量、尿素添加量、发酵基质含水量和发酵时间为变量，制成生化黄腐酸溶液。该方法不仅可以减少苹果相关企业的负担，保护了环境，还将低了生产生化黄腐酸的成本，使用最优发酵工艺，可制成多功能、高效率和广适用的生化黄腐酸溶液，对半固体发酵生产生化黄腐酸具有切实的参考意义。

A Semi-solid Fermentation Method for Biochemical Fulvic Acid Production from Apple Dreg

The invention provides a method for producing biochemical fulvic acid by semi-solid fermentation of apple pomace. By adding various enlarged fermentation strains into the discarded fruit pomace, the method carries out semi-solid fermentation to produce biochemical fulvic acid. In the fermentation process, the biochemical fulvic acid solution is made by taking the inoculation amount of mixed bacteria, the amount of urea added, the moisture content of fermentation matrix and the fermentation time as variables. Liquid. This method can not only reduce the burden of Apple-related enterprises and protect the environment, but also reduce the cost of biochemical fulvic acid production. Using the optimal fermentation process, biochemical fulvic acid solution with multi-function, high efficiency and wide application can be produced. It has practical reference significance for semi-solid fermentation to produce biochemical fulvic acid.

【技术实现步骤摘要】
一种苹果渣半固体发酵生产生化黄腐酸的方法
本专利技术涉及生物
，具体是一种苹果渣半固体发酵生产生化黄腐酸的方法。
技术介绍
黄腐酸是腐殖酸类物质中水溶性的、活性最高的部分，最初的黄腐酸是从腐殖酸中提取而得，但需消耗大量的酸、碱等化学物质，有的还需要高温、高压和特殊设备，消耗大量的能量，同时产生废水、废气，对环境造成污染，生产成本更高。利用微生物发酵技术从农林废弃物等可再生资源通过生物技术接种速腐菌、堆制、发酵及化学提取技术等提取黄腐酸，这种黄腐酸也叫做生化黄腐酸。生化黄腐酸与泥炭、褐煤中提取的天然黄腐酸相比，其分子量小，水溶性好，生物活性高，耐酸耐碱，抗二价离子，在各种水质下不絮凝，与N、P、K和微量元素共溶性好。上个世纪八十年代末期开始，生化黄腐酸的生产和应用得到蓬勃兴起和发展。研究报道，生化黄腐酸处理土壤后，土壤中大于0.25mm的团粒含量增加了8.5％～20.0％，表明生化黄腐酸肥料具有明显改善土壤结构性能的作用。生化黄腐酸不仅具有较强的生理活性，对根系的发育及植物体内C、N和水分代谢有促进作用，同时通过加强土壤微生物活性，改善土壤化学性质，活化土壤养分，使N、P、K等营养元素以络合态逐渐释放，以提高肥料利用率。生化黄腐酸还可以提高作物的抗旱能力、增加土壤中氨化细菌、固氨菌、纤维分解菌等有益微生物数量和植物叶绿素含量等。在林业方面，不同浓度的生化黄腐酸溶液对油松、樟子松、华北落叶松和云杉浸根处理，可提高造林成活率11.9～16.3％；通过灌根可分别提高云杉、条柃造林成活率11.5％、10.5％。用生化黄腐酸改碱肥料在西部林木栽培中试验，结果表明：用于新疆杨苗木，苗木高和地径粗分别比对照增长49cm、0.49cm，成活率提高8.7％，新梢生长量增加3.7cm，用于云杉、侧柏幼林，年平均株高分别比对照增加了2.9和4.9cm；该肥不仅能促进苗木和幼木树生长，提高造林成活率，对改良苗圃和造林地也有明显效果。利用农作物废弃物发酵生产生化黄腐酸，可使废物得到利用，对环境不会造成污染，原料易得，成本低，在生产和使用过程中对环境不产生任何污染，产品能在农林业生产中表现出多功能、高效率和适用性广等优点，是一种极有前途的可持续发展生态农林业的新型生物技术。
技术实现思路
本专利技术提供了一种低成本、科学配比的苹果渣半固体发酵生产生化黄腐酸的方法。本专利技术提供了一种苹果渣半固体发酵生产生化黄腐酸的方法，步骤包括：(1)以苹果渣为发酵原料制成40％-80％含水量的发酵培养基；(2)取20g葡萄糖、200g马铃薯、15-20g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成自然pH的马铃薯葡萄糖培养基，取20g葡萄糖、100g马铃薯、15g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成7.2-7.4pH的豆芽汁培养基，取10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g氯化钙、15-20g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成7.0-7.2pH的牛肉膏蛋白胨培养基；(3)在28℃下，用马铃薯葡萄糖培养基培养黑曲霉48h，用豆芽汁培养基培养酿酒酵母和产朊假丝酵母24h，在30℃条件下，用牛肉膏蛋白胨培养基培养枯草芽孢杆菌和假单胞杆菌24h，将上述五种菌种经过活化后待用；(4)将步骤(3)中活化后的黑曲霉、产朊假丝酵母、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和假单胞杆菌以1:1:1:2:2的接种比例进行复配并用扩大培养基进行培养制成混合微生物菌剂，其中，扩大培养基的培养过程为：霉菌在摇床中恒温30℃以转速220rpm培养24h，酵母在摇床中恒温30℃以转速180rpm培养12h，细菌在摇床中恒温30℃以转速180rpm培养12h，以上这五种菌种经培养后得到相应的种子液，取10％种子液在发酵瓶中扩大培养48h得到发酵液，以1:1比例将发酵液与灭菌麸皮进行混合发酵，晾干1d-3d，制成混合微生物菌剂；(5)取一定接种量的混合微生物菌剂、一定添加量的尿素接入到步骤(1)中的发酵培养基发酵一段时间，发酵后浆渣分离，发酵液即为生化黄腐酸溶液。特别地，上述扩大培养基是指除去琼脂后的剩余部分马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。特别地，上述混合微生物菌剂的接种量为3％-7％。特别地，上述尿素的添加量为1％-3％。特别地，上述发酵培养基中的发酵时间为20d-35d。本专利技术在废弃的果渣中接入各种扩大培养后的发酵菌种，进行半固体发酵以生产生化黄腐酸，并在发酵过程中以混合菌剂接种量、尿素添加量、发酵基质含水量和发酵时间为变量，制成生化黄腐酸溶液。该方法不仅可以减少苹果相关企业的负担，保护了环境，还将低了生产生化黄腐酸的成本，使用最优发酵工艺，可制成多功能、高效率和广适用的生化黄腐酸溶液，对半固体发酵生产生化黄腐酸具有切实的参考意义。具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制。实施例一一种苹果渣半固体发酵生产生化黄腐酸的方法，步骤包括：(1)以苹果渣为发酵原料制成40％-80％含水量的发酵培养基；(2)取20g葡萄糖、200g马铃薯、15-20g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成自然pH的马铃薯葡萄糖培养基，取20g葡萄糖、100g马铃薯、15g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成7.2-7.4pH的豆芽汁培养基，取10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g氯化钙、15-20g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成7.0-7.2pH的牛肉膏蛋白胨培养基；(3)在28℃下，用马铃薯葡萄糖培养基培养黑曲霉48h，用豆芽汁培养基培养酿酒酵母和产朊假丝酵母24h，在30℃条件下，用牛肉膏蛋白胨培养基培养枯草芽孢杆菌和假单胞杆菌24h，将上述五种菌种经过活化后待用；(4)将步骤(3)中活化后的黑曲霉、产朊假丝酵母、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和假单胞杆菌以1:1:1:2:2的接种比例进行复配并用扩大培养基进行培养制成混合微生物菌剂，其中，扩大培养基的培养过程为：霉菌在摇床中恒温30℃以转速220rpm培养24h，酵母在摇床中恒温30℃以转速180rpm培养12h，细菌在摇床中恒温30℃以转速180rpm培养12h，以上这五种菌种经培养后得到相应的种子液，取10％种子液在发酵瓶中扩大培养48h得到发酵液，以1:1比例将发酵液与灭菌麸皮进行混合发酵，晾干1d-3d，制成混合微生物菌剂；(5)取3％-7％接种量的混合微生物菌剂、1％-3％添加量的尿素接入到步骤(1)中的发酵培养基发酵20d-35d，发酵后浆渣分离，发酵液即为生化黄腐酸溶液。按照不同的混合微生物菌剂接种量、不同的尿素添加量、不同的发酵培养基发酵时间制成的生化黄腐酸溶液进行黄腐酸含量的测定。测定方法为重铬酸钾容量法，其操作方法如下所述：取0.2g样品置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水，把小玻璃漏斗插在瓶口上，在沸水中不停地搅动加热30min，取出冷却后，把所有溶液和残渣倒入100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度并摇匀，然后用中速滤纸过滤残渣从而得到滤液。取5ml上述滤液置入250ml锥形瓶中，加入4.8mol/L重铬酸钾溶液5ml，加入浓硫酸15ml，在沸水中加热30min使其氧化。最后，从沸水浴中取出氧化得到的溶液，冷却至室温本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种苹果渣半固体发酵生产生化黄腐酸的方法，步骤包括：(1)以苹果渣为发酵原料制成40％‑80％含水量的发酵培养基；(2)取20g葡萄糖、200g马铃薯、15‑20g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成自然pH的马铃薯葡萄糖培养基，取20g葡萄糖、100g马铃薯、15g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成7.2‑7.4pH的豆芽汁培养基，取10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g氯化钙、15‑20g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成7.0‑7.2pH的牛肉膏蛋白胨培养基；(3)在28℃下，用马铃薯葡萄糖培养基培养黑曲霉48h，用豆芽汁培养基培养酿酒酵母和产朊假丝酵母24h，在30℃条件下，用牛肉膏蛋白胨培养基培养枯草芽孢杆菌和假单胞杆菌24h，将上述五种菌种经过活化后待用；(4)将步骤(3)中活化后的黑曲霉、产朊假丝酵母、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和假单胞杆菌以1:1:1:2:2的接种比例进行复配并用扩大培养基进行培养制成混合微生物菌剂，其中，扩大培养基的培养过程为：霉菌在摇床中恒温30℃以转速220rpm培养24h，酵母在摇床中恒温30℃以转速180rpm培养12h，细菌在摇床中恒温30℃以转速180rpm培养12h，以上这五种菌种经培养后得到相应的种子液，取10％种子液在发酵瓶中扩大培养48h得到发酵液，以1:1比例将发酵液与灭菌麸皮进行混合发酵，晾干1d‑3d，制成混合微生物菌剂；(5)取一定接种量的混合微生物菌剂、一定添加量的尿素接入到步骤(1)中的发酵培养基发酵一段时间，发酵后浆渣分离，发酵液即为生化黄腐酸溶液。...

【技术特征摘要】
1.一种苹果渣半固体发酵生产生化黄腐酸的方法，步骤包括：(1)以苹果渣为发酵原料制成40％-80％含水量的发酵培养基；(2)取20g葡萄糖、200g马铃薯、15-20g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成自然pH的马铃薯葡萄糖培养基，取20g葡萄糖、100g马铃薯、15g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成7.2-7.4pH的豆芽汁培养基，取10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g氯化钙、15-20g琼脂、1000ml水混合并充分搅拌制成7.0-7.2pH的牛肉膏蛋白胨培养基；(3)在28℃下，用马铃薯葡萄糖培养基培养黑曲霉48h，用豆芽汁培养基培养酿酒酵母和产朊假丝酵母24h，在30℃条件下，用牛肉膏蛋白胨培养基培养枯草芽孢杆菌和假单胞杆菌24h，将上述五种菌种经过活化后待用；(4)将步骤(3)中活化后的黑曲霉、产朊假丝酵母、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和假单胞杆菌以1:1:1:2:2的接种比例进行复配并用扩大培养基进行培养制成混合微生物菌剂，其中，扩大培养基的培养过程为：霉菌在摇床中恒温30℃以转速220rpm培养24h...

【专利技术属性】
技术研发人员：李想，
申请(专利权)人：萍乡市乐乐腐植酸厂，
类型：发明
国别省市：江西,36