一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体、编码序列及其筛选方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体、编码序列及其筛选方法和应用，属于免疫学技术领域。本发明专利技术提供了艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体的氨基酸序列。采用噬菌体展示技术，将带有恒定区特定基因序列插入到噬菌体编码外壳蛋白的载体中，经重组表达，外源基因表达产物融合在噬菌体外壳蛋白中，并呈现在噬菌体表面，形成噬菌体展示文库，经淘筛，表达纳米抗体的噬菌体单克隆，经测序得到纳米抗体。经phage‑ELISA鉴定，表面表达纳米抗体的噬菌体能够与艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原发生特异结合，且显色较强，说明所述纳米抗体与谷氨酸脱氢酶抗原具有较强的结合性能，因此纳米抗体替换常规抗体应用到艰难梭菌免疫检测试剂盒中。

【技术实现步骤摘要】
一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体、编码序列及其筛选方法和应用
本专利技术属于免疫学
，具体涉及一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体、编码序列及其筛选方法和应用。
技术介绍
骆驼外周血液中存在一种天然缺失轻链的重链抗体，该抗体只包含一个重链可变区和两个常规的CH2和CH3区。通过PCR技术克隆重链可变区所得到的单域抗体称之为VHH抗体(variabledomainofheavy-chainantibody,VHH)，其分子量只有15KD，是普通IgG的十几分之一，结构直径2.5nm，长4nm，所以又称之为纳米抗体(nanobody,Nb)。纳米抗体是目前所知到的最小的具有完整抗原结合活性的抗体，由于其体积小，因此具有较强的抗原抗体结合能力，可以在原核细胞和真核细胞中高效表达。除此之外，还具有稳定的结构和高亲水性，并且由于VHH片段与人的VH序列具有高度同源性，可达到80％以上，具有较低的免疫原性所以可以对其进行人源化改造和修饰。基于以上优点，使得纳米抗体在一些疾病的诊断和治疗中具有的广泛的应用前景。艰难梭菌是革兰氏阳性厌氧杆菌，广泛存在于自然界中，是人和动物肠道中的正常菌群，但是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:1所示。2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括抗原决定簇互补区CDR和骨架区FR；所述抗原决定簇互补区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3；所述骨架区FR包括FR1、FR2、FR3和FR4。3.根据权利要求2所述的纳米抗体，其特征在于，所述CDR1的氨基酸序列为序列表中的SEQIDNO:2；所述CDR2的氨基酸序列为序列表中的SEQIDNO:3；所述CDR3的氨基酸序列为序列表中的SEQIDNO:4；所述FR1的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO:5；所述FR2的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO:6；所述FR3的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO:7；所述FR4的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO:8。4.一种权利要求1～3任意一项所述艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体的编码序列，其特征在于，所述纳米抗体的编码序列的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:9所示。5.权利要求1～3任意一项所述艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取骆驼脾脏组织总RNA，从总RNA中抽提mRNA，反转录，得到cDNA；(2)以所述cDNA为模板，用CALL001/CALL002引物对和VHH-F/VHH-R引物对进行巢式PCR扩增，得到VHH基因片段；所述CALL001的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:10所示；所述CALL002的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:11所示；所述VHH-F的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:12所示；所述VHH-R的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:13所示；(3)将所述VHH基因片段和噬菌体载体pCANTAB5E分别进行酶切，连接，得到噬菌体重组载体pCANTAB5E-VHH；(4)将所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐广贤，方媛，郭乐，潘俊斐，蒋丹，屈昱良，
申请(专利权)人：宁夏医科大学，
类型：发明
国别省市：宁夏,64