The present invention discloses an AATase monoclonal antibody for sorting long oyster granulosa cells and a preparation method. The AATase monoclonal antibody is immunized with a hybridoma cell strain stably secreting AATase antibody, and the ascites of mice is purified. The hybridoma cell strain is prepared by following methods: immunizing mice with recombinant protein shown in amino acid sequence such as SEQ ID NO.3, and taking mice. Splenic cells fused with SP2/0 myeloma cells were inoculated into HAT selective medium to form hybridoma cell lines. Positive cell lines were screened by indirect ELISA method and hybridoma cell lines which could stably secrete AATase antibody were screened by limited dilution method.
【技术实现步骤摘要】
用于分选长牡蛎颗粒细胞的AATase单克隆抗体及制备方法
本专利技术属于分子生物学和细胞生物学
，尤其涉及一种用于分选长牡蛎颗粒细胞的AATase单克隆抗体及制备方法。
技术介绍
血淋巴细胞是贝类固有免疫系统的核心和基础，不同的血淋巴细胞亚群在免疫应答中具有不同的功能。基于血淋巴细胞的物理特征，长牡蛎血淋巴细胞可分为透明细胞、半颗粒细胞和颗粒细胞三大类，研究表明，颗粒细胞是发挥主要免疫功能的细胞亚群。但迄今为止，贝类血淋巴细胞的分离鉴定因缺乏相应的标志分子而一直存在困难。虽然密度梯度离心、流式细胞术、免疫磁珠法等分离细胞亚群的方法相继应用于贝类血淋巴细胞的分选，但效果不甚理想。迄今为止，无法进一步研究颗粒细胞生物学特性、生理学特性及免疫学功能。
技术实现思路
本专利技术是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种用于分选长牡蛎颗粒细胞的AATase单克隆抗体及制备方法。本专利技术的技术解决方案是：一种用于分选长牡蛎颗粒细胞的AATase单克隆抗体，其特征在于：所述AATase单克隆抗体是由稳定分泌AATase抗体的杂交瘤细胞株免疫小鼠，得小鼠腹水经纯化而成；...
【技术保护点】
1.一种用于分选长牡蛎颗粒细胞的AATase单克隆抗体，其特征在于：所述AATase单克隆抗体是由稳定分泌AATase抗体的杂交瘤细胞株免疫小鼠，得小鼠腹水经纯化而成；所述杂交瘤细胞株按如下方法制备：以氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的重组蛋白免疫小鼠，取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后接种于HAT选择培养基中，形成杂交瘤细胞株；采用间接ELISA法筛选出阳性细胞株；用有限稀释法筛选出能稳定分泌AATase抗体的杂交瘤细胞株。
【技术特征摘要】
1.一种用于分选长牡蛎颗粒细胞的AATase单克隆抗体，其特征在于：所述AATase单克隆抗体是由稳定分泌AATase抗体的杂交瘤细胞株免疫小鼠，得小鼠腹水经纯化而成；所述杂交瘤细胞株按如下方法制备：以氨基酸序列如SEQIDNO.3所示的重组蛋白免疫小鼠，取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后接种于HAT选择培养基中，形成杂交瘤细胞株；采用间接ELISA法筛选出阳性细胞株；用有限稀释法筛选出能稳定分泌AATase抗体的杂交瘤细胞株。2.一种如权利要求1所述用于分选长牡蛎颗粒细胞的AATase单克隆抗体的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：a.用引物P1和P2对长牡蛎CgAATase基因编码区片段进行PCR扩增，所述引物P1的DNA序列如SEQIDNO.2所示，所述引物...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋林生，董迷忍，宋小瑞，王伟林，王玲玲，
申请(专利权)人：大连海洋大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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