一种提高楸树增殖系数的组织培养方法及专用培养基技术

本发明专利技术公开了一种提高楸树增殖系数的组织培养方法，是通过初代培养获取初代无菌苗，再将苗切成1.5‑2.0cm的带芽茎段，接种到继代培养基中进行扩繁增殖，由愈伤组织分化得到丛生芽进而诱导生根获得楸树小植株；其中所述继代培养基的配方是：N6培养基，加入0.1～0.2mg/L的NAA，0.8～0.9mg/L的6‑BA以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节pH值到5.8～6.0。本发明专利技术的方法在促进腋芽增殖的基础上，同时促进愈伤诱导，在愈伤基础上促进丛生芽的分化以实现在同等的生长周期内可获得更大量的芽，为楸树良种繁育开辟了新的途径。

A Tissue Culture Method and Special Medium for Improving Proliferation Coefficient of Catalpa bungeana

The invention discloses a tissue culture method for improving the multiplication coefficient of Catalpa bungeana, which obtains the first generation aseptic seedlings through primary culture, cuts the seedlings into 1.5 2.0 cm budded stem segments, inoculates them into the subculture medium for propagation and multiplication, gets cluster buds from callus differentiation and then induces rooting to obtain small plants of Catalpa bungeana; the formula of the subculture medium is as follows: N6 medium is added; NAA of 0.1-0.2 mg/L, 6 BA of 0.8-0.9 mg/L, sucrose of 30 g/L and agar of 7 g/L were used to adjust the pH value to 5.8-6.0. The method of the invention not only promotes axillary bud proliferation, but also promotes callus induction, and promotes the differentiation of cluster buds on the basis of callus, so as to obtain more buds in the same growth cycle, thus opening up a new way for the breeding of improved varieties of Catalpa bungeana.

【技术实现步骤摘要】
一种提高楸树增殖系数的组织培养方法及专用培养基
本专利技术涉及一种楸树的组织培养方法，尤其涉及一种提高楸树增殖系数的组织培养方法及专用培养基，属于林木良种繁育领域。
技术介绍
楸树(CatalpabungeiC.A.Meyer.)为紫葳科，梓树属，在我国已有2000多年的栽培历史，是我国珍贵优质用材树种和名贵的园林观赏树种，已被列入国家木材战略储备树种目录。由于自花授粉的不亲和性，楸树往往开花不结实；即使不同无性系混栽在一起，经昆虫传粉能够结实，但结实很少，种子发芽率很低，实生繁殖较为困难。楸树为难生根树种，扦插繁殖成活率低，且现有的有关扦插技术因操作要求高，或需要设施条件，或费工费时成本高，不易在实际生产中推广应用。埋根繁殖虽比较容易，但埋根繁殖因其繁殖材料相对较少，客观上制约了繁育的规模。采用嫁接繁殖的方法时，首先要培育砧木，目前砧木培育多采用梓树播种育苗方式，但播种后至少需2年才能达到嫁接砧木所需粗度，存在砧木培育生产周期长的缺点。综上方法都不能更好地解决对楸树的快速繁育问题。组织培养技术可以在人为控制范围内，以较短的周期大量繁殖种苗。其最大的特点就是速度快和产量大。杨燕等人发表于《林业科技开发》的“楸树腋芽增殖快繁技术研究”中公开楸树初代最适培养基：N6+6-BA1.0mg/L+NAA0.01mg/L；继代培养最适培养基：N6+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+Vc100mg/L+稀土2mg/L；生根培养最适培养基：N6+NAA1.0mg/L。韩创举等人发表于《西北林学院学报》的“楸树组培技术研究”中报道，如下培养基N6+6-BA1.5mg/L+NAA0.0016mg/L是楸树的最佳增殖培养基，最高增殖系数为7.2。傅玉兰等人发表于《林业科技开发》的“楸树试管丛生芽继代增殖影响因素的研究”中报道，楸树丛生芽继代增殖最适宜培养配方是MS+IBA0.5mg/L+BA4.0mg/L+PVP(100mg/L)+食糖30g/L+琼脂0g/L，最高增殖系数为4.8，且培养周期为35天。中国专利技术专利CN104054580A“一种提高楸树增殖系数的组织培养方法”中公开的最佳腋芽诱导培养基配方为MS+BA0.8mg/l+IBA0.1mg/L；最佳腋芽增殖培养基配方为MS+BA1.5mg/L+ZT0.1mg/L+IAA0.2mg/L；最高增殖系数为15。但其增殖主要通过腋芽诱导和腋芽增殖两部分实现。上海杉一植物科技有限公司申请的专利技术专利CN104719136A公开的“楸树组培苗生根培养方法”中提到，此专利技术在继代中的限定以MS为基础培养基，在生根阶段限定以MS1/2为基础培养基，控制其扩繁比例为1:3～3.5。中国专利技术专利CN106818470A“一种提高楸树增殖系数的组织培养方法”中公开以楸树成熟的种子作为外植体进行愈伤诱导40天获得愈伤组织；再将内部胚性愈伤组织继代培养20天；将再次获得的愈伤组织接种于分化培养基上，培养30天获得楸树再生芽。该方法步骤繁琐，时间跨度较长，增殖率也不高。综合分析上述方法，所述的组培增殖大多是主要集中在促进腋芽增殖。经检索，有关在促进腋芽增殖的基础上，同时促进愈伤诱导，在愈伤基础上促进丛生芽的分化以实现在同等的生长周期内可获得更大量的芽的提高楸树增殖系数的组织培养方法及专利还未见报道。
技术实现思路
为了解决楸树生产中的存在的步骤繁琐、生长周期过长、增殖率不高等问题，本专利技术要解决的问题是提供一种提高楸树增殖系数的组织培养方法及专用培养基。本专利技术所述提高楸树增殖系数的组织培养方法，步骤是：(1)选取剪成长10±5cm的当年生楸树带腋芽的茎段或顶芽，剪去叶片保留1～2cm的叶柄，用洗洁精清液浸泡5～10min后再置于流水下冲洗20～30min；在超净工作台上，用75％的酒精浸泡30s，然后用0.1％的升汞处理5～8min，用无菌水冲洗3-4次后再次将叶柄剪短至3～5mm以免有残留，接种至初代培养基中，每瓶培养基接种2-3株茎段，初代培养至少28天，获取初代无菌苗；(2)待初代无菌苗长成后，将苗子取出，切成1.5-2.0cm的带芽茎段，再接种到继代培养基中，每瓶培养基接种1-2株，进行扩繁增殖；7-10天后，在继代培养基中开始出现愈伤组织以及丛生芽萌发，28天后由愈伤组织分化得到高度5±0.5cm的丛生芽5-10棵，进一步诱导生根即可获得楸树小植株；其特征在于；所述初代培养基的配方是：MS培养基+6-BA0.5±0.1mg/L+IAA0.15±0.02mg/L，初代培养的条件是温度25±1℃无菌培养，光照时间为16±1h/d，光照强度为1800±100lx；所述继代培养基的配方是：N6培养基，加入0.1～0.2mg/L的NAA，0.8～0.9mg/L的6-BA以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节pH值到5.8～6.0；继代培养的条件是温度25±1℃无菌培养，光照时间为16±1h/d，光照强度为1800±100lx。上述提高楸树增殖系数的组织培养方法中：所述初代培养基的配方优选是：MS培养基+6-BA0.5mg/L+IAA0.15mg/L，初代培养的条件优选是温度25℃无菌培养，光照时间为16h/d，光照强度为1800lx。上述提高楸树增殖系数的组织培养方法中：所述继代培养基的配方优选是：N6培养基，加入0.1mg/L的NAA，0.8mg/L的6-BA以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节pH值到5.8～5.9；继代培养的条件优选是温度25℃无菌培养，光照时间为16h/d，光照强度为1800lx。本专利技术所述提高楸树增殖系数的组织培养方法的专用培养基，其特征在于：所述培养基是初代培养基和继代培养基，其中初代培养基的配方是：MS培养基+6-BA0.5±0.1mg/L+IAA0.15±0.02mg/L；继代培养基的配方是：N6培养基，加入0.1～0.2mg/L的NAA，0.8～0.9mg/L的6-BA以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节pH值到5.8～6.0。进一步优选的实施方式是：所述初代培养基的配方是：MS培养基+6-BA0.5mg/L+IAA0.15mg/L；所述继代培养基的配方是：N6培养基，加入0.1mg/L的NAA，0.8mg/L的6-BA以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节pH值到5.8～5.9。本专利技术公开的提高楸树增殖系数的组织培养方法在继代组培苗的增殖中，获得初代无菌组培苗后将原有愈伤清理干净，转接至增殖培养基中，愈伤组织分化十分明显，由愈伤组织分化得到的丛生芽数量可观。相对于只对腋芽进行增殖，在此基础上确保在短期的时间内获得更多的继代组培苗，步骤简单，实现了组培快繁的特点和实用性。申请人从多次实验筛选比较的结果来看，本专利技术公开的专用培养基特别是继代增殖培养基(N6+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L)对楸树的芽增殖有较好的效果，有效的解决了在扩繁过程中的增殖问题。增殖数量可达5-10棵，愈伤组织分化的出芽率为5-8，而已有的其它配方增殖效果仅在0-3棵之间，效果不佳。本专利技术提供的提高楸树增殖系数的组织培养方法在促进腋芽增殖的基础上，同时促进愈伤诱导，在愈伤基础上促进丛生芽的分化以实现在同等的生长周期内可获得更大量的芽，为楸树良本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高楸树增殖系数的组织培养方法，步骤是：(1)选取剪成长10±5cm的当年生楸树带腋芽的茎段或顶芽，剪去叶片保留1～2cm的叶柄，用洗洁精清液浸泡5～10min后再置于流水下冲洗20～30min；在超净工作台上，用75％的酒精浸泡30s，然后用0.1％的升汞处理5～8min，用无菌水冲洗3‑4次后再次将叶柄剪短至3～5mm以免有残留，接种至初代培养基中，每瓶培养基接种2‑3株茎段，初代培养至少28天，获取初代无菌苗；(2)待初代无菌苗长成后，将苗子取出，切成1.5‑2.0cm的带芽茎段，再接种到继代培养基中，每瓶培养基接种1‑2株，进行扩繁增殖；7‑10天后，在继代培养基中开始出现愈伤组织以及丛生芽萌发，28天后由愈伤组织分化得到高度5±0.5cm的丛生芽5‑10棵，进一步诱导生根即可获得楸树小植株；其特征在于；所述初代培养基的配方是：MS培养基+6‑BA 0.5±0.1mg/L+IAA 0.15±0.02mg/L，初代培养的条件是温度25±1℃无菌培养，光照时间为16±1h/d，光照强度为1800±100lx；所述继代培养基的配方是：N6培养基，加入0.1～0.2mg/L的NAA，0.8～0.9mg/L的6‑BA以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节pH值到5.8～6.0；继代培养的条件是温度25±1℃无菌培养，光照时间为16±1h/d，光照强度为1800±100lx。...

【技术特征摘要】
1.一种提高楸树增殖系数的组织培养方法，步骤是：(1)选取剪成长10±5cm的当年生楸树带腋芽的茎段或顶芽，剪去叶片保留1～2cm的叶柄，用洗洁精清液浸泡5～10min后再置于流水下冲洗20～30min；在超净工作台上，用75％的酒精浸泡30s，然后用0.1％的升汞处理5～8min，用无菌水冲洗3-4次后再次将叶柄剪短至3～5mm以免有残留，接种至初代培养基中，每瓶培养基接种2-3株茎段，初代培养至少28天，获取初代无菌苗；(2)待初代无菌苗长成后，将苗子取出，切成1.5-2.0cm的带芽茎段，再接种到继代培养基中，每瓶培养基接种1-2株，进行扩繁增殖；7-10天后，在继代培养基中开始出现愈伤组织以及丛生芽萌发，28天后由愈伤组织分化得到高度5±0.5cm的丛生芽5-10棵，进一步诱导生根即可获得楸树小植株；其特征在于；所述初代培养基的配方是：MS培养基+6-BA0.5±0.1mg/L+IAA0.15±0.02mg/L，初代培养的条件是温度25±1℃无菌培养，光照时间为16±1h/d，光照强度为1800±100lx；所述继代培养基的配方是：N6培养基，加入0.1～0.2mg/L的NAA，0.8～0.9mg/L的6-BA以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节pH值到5.8～6.0；继代培养的条件是温度25±1℃无菌培养，光照时间为16±1h/d，光照强度为1800±100lx。...

【专利技术属性】
技术研发人员：董玉峰，姜何，燕丽萍，王卫东，荀守华，姜岳忠，毛秀红，李善文，韩丛聪，
申请(专利权)人：山东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37