PI15作为骨关节炎标志物的应用制造技术

技术编号:20264492 阅读:40 留言:0更新日期:2019-02-02 01:03
本发明专利技术公开了PI15作为骨关节炎标志物的应用。PI15可用于判断受试者是否具有患骨关节炎的风险或者判断受试者是否患有骨关节炎。另外,PI15还可以用于制备治疗骨关节炎的药物。本发明专利技术为临床在分子水平上诊断骨关节炎提供了新的诊断方法,同时为骨关节炎的基因治疗提供了新的药物靶点。

Application of PI15 as a marker of osteoarthritis

The invention discloses the application of PI15 as a marker of osteoarthritis. PI15 can be used to determine whether a subject is at risk for osteoarthritis or whether a subject is at risk for osteoarthritis. In addition, PI15 can also be used to prepare drugs for the treatment of osteoarthritis. The invention provides a new diagnostic method for clinical diagnosis of osteoarthritis at the molecular level, and provides a new drug target for gene therapy of osteoarthritis.

【技术实现步骤摘要】
PI15作为骨关节炎标志物的应用
本专利技术涉及诊断、治疗、预测预后领域,更具体地,本专利技术涉及以检测PI15异常为手段的诊断、预测预后方法。
技术介绍
骨关节炎(Osterarthritis,OA)也称为退行性关节炎,是在老年人和肥胖者中最普遍的疾病。OA是关节的疾病,但不同于类风湿性关节炎(RA),这种疾病不是系统性的,通常只影响一个或数个关节。这种疾病导致关节软骨的总的破坏,下方骨头的硬化,和骨赘形成,造成运动能力丧失和疼痛。最终的结果往往是需要全关节置换。人口统计学趋势表明,到2020年,受关节疾病影响的人群将增加到50%,全世界将有5.7亿人受到骨关节炎的困扰。我国社会逐渐进入老龄化社会,因此我们将面临骨关节炎发病的普遍流行时期。对该病的研究十分重要和迫切。骨关节炎的原发异常可以发生在关节软骨、滑膜、软骨下骨、韧带或关节周围的神经肌肉组织。关节软骨的损害是骨关节炎最明显的变化。关节软骨丧失是骨关节炎的关键病变。随着蛋白聚糖含量的下降,关节软骨逐渐缓慢降解。由于骨关节炎患者的蛋白聚糖、胶原和透明质酸合成速率均增加,使得组织的分解代谢活性特别高。通常认为,蛋白溶解酶和中性金属蛋白酶在骨关节炎关节软骨丢失中是最重要的原因。关节软骨组织内没有血管和神经,对创伤、炎症的反应是由关节软骨、滑膜组织或关节液中的蛋白质如细胞因子等介导的。滑膜对于维持关节的正常功能,并且在骨关节炎疾病的发生发展过程中起着重要的作用。目前临床上对于骨关节炎的诊断主要基于影像学的检查。X线表现主要为关节间隙狭窄,软骨下骨质硬化及囊性变,关节边缘骨赘形成,关节面萎陷、变形和关节半脱位等。MRI可示早期软骨、半月板等关节结构的病变,有利于早期诊断。CT用于椎间盘病的诊断,优于X线。关节间隙变窄,软骨下骨硬化,边缘性骨刺脊椎关节连成骨桥。亦可见骨囊肿以及畸形。如发现这些变化可作为诊断的依据和估计关节损伤的程度。OA一般在早期没有或很少有症状,只在继发炎症、疼痛或影响关节的活动时,病人才找医生。此时,关节损伤发生已久。因为开发用于早期骨关节炎诊断的方法是亟待解决的问题。在分子水平上尤其是在基因水平上进行骨关节炎的早期诊断已经成为了骨关节炎诊断领域的发展趋势,在诊断方面,申请号为:201510548635.X、2015105495645、2015105486241、201510627048.X、2015107250040、201510724747.6、2015107257552专利文献均披露了可以用于骨关节炎诊断的基因标志物。本申请是在现有技术的启示下寻找新的可以用于骨关节炎诊断的生物标志物。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种通过检测PI15基因或蛋白表达差异来诊断骨关节炎的方法。本专利技术的目的之二在于提供一种通过检测PI15基因或蛋白表达差异来预测骨关节炎预后的方法。本专利技术的目的之三在于提供一种通过激活PI15基因或PI15蛋白来治疗骨关节炎的方法。本专利技术的目的之四在于提供一种用于治疗骨关节炎的药物。为了实现上述目的,本专利技术采用了如下技术方案:本专利技术提供了检测PI15基因或PI15蛋白的产品在制备骨关节炎诊断工具中的用途。本专利技术还提供了检测PI15基因或PI15蛋白的产品在制备预测骨关节炎预后工具中的用途。进一步,所述检测PI15基因或PI15蛋白的产品包括检测PI15基因或PI15蛋白的表达水平的产品。所述产品包括能够结合PI15基因的核酸或者能够结合PI15蛋白的物质(例如抗体)。所述核酸能够检测PI15基因的表达水平;所述物质能够检测PI15蛋白的表达水平。本专利技术的检测PI15基因的产品可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能:如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。包含在上述产品中的核酸可以通过化学合成来获得,或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因,然后使用设计用于扩增期望核酸的引物扩增它来获得。进一步,所述PCR方法为已知方法,例如,ARMS(AmplificationRefractoryMutationSystem,扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。上面所述的核酸包括扩增PI15基因的引物,产品中包括的引物可以通过通过化学合成来制备,通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计,并通过化学合成来制备。在本专利技术的具体实施方案中,所述核酸为QPCR实验中使用的扩增引物,所述引物的序列如SEQIDNO.1(正向序列)和SEQIDNO.2(反向序列)所示。上面所述的核酸还可包括探针,所述探针可以通过化学合成来制备,通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计,并通过化学合成来制备,或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因,并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的检测PI15蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能:例如,可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的检测PI15蛋白的产品包括特异性结合PI15蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段,只要它结合靶蛋白质即可。本专利技术的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本专利技术的检测PI15蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸,包含该核酸的载体,和携带该载体的细胞。抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如,制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后,从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的PI15蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对PI15蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体:用与上文相同的抗原免疫动物,从经过免疫的动物收集血液样品,从血液中分离出血清,然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如,可以如下荧光标记蛋白质或肽:用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽,添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料,然后混合溶液,再于室温放置10分钟。另外,标记可使用商品化的标记试剂盒,诸如生物素标记试剂盒,如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.检测PI15基因或PI15蛋白的产品在制备诊断骨关节炎或预测骨关节炎预后的工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测PI15基因或PI15蛋白的产品在制备诊断骨关节炎或预测骨关节炎预后的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述检测PI15基因或PI15蛋白的产品包括检测PI15基因或PI15蛋白的表达水平的产品。3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述产品包括能够结合PI15基因的核酸或者能够结合PI15蛋白的物质;所述核酸能够检测PI15基因的表达水平;所述物质能够检测PI15蛋白的表达水平。4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述核酸是实时定量PCR中使用的特异扩增PI15基因的引物如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。5.一种诊断骨关节炎或预测骨关节炎预后的工具,其特征在于,所述工具包括能够检测PI1...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘跃洪周宇陈曦王志聪张建军汪红杨灵江伟
申请(专利权)人:德阳市人民医院
类型:发明
国别省市:四川,51

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