本发明专利技术公开了一株防治荔枝霜疫病的生防菌株PNC25及其应用。一株防治荔枝霜疫病的生防菌株PNC25，为乙酰微小杆菌(Exiguobacterium acetylicum)，于2016年11月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC No.60108。本发明专利技术的乙酰微小杆菌对荔枝霜疫病菌有抑制作用，在多个实验条件下表现优异的防治荔枝霜疫病的生防作用，本发明专利技术所述的生防菌剂能在防治荔枝霜疫病中应用。同时，本发明专利技术的乙酰微小杆菌对荔枝具有良好的保鲜效果，可用于制备荔枝保鲜制剂。
A Biocontrol Strain PNC25 for Litchi Frost Blight and Its Application
The invention discloses a Biocontrol Strain PNC25 for controlling litchi frost blight and its application. A Biocontrol Strain PNC25 against litchi frost blight, Exiguobacterium acetylicum, was deposited in Guangdong Provincial Microbial Species Preservation Center on November 15, 2016. The strain Preservation Number is GDMCC No. 60108. The Microbacterium acetyl of the invention has an inhibitory effect on Lychee frost blight, and has excellent biocontrol effect on Lychee frost blight under various experimental conditions. The biocontrol agent of the invention can be applied in the prevention and control of lychee frost blight. At the same time, the Microbacterium acetyl of the invention has good fresh-keeping effect on litchi, and can be used to prepare the preservation preparation of litchi.
【技术实现步骤摘要】
一株防治荔枝霜疫病的生防菌株PNC25及其应用
本专利技术属于植物保护
，涉及一株防治荔枝霜疫病的生防菌株PNC25及其应用。
技术介绍
荔枝(LitchichinensisSonn)是南方地区重要的亚热带经济作物，素有“中华之珍果”的美称，其经济价值高，是我国在国际市场上最具竞争力的果品之一。但是在我国荔枝主产区，由荔枝霜疫病菌(PeronophythoralitchiiChenexKoetal.)引起的霜疫霉病是引起荔枝减产的最主要的病害之一。该病害的流行具有间接性爆发的特点，受气候影响较大，在适宜发病的年份，可引起荔枝80％以上的损失。目前，对荔枝霜疫病害控制的有效措施主要以化学防治为主，但是由于化学农药的大量使用所诱发的环境污染问题和病原物的抗药性问题日显突出，因而研究和开发低毒、无残留的生物源农药用于荔枝病害的防治，对于控制农残量、确保食用安全性和提高产品国际竞争力具有十分重要的意义。微小杆菌属细菌是一种常见的细菌，目前方法用于防治污染。201110195307.8公开了一株微小杆菌属菌株MG2，该菌株具有很高的脱色高效性，能作为降解三苯甲烷类染料孔雀绿的应用。201610012010.6公开了一株墨西哥微小杆菌2a，2a对原油中胶质及沥青质的最大降解率达到72.8％及57.9％，可使原油粘度降低11.1％；可使固体石蜡在正己烷中的溶解度显著提高，可溶解石蜡量为石蜡总量的62.0％，结晶石蜡量较对照组降低64.7％，使清蜡率及防蜡率分别达77.1％及96.9％；其细胞呈高疏水性，并能较牢靠的附着在金属表面，形成生物膜，防止蜡结晶沉积。200810063812.5公开了一株生物除锰功能菌MB4(Exiguobacteriumsp.)属于微小杆菌属，具有去除水中Mn2+的能力，Mn2+去除率高于91％。目前尚未见乙酰微小杆菌具有防治荔枝霜疫病功能的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供了一株防治荔枝霜疫病的生防菌株PNC25。本专利技术的另一目的是提供该菌株的应用。本专利技术的又一目的是提供含有该菌株的菌剂及其制备方法。本专利技术的目的可通过如下技术方案实现：一株防治荔枝霜疫病的生防菌株PNC25，为乙酰微小杆菌(Exiguobacteriumacetylicum)，于2016年11月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCCNo.60108。本专利技术所述的保藏号为GDMCCNo.60108的生防菌株PNC25在制备防治荔枝霜疫病的药物中的应用。一种防治荔枝霜疫病的生防菌剂，以所述的保藏号为GDMCCNo.60108的乙酰微小杆菌PNC25为有效成分，其中所述的乙酰微小杆菌PNC25的活菌浓度为1×108～109CFU/mL。本专利技术所述的生防菌剂的制备方法，由乙酰微小杆菌PNC25经液体发酵制备得到，具体包含以下步骤：将乙酰微小杆菌PNC25接种至LB培养液中培养，即可获得所述的生防菌剂。其中，所述LB培养液的pH值优选7.0-7.2。所述的培养优选28～30℃，摇床震荡速率为180～200rpm下培养24h。本专利技术所述的保藏号为GDMCCNo.60108的生防菌株PNC25在防治荔枝霜疫病中的应用。本专利技术所述的生防菌剂在防治荔枝霜疫病中的应用。所述的生防菌剂在防治荔枝霜疫病时可在田间荔枝65-75％成熟喷雾使用，或者采后室温贮藏过程喷雾使用。本专利技术所述的保藏号为GDMCCNo.60108的乙酰微小杆菌PNC25在荔枝保鲜中的应用。本专利技术所述的生防菌剂在荔枝保鲜中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术得到的乙酰微小杆菌来源于荔枝内生细菌，能很好地在荔枝果实表面定殖；另外本专利技术从荔枝上筛选到的内生菌，将其用于荔枝病害的防治，表现为特定种群间某种微生物数量的增长或消减，并未改变荔枝上微生物种群的类别从而影响种群的稳定性，另外由于其与荔枝长期共存，互惠共生，形成了一系列与其相似的生存机制，将其喷施到荔枝果实表面用于病害的防治，对荔枝的食用及其加工产品来说更加安全可靠。本专利技术的乙酰微小杆菌对荔枝霜疫病菌有抑制作用，在多个实验条件下表现优异的防治荔枝霜疫病的生防作用，而且本专利技术是专门针对荔枝霜疫病开发的生防制剂。由于是生物制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有利于荔枝的无公害生产，农民可以不用或减少其他化学农药的用量，这不仅可为农民节省开支，而且有利于水果的出口。同时，本专利技术的乙酰微小杆菌对荔枝具有良好的保鲜效果，可用于制备荔枝保鲜制剂。本专利技术得到的乙酰微小杆菌，培养条件要求低，具有很好的开发应用前景。生物样品保藏信息生防菌株PNC25，分类名为Exiguobacteriumacetylicum，于2016年11月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，地址为菌种保藏号为GDMCCNo.60108。具体实施方式实施例1菌株来源：PNC25由广东省揭阳市惠来某荔枝果园“园糯”果肉内部分离得到。采集后的样品迅速装入写好编号的塑料袋中带回实验室进行分离。剪取果肉3g，用1％的次氯酸钠1mL浸5min，70％酒精浸2min，无菌水清洗3次。(取最后一次清洗的溶液0.1mL涂R2A，或取0.1mL最后一次清洗液加入R2A培养液，30℃振荡培养，若48h后无菌生长则认为表面消毒干净)。用灭菌的研砵分别研碎表面消毒好的果肉，加3mL无菌水，无菌棉布过滤，用无菌水稀释10倍，取0.1mL依次稀释，分别取10-4、10-5、10-6三个梯度0.1mL涂R2A平板，28℃培养48h，选取菌落数在50-300之间的平板，计数且挑取所有菌落，纯化，-70℃，40％甘油保存备用(Bergetal.,2000)。平板颉颃活性测定采用对峙培养法，将保存于20℃中的霜疫霉菌接种到胡萝卜(CA)平板上活化，待真菌长满平板后用灭菌的打孔器从菌落外边缘均匀的打成直径为5mm的圆形菌块。将菌丝块接种在1:1体积混合的CA-PDA培养基中心，在其四周距中心约27mm处接种一株细菌，四个重复。25℃培养5d，待对照菌丝长满平板后，记录抑菌带大小。菌株水解酶和代谢产物活性测定蛋白酶(Yangetal.,2008)、几丁质酶(RobertsandSelitrennikoff，1988)，β-1,3-葡聚糖酶(Yang2011)、纤维素酶(GhoseT.K1987)、嗜铁素活性(Shinetal.,2001)、吲哚乙酸活性(SawarandKremer1992)测定参考以上相关文献方法完成。结果显示，该菌株可产生蛋白酶和β-1,3-葡聚糖酶及嗜铁素，对霜疫霉菌无平板颉颃活性(表1)。表1菌株基本特性分析菌株PNC25在LB固体培养基上28du培养24-48h，菌落圆形，大小中等，扁平，不透明，菌落黄色，粘稠，边缘不规则，表明光滑。经革兰氏染色显示蓝紫色，形态为短杆状，培养48h菌体近似球形，细胞有周生鞭毛；芽孢染色为红色，为营养体细胞，无明显的着色呈绿色的芽孢形成。接触酶为阳性，能分解淀粉，也可以液化明胶。16SrDNA基因片段序列测序将该菌株鉴定为Exiguobacteriumacetylicum(表2)。表2测序比对结果实施例2菌剂本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株防治荔枝霜疫霉病的生防菌株PNC25，为乙酰微小杆菌(Exiguobacterium acetylicum)，于2016年11月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC No.60108。
【技术特征摘要】
1.一株防治荔枝霜疫霉病的生防菌株PNC25，为乙酰微小杆菌(Exiguobacteriumacetylicum)，于2016年11月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCCNo.60108。2.权利要求1所述的保藏号为GDMCCNo.60108的生防菌株PNC25在制备防治荔枝霜疫霉病的药物中的应用。3.一种防治荔枝霜疫霉病的生防菌剂，其特征在于：以所述的保藏号为GDMCCNo.60108的乙酰微小杆菌PNC25为有效成分，其中活菌浓度为1×108～109CFU/ml。4.权利要求3所述的生防菌剂的...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑丽，吴健雄，蒋仁娇，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院广州实验站，
类型：发明
国别省市：广东,44
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