一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法技术

本发明专利技术公开了一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法，属于生物工程技术领域。本发明专利技术先是将纳豆菌在种子培养基中培养8‑15h，继续在0℃低温处理24‑28h，再在发酵培养基培养24‑36h，得到的纳豆菌代谢产物的抗菌作用比不经过低温处理的代谢产物的抗菌作用要好。本发明专利技术方法简单、便于操作，可用于增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用。

A Method for Enhancing the Antimicrobial Activity of Nattobacillus Metabolites

The invention discloses a method for enhancing the antimicrobial effect of nattobacillus metabolites, which belongs to the field of bioengineering technology. The invention first cultures natto bacteria in seed culture medium for 8 to 15 hours, then continues to treat it at 0 (?) for 24 to 28 hours at low temperature, and then cultures it in fermentation medium for 24 to 36 hours. The antimicrobial effect of the natto bacterial metabolites obtained is better than that of the metabolites without low temperature treatment. The method of the invention is simple and easy to operate, and can be used to enhance the antimicrobial effect of the metabolites of natto bacteria.

【技术实现步骤摘要】
一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法
本专利技术涉及一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法，属于生物工程

技术介绍
食品工业中使用的防腐剂大多是化学防腐剂，对人体有一定的毒副作用。开发天然防腐剂是目前食品防腐研究的热点，从传统发酵食品的微生物的代谢产物中寻找天然生物防腐剂更是一个安全有效的方法。纳豆菌的代谢产物具有广谱抗菌作用，对常见的污染食品的微生物有拮抗作用。经日本专家研究，纳豆菌的代谢产物对细菌、酵母菌和霉菌均具有一定的抗菌活性，具有抑制沙门氏菌、伤寒菌、痢疾菌及O-157、H7大肠杆菌等致病菌作用。纳豆菌代谢的粘液里含有杆菌肽、多粘菌素和2,6-吡啶梭酸，对原发性大肠杆菌及沙门氏菌具有较强抗菌作用。多粘菌素对革兰氏阴性菌的抗菌活性强，主要敏感菌有大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、布鲁氏菌、弧菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌等，尤其对绿脓杆菌具有强大的杀菌作用。短杆菌肽和杆菌肽主要作用于革兰氏阳性菌。杆菌肤对耐药金黄色葡萄球菌、肠球菌、链球菌有效，对螺旋体和放线菌也有效，但对革兰氏阴性菌无效。纳豆菌产生的抗菌物质是经过微生物发酵而产生的，属于纯生物制剂，对人、畜均无毒害作用，因此可以通过生物纯化技术把这些抗菌物质分离出来，用来制取天然生物防腐剂，把它运用在食品添加剂方面。其作用可相当于防腐剂，且无毒无副作用，以此来满足消费者对天然食品防腐剂的要求。
技术实现思路
本专利技术目的是解决纳豆菌代谢产物抑菌作用较弱的问题，提供一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法。本专利技术的技术方案概述如下：一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法，包括如下步骤：(1)将纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)接种在种子培养基中，220r/min的摇床上37℃培养8-15h，得到种子液；(2)低温预处理：将培养好的种子液以12000r/min低温(4℃)离心15min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中进行0℃低温预处理24-48h。(3)将步骤(2)预处理后的种子液按3％-5％的接种量接种于发酵培养基中，37℃在220r/min的摇床上培养24-36h。本专利技术的有益效果：本专利技术对在种子培养基中培养8-15h得到菌体进行24-48h的低温预处理，菌体再在发酵培养基上发酵24-36h得到的代谢产物的抗菌作用效果比对照组(未经过低温预处理)要好。本专利技术的方法，简单易行，可以有效且快速增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用。具体实施方式纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)属于枯草芽孢杆菌属，保藏编号为BNCC185324，于2017年6月构自北纳生物(www.bnbio.com)，地址:北京市朝阳区双惠苑甲5号楼。大肠杆菌(Escherichiacoli)，保藏编号为BNCC336902，于2017年3月构自北纳生物(www.bnbio.com)，地址:北京市朝阳区双惠苑甲5号楼。种子培养基：蛋白胨1wt％，牛肉膏0.3wt％，NaCl0.5wt％，葡萄糖0.5wt％，酵母膏0.5wt％，PH为7.0。发酵培养基：葡萄糖2wt％，蛋白胨0.5wt％，NaCl0.5wt％，K2HPO40.4wt％，KH2PO40.2wt％，pH为7.0。实施例1(G1)一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法，包括如下步骤：(1)将纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)接种在上述种子培养基中，220r/min的摇床上37℃培养8h，得到种子液；(2)低温预处理：将培养好的种子液以12000r/min，4℃离心15min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中进行0℃低温预处理24h；(3)将步骤(2)预处理后的种子液按3％的接种量接种于发酵培养基中，37℃在220r/min的摇床上培养24h。对照例1(CK1)(1)将纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)接种在种子培养基中，220r/min的摇床上37℃培养8h，得到种子液；(2)对照预处理方法：将培养好的种子液以12000r/min(4℃)离心15min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中进行室温预处理24h；(3)将步骤(2)预处理后的种子液按3％的接种量接种于发酵培养基中，37℃在220r/min的摇床上培养24h。取步骤(3)发酵结束后的菌悬液离心收集上清液，即为纳豆菌代谢产物溶液；取106～107cfu/mL指示菌(大肠杆菌)悬液0.2mL加入已制备好的2个平皿培养基中，涂布均匀，再用无菌镊子在每皿中放入3个无菌牛津杯，分别用无菌移液管吸取0.2mL实施例1中G1和对照例1中CK1的代谢产物溶液放入相应标记的牛津杯中，48h后测量各抑菌圈直径，取均值。(见表1)实施例2(G2)一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法，包括如下步骤：(1)将纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)接种在种子培养基中，220r/min的摇床上37℃培养12h，得到种子液；(2)低温预处理：将培养好的种子液以12000r/min(4℃)离心15min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中进行0℃低温预处理36h；(3)将步骤(2)预处理后的种子液按4％的接种量接种于发酵培养基中，37℃在220r/min的摇床上培养30h。对照例2(CK2)(1)将纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)接种在种子培养基中，220r/min的摇床上37℃培养12h，得到种子液；(2)对照预处理方法：将培养好的种子液以12000r/min(4℃)离心15min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中进行室温预处理36h；(3)将步骤(2)预处理后的种子液按4％的接种量接种于发酵培养基中，37℃在220r/min的摇床上培养30h。取发酵结束后的菌悬液离心收集上清液，即为纳豆菌代谢产物溶液；取106～107cfu/mL指示菌(大肠杆菌)悬液0.2mL加入已制备好的2个平皿培养基中，涂布均匀，再用无菌镊子在每皿中放入3个无菌牛津杯，分别用无菌移液管吸取0.2mLG2和CK2的代谢产物溶液放入相应标记的牛津杯中，48h后测量各抑菌圈直径，取均值。(见表1)实施例3(G3)一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法，包括如下步骤：(1)将纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)接种在种子培养基中，220r/min的摇床上37℃培养15h，得到种子液；(2)低温预处理：将培养好的种子液以12000r/min(4℃)离心15min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中进行0℃低温预处理48h；(3)将步骤(2)预处理后的种子液按5％的接种量接种于发酵培养基中，37℃在220r/min的摇床上培养36h。对照例3(CK3)(1)将纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)接种在种子培养基中，220r/min的摇床上37℃培养15h，得到种子液；(2)对照预处理方法：将培养好的种子液以12000r/min(4℃)离心15min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中进行室温预处理48h；(3)将步骤(2)预处理后的种子液按5％的接种量接种于发酵培养基中，37℃在220r/min的摇床上培养36h。取发酵结束后的菌悬液离心收集上清液，即为纳豆菌代谢产物溶液；取106～107cfu/mL指示菌(大肠杆菌)悬液0.2mL加入已制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法，包括如下步骤：(1)将纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)接种在种子培养基中，220r/min的摇床上37℃培养8‑15h，得到种子液；(2)低温预处理：将培养好的种子液以12000r/min，4℃低温离心15min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中进行0℃低温预处理24‑48h；(3)将步骤(2)预处理后的种子液按3％‑5％的接种量接种于发酵培养基中，37℃在220r/min的摇床上培养24‑36h。

【技术特征摘要】
1.一种增强纳豆菌代谢产物的抗菌作用的方法，包括如下步骤：(1)将纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)接种在种子培养基中，220r/min的摇床上37℃培养8-15h，得到种子液；(2)低温预处理：将培养好的种子液以1200...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁东，孙培，王畅，
申请(专利权)人：天津大学前沿技术研究院，
类型：发明
国别省市：天津,12