一种蜚蠊内生放线菌的抗真菌活性筛选方法及其发酵方法技术

本发明专利技术属于环境微生物领域，具体涉及一种蜚蠊内生放线菌的抗真菌活性筛选方法及其发酵方法。本发明专利技术提供的蜚蠊内生放线菌的抗真菌活性筛选方法主要包括以下步骤：A、将蜚蠊内生放线菌单菌落接种至培养基内，培养5‑7天后，挑取菌块接种于种子培养基中培养，然后制备菌悬液，得一级种子液；B、转入液体发酵培养基中培养，摇瓶发酵、离心，得发酵液上清液；C、将PDA培养基冷却，加入白色念珠菌混悬液，采用双层倒板法倒入平板上，冷却；将牛津杯均匀放在平板上，加入发酵液上清液，培养3‑4天后，观察并测量抑菌圈直径；本发明专利技术提供的蜚蠊肠道内生放线菌的发酵方法步骤包括：将菌株接种于发酵培养基中，恒温培养5～7天。本发明专利技术提供的一种蜚蠊内生放线菌的抗真菌活性筛选方法及其发酵方法，可筛选出对真菌有显著抑制作用的菌株，为抗真菌活性物质的扩大生产提供了重要的参考。

Screening and Fermentation of Antifungal Activities of Endophytic Actinomycetes from Cockroaches

The invention belongs to the field of environmental microorganisms, in particular to a screening method for antifungal activity of Endophytic Actinomycetes in cockroaches and a fermentation method thereof. The method for screening the antifungal activity of Endophytic Actinomycetes in cockroaches provided by the invention mainly includes the following steps: A. inoculate the single colony of Endophytic Actinomycetes in the culture medium of cockroaches, after 5 to 7 days of cultivation, pick up the bacterial blocks and inoculate them in the seed culture medium, then prepare the suspension of bacteria, and obtain the first-grade seed liquid; B. Transfer into the liquid fermentation medium, shake flask fermentation and centrifugation, and obtain the fermentation liquid. Supernatant; C. Cooling PDA medium, adding Candida albicans suspension, pouring into the plate by double-layer inverted plate method, cooling; evenly placing Oxford cup on the plate, adding the supernatant of fermentation liquid, culturing for 3 to 4 days, observing and measuring the diameter of bacteriostatic zone; The fermentation method steps of Endophytic Actinomycetes in cockroach intestine provided by the invention include: inoculating strains into fermentation medium. The cells were incubated at constant temperature for 5 to 7 days. The invention provides a screening method for antifungal activity of Endophytic Actinomycetes in cockroaches and a fermentation method, which can screen out strains that have significant inhibitory effect on fungi, and provides an important reference for expanding the production of antifungal active substances.

【技术实现步骤摘要】
一种蜚蠊内生放线菌的抗真菌活性筛选方法及其发酵方法
本专利技术属于环境微生物领域，具体涉及一种蜚蠊内生放线菌的抗真菌活性筛选方法及其发酵方法。
技术介绍
近年来，由于免疫抑制剂、抗生素和激素的广泛使用，以及器官移植、恶性肿瘤、艾滋病患者的增加，导致临床真菌感染日渐增多。真菌感染已成为癌症、艾滋病等患者主要死亡原因之一，真菌感染的日趋严重使得抗真菌药物需求日趋增长，因此，加强抗真菌药物研发刻不容缓。放线菌是药物研发的重要资源，人们至今已发现多种放线菌代谢产物有抗真菌活性，有些已应用到临床，获得较好疗效。长期以来，放线菌药物研究重点多集中在土壤放线菌。但是，土壤放线菌资源研究日趋达到极限，从中分离的活性产物95％以上都是已知化合物，发现新药几率大大降低。因此，世界各国科研人员在新菌株的来源、新菌株的分离手段和新的筛选方法方面越来越重视。中药材蜚蠊作为世界上生命力最强的昆虫类群之一，其体内分布着大量的内生微生物。蜚蠊特殊的生活环境使得其体内内生菌在种类和功能上具有丰富的多样性，是获得良好活性物质的内生菌资源。龚水明等检测了蜚蠊肠道内生放线菌WA2-4和WA2-5的抗真菌活性，并对菌株进行初本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蜚蠊肠道内生放线菌的抗真菌活性筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：A、将经过分离纯化的蜚蠊内生放线菌单菌落重新接种至培养基内，培养5‑7天后，挑取5×5mm的菌块，接种于种子培养基中培养3天，然后制备菌悬液，振荡混匀，得一级种子液；B、将步骤A所得一级种子液转入液体发酵培养基中，置于摇床上培养5天，摇瓶发酵后，离心，得发酵液上清液；C、将经过高压灭菌的PDA培养基冷却至45℃左右，加入适量新鲜制备的白色念珠菌混悬液，混匀后，采用双层倒板法均匀倒入平板上，冷却至室温；将牛津杯均匀放在平板上，加入步骤B所得的发酵液上清液，培养3‑4天后，观察并测量抑菌圈直径。

【技术特征摘要】
1.一种蜚蠊肠道内生放线菌的抗真菌活性筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：A、将经过分离纯化的蜚蠊内生放线菌单菌落重新接种至培养基内，培养5-7天后，挑取5×5mm的菌块，接种于种子培养基中培养3天，然后制备菌悬液，振荡混匀，得一级种子液；B、将步骤A所得一级种子液转入液体发酵培养基中，置于摇床上培养5天，摇瓶发酵后，离心，得发酵液上清液；C、将经过高压灭菌的PDA培养基冷却至45℃左右，加入适量新鲜制备的白色念珠菌混悬液，混匀后，采用双层倒板法均匀倒入平板上，冷却至室温；将牛津杯均匀放在平板上，加入步骤B所得的发酵液上清液，培养3-4天后，观察并测量抑菌圈直径。2.根据权利要求所述的一种蜚蠊肠道内生放线菌的抗真菌活性筛选方法，其特征在于，所述步骤C可由以下步骤代替：将步骤B所得...

【专利技术属性】
技术研发人员：金小宝，褚夫江，
申请(专利权)人：广东药科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44