检测布鲁氏菌病的电化学免疫传感器的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种检测布鲁氏菌抗体的电化学免疫传感器的制备方法，属于电化学生物传感器技术领域。该方法包括：将玻碳电极预处理，通过电沉积的方法将金纳米粒子修饰到玻碳电极上，然后引入谷胱甘肽做为抗污材料，与金表面自组装，再使HA通过N‑(3‑二甲基氨基丙基)‑N'‑乙基碳化二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺有效地缀合到谷胱甘肽上，最后用赤藓糖醇封闭非特异性活性位点。本发明专利技术解决了现有布鲁氏菌病检测方法的准确性差、处理过程复杂等问题。本发明专利技术免疫传感器的电极界面具有优异的亲水性，复合界面的防污性能明显提高，具有超高灵敏度，较宽的线性范围和较低的检测限，且稳定性和重复性能好，操作简便；可应用于复杂生物样品中布鲁氏菌病抗体的检测。

【技术实现步骤摘要】
检测布鲁氏菌病的电化学免疫传感器的制备方法及其应用
本专利技术属于电化学生物传感器
，具体涉及一种用于检测布鲁氏菌病的电化学免疫传感器的制备方法及其应用。
技术介绍
布鲁氏菌是一种革兰氏阴性球菌，由它导致的布鲁氏菌病是最常见的人畜共患病之一。这种疾病的最大特点是如果发现的早，并用正规方法治疗，超过90％的患者将被治愈，且终生不会复发，否则它将变成慢性疾病并且终生不可治愈。因此，该病的早期诊断尤为重要。检测布鲁氏菌病的典型方法有虎红平板凝集试验(RBPT)，聚合酶链式反应(PCR)，酶联免疫吸附剂测定(ELISA)，环介导等温扩增技术(LAMP)和免疫层析试验。其中，RBPT方法操作简单且成本低廉最受欢迎，但假阳性率高，从而影响了它的广泛应用。对于其他方法来说，由于预处理过程复杂、对操作人员要求高，且需借助昂贵的仪器，因此限制了它们的普及。电化学传感器由于无需标记、灵敏性高，选择性高，使用简单，检测快速以及所用仪器价格低廉等诸多特点，已经成为疾病检测的有效手段之一，但到目前为止关于成功运用电化学传感器检测布鲁氏菌病的文献报道很少。通常来说，性能优良的电化学传感器的制备跟电极修饰材本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测布鲁氏菌病的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将GCE进行预处理；(2)将预处理好的GCE电极在HAuCl4溶液中电沉积，然后用超纯水洗涤，氮气干燥，得到AuNPs/GCE；(3)将AuNPs/GCE浸入GSH溶液中，GSH修饰到AuNPs/GCE界面上，然后将该修饰电极在β‑巯基乙胺中浸泡以封闭未反应的AuNPs；(4)将HA用含有N‑(3‑二甲基氨基丙基)‑N'‑乙基碳化二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺的溶液活化，然后将GSH/AuNPs/GCE浸入上述溶液中得到HA/GSH/AuNPs/GCE；(5)将HA/GSH/AuNPs/GCE浸入1,4‑丁二醇二缩...

【技术特征摘要】
1.一种检测布鲁氏菌病的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将GCE进行预处理；(2)将预处理好的GCE电极在HAuCl4溶液中电沉积，然后用超纯水洗涤，氮气干燥，得到AuNPs/GCE；(3)将AuNPs/GCE浸入GSH溶液中，GSH修饰到AuNPs/GCE界面上，然后将该修饰电极在β-巯基乙胺中浸泡以封闭未反应的AuNPs；(4)将HA用含有N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的溶液活化，然后将GSH/AuNPs/GCE浸入上述溶液中得到HA/GSH/AuNPs/GCE；(5)将HA/GSH/AuNPs/GCE浸入1,4-丁二醇二缩水甘油醚的碱性溶液中，再将该修饰电极在含有布鲁氏菌外膜蛋白OMP31的磷酸缓冲溶液中浸泡，得到OMP31/HA/GSH/AuNPs/GCE，然后用赤藓糖醇封闭非特异性活性位点，即制得电化学免疫传感器。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)GCE的预处理方法为：将GCE依次用0.3μm和0.05μm的氧化铝浆料抛光成镜面状，然后在超纯水、100％乙醇和超纯水中依次进行超声处理。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)电沉积的具体方法为将电极浸入1mM-20mM的HAuCl4溶液中，通过恒电位还原HAuCl4，在电极表面生成均匀分散的金纳米...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丽华，赵师伊，李聪年，
申请(专利权)人：喀什金慧通实业开发有限责任公司，青岛科技大学，
类型：发明
国别省市：新疆,65