碱性磷酸酶活性的双通道检测方法技术

本发明专利技术提供了一种比色‑荧光双通道检测碱性磷酸酶活性的方法，包括如下步骤：利用碱性磷酸酶催化其底物L‑抗坏血酸‑2‑磷酸三钠盐(AAP)水解，产生具有还原性的抗坏血酸(AA)，而AA能够将托伦试剂还原成Ag单质；在金纳米粒子(AuNPs)和石墨烯量子点(GQDs)存在的条件下，Ag将会沉积到AuNPs表面形成金银核壳纳米粒子(Au@AgNPs)并猝灭GQDs的荧光。本发明专利技术将酶促银离子金属化、AuNPs诱导银沉积与Au@AgNPs猝灭GQDs荧光相结合，利用颜色、紫外‑可见吸收光谱和荧光强度的变化，能够实现对碱性磷酸酶活性的比色‑荧光双通道检测。该方法具有灵敏度高、特异性强、响应快、操作简单、不需复杂仪器等特点。

【技术实现步骤摘要】
碱性磷酸酶活性的双通道检测方法
本专利技术涉及一种碱性磷酸酶活性的双通道检测方法，属于酶检测

技术介绍
碱性磷酸酶(ALP)是一种重要的生物标志物，其表达异常与乳腺癌、前列腺癌、骨病、糖尿病和肝脏功能障碍等多种疾病相关。血清中ALP的定量检测可辅助诊断相关疾病。光谱分析法由于简单、响应快等优势在ALP检测中得到了广泛应用。但是，基于单一材料、具有单一比色或荧光输出信号的常规光谱法抗干扰能力差、准确度低，难以用于复杂样品中目标物的检测。随着纳米科技的进步，已发展了多种基于纳米金和纳米银的ALP比色传感方法，但这类方法的灵敏度有待提高；核壳结构纳米粒子微弱的壳层改变即可引起显著的光谱和颜色变化，其出现为进一步提高比色检测的灵敏度提供了可能性。此外，与单一元素组成纳米粒子相比，核壳结构纳米粒子是更优异的纳米猝灭剂，将其与荧光材料结合可以构建双通道超灵敏酶生物传感器，赋予检测更高的准确性与多样性。中国专利CN104007080A公开了一种基于金纳米棒长银壳的碱性磷酸酶分析方法，该方法中的核壳纳米棒的波长可变性虽能提供丰富的颜色变化，却也因此使其难以与荧光材料相结合来构建多重信号传感本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种碱性磷酸酶活性的双通道检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将柠檬酸和半胱氨酸混匀后，在240℃下反应后，溶解于超纯水中，在分子量为500的透析袋透析，得到氮硫掺杂的石墨烯量子点；利用Turkevich‑Frens方法制备粒径为13nm的金纳米粒子；将所述石墨烯量子点、金纳米粒子和托伦试剂混匀后，得到检测液；将Tris‑HCl缓冲溶液、超纯水和L‑抗坏血酸‑2‑磷酸三钠盐混匀后，均分成若干份，除一份不加碱性磷酸酶之外，其余分别加入不同已知浓度的碱性磷酸酶，均置于37℃下孵育；孵育结束后，分别加入相同体积的所述检测液，室温下反应后，记录紫外‑可见吸收光谱和激发波长为346nm下的荧光发射光...

【技术特征摘要】
1.一种碱性磷酸酶活性的双通道检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将柠檬酸和半胱氨酸混匀后，在240℃下反应后，溶解于超纯水中，在分子量为500的透析袋透析，得到氮硫掺杂的石墨烯量子点；利用Turkevich-Frens方法制备粒径为13nm的金纳米粒子；将所述石墨烯量子点、金纳米粒子和托伦试剂混匀后，得到检测液；将Tris-HCl缓冲溶液、超纯水和L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐混匀后，均分成若干份，除一份不加碱性磷酸酶之外，其余分别加入不同已知浓度的碱性磷酸酶，均置于37℃下孵育；孵育结束后，分别加入相同体积的所述检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：逯一中，陈传霞，姜媛媛，倪朋娟，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东,37