一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法，涉及基因工程技术领域，检测高山美利奴羊INHA基因第1外显子在206bp处的碱基；当碱基为T时，基因型为TT；当碱基为A时，基因型为TA或AA；所述基因型AA的繁殖力大于基因型TA，所述基因型TA的繁殖力大于基因型TT。本发明专利技术通过检测高山美利奴羊INHA基因第1外显子在206bp处的碱基，能够判断高山美利奴羊的繁殖力。

【技术实现步骤摘要】
一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法
本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法。
技术介绍
高山美利奴羊新品种是世界首例能适应海拔2400～4070m高山寒旱生态区和羊毛纤维直径19.1～21.5μm为主体的毛肉兼用型美利奴羊新品种，为提高细毛羊综合品质提供了优秀种质资源(岳耀敬等，2014)。在放牧条件下高山美利奴成年母羊产羔率为110％～120％，繁殖率低，养殖成本高，极大限制了细毛羊产业的发展。目前，国内外细毛羊的重要发展方向之一是在保持细羊毛纤维直径在21.5μm以下的基础上集中培育多胎细毛羊新品种(系)(夏新山，2007)。探讨高山美利奴羊多胎性状的主效基因，可以为高山美利奴羊多胎品系的分子标记辅助育种提供依据，可以加强高山美利奴羊多胎品系早期选择、提高选种准确性、缩短培育周期、加快培育进程。INHA是编码抑制素(inhibin,INH)α亚基的基因，抑制素是一种亚基二聚体，由α亚基和β亚基组成，α亚基上有糖基化位点，是抑制素INH的生物活性中心(Burgeretal，1988)。抑制素是由睾丸支持细胞和卵巢颗粒细胞分泌的糖蛋白激素，能够抑制垂体促卵泡素的合成与分泌(马晓丽等，2014)，可以抑制雄性精子的发生过程(Sarvamangalaetal，2009)，抑制素影响卵泡的募集和发育(Myersetal，2009)，前人研究表明，抑制素显著影响绵羊和山羊的产羔数(储明星等，2007；Jaegeretal，1994；王瑞芳等，2008；董李学等，2010；索峰等，2012；田秀娥等，2010；Hiendlederetal，1996)，由此可见，抑制素确实能显著影响绵羊的繁殖性状。2014年完成和公布了绵羊新一代从头测序的基因组信息(JiangYuetal，2014)。绵羊INHA基因位于第2号染色体，包含1个内含子和2个外显子，外显子总长为1109bp，编码360个氨基酸。但是现有技术并未报道该基因的何处位点能够影响高山美利奴羊的繁殖能力。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法，通过检测高山美利奴羊INHA基因第1外显子在206bp处的碱基，来判断高山美利奴羊的繁殖力。本专利技术提供了一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法，检测高山美利奴羊INHA基因第1外显子在206bp处的碱基；当碱基为T时，基因型为TT；当碱基为A时，基因型为TA或AA；所述基因型AA的高山美利奴羊繁殖力大于基因型TA，所述基因型TA的高山美利奴羊繁殖力大于基因型TT。优选的，所述检测的方法包括：以高山美利奴羊的基因组DNA为模版，用INHA引物对进行PCR扩增，得到INHA基因；检测所述INHA基因第1外显子在206bp处的碱基。优选的，所述INHA引物对包括INHA上游引物和INHA下游引物；所述INHA上游引物具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列；所述INHA下游引物具有SEQIDNo.2所示的核苷酸序列。优选的，所述PCR扩增使用的体系每25μL包括：2×TaqMasterMix12.5μL，浓度为10uM的INHA上游引物1μL，浓度为10uM的INHA下游引物1μL，基因组DNA溶液1μL，ddH2O9.5μL。优选的，所述基因组DNA溶液的浓度大于20ng/μL。优选的，所述PCR扩增的程序包括：94℃5min；94℃30s，61℃30s，72℃30s，共34个循环；72℃延伸10min。本专利技术提供了一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法，检测高山美利奴羊INHA基因第1外显子在206bp处的碱基；当碱基为T时，基因型为TT；当碱基为A时，基因型为TA或AA；所述基因型AA的高山美利奴羊繁殖力大于基因型TA，所述基因型TA的高山美利奴羊繁殖力大于基因型TT。本专利技术实施例的结果显示：通过检测高山美利奴羊INHA基因第1外显子在206bp处的碱基，能够判断高山美利奴羊的繁殖力。附图说明图1为本专利技术高山美利奴羊INHA基因PCR电泳检测，其中1～8泳道为高山美利奴羊INHA基因PCR产物；M:DL2000DNAmarker；图2为本专利技术INHA基因Exon1-T206A位点测序结果，其中，A为AA基因型，B为TT基因型，C为TA基因型。具体实施方式本专利技术提供了一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法，其特征在于，检测高山美利奴羊INHA基因第1外显子在206bp处的碱基；当碱基为T时，基因型为TT；当碱基为A时，基因型为TA或AA；所述基因型AA的高山美利奴羊繁殖力大于基因型TA，所述基因型TA的高山美利奴羊繁殖力大于基因型TT。在本专利技术中，所述检测的方法优选包括：以高山美利奴羊的基因组DNA为模版，用INHA引物对进行PCR扩增，得到INHA基因；检测所述INHA基因第1外显子在206bp处的碱基。本专利技术对所述高山美利奴羊的基因组DNA的提取方法没有特殊限定，采用常规提取动物基因组DNA即可。在本专利技术中，所述基因组DNA溶液的浓度大于20ng/μL，所述基因组DNA溶液的OD260/OA280值在1.7～1.9之间。在本专利技术中，所述INHA引物对优选包括INHA上游引物和INHA下游引物；所述INHA上游引物具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，具体序列如下所示：5'-TGTTCCTGGATGCCTTGGG-3'；所述INHA下游引物具有SEQIDNo.2所示的核苷酸序列，具体序列如下所示：5'-GAACCGGGCACTCTGGATA-3'。在本专利技术中，所述INHA引物对优选参考绵羊INHA基因序列(GenBank登录号：NC_019459.2)，利用primerpremier5.0和Oligo7软件软件设计得到，包含突变位点Exon1-T206A。在本专利技术中，所述INHA引物对扩增得到的片段长度优选为390bp。在本专利技术中，所述PCR扩增使用的体系优选每25μL包括：2×TaqMasterMix12.5μL，浓度为10uM的INHA上游引物1μL，浓度为10uM的INHA下游引物1μL，基因组DNA溶液1μL，ddH2O9.5μL。在本专利技术中，所述PCR扩增的程序优选包括：94℃5min；94℃30s，61℃30s，72℃30s，共34个循环；72℃延伸10min。本专利技术对检测所述INHA基因第1外显子在206bp处的碱基的方法没有特殊限定，采用常规检测的方法即可。下面结合具体实施例对本专利技术所述的一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法做进一步详细的介绍，本专利技术的技术方案包括但不限于以下实施例。实施例11材料和方法1.1材料1.1.1样品采集甘肃省绵羊繁殖技术推广站采集94只高山美利奴羊(单胎母羊45只、双胎母羊49只)血样，每只羊静脉采血10mL于加入EDTA-K2抗凝剂的采血管中，血样采集完毕后迅速震荡混匀，放入含有冰袋的采样箱中暂存，运回实验室后于-20℃冰箱冷冻保存，用以DNA的提取。1.1.2主要试剂及仪器EDTA-K2真空采血管购自江苏宇力医疗器械有限公司；血液基因组提取试剂盒购自美国OMEGA公司；NanoDrop2000分光光度计美国Therm本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法，其特征在于，检测高山美利奴羊INHA基因第1外显子在206bp处的碱基；当碱基为T时，基因型为TT；当碱基为A时，基因型为TA或AA；所述基因型AA的高山美利奴羊繁殖力大于基因型TA，所述基因型TA的高山美利奴羊繁殖力大于基因型TT。

【技术特征摘要】
1.一种基于INHA基因检测高山美利奴羊繁殖力的方法，其特征在于，检测高山美利奴羊INHA基因第1外显子在206bp处的碱基；当碱基为T时，基因型为TT；当碱基为A时，基因型为TA或AA；所述基因型AA的高山美利奴羊繁殖力大于基因型TA，所述基因型TA的高山美利奴羊繁殖力大于基因型TT。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测的方法包括：以高山美利奴羊的基因组DNA为模版，用INHA引物对进行PCR扩增，得到INHA基因；检测所述INHA基因第1外显子在206bp处的碱基。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述INHA引物对包括INHA上游引物和INHA下游引物；所述INHA上游引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨博辉，郭婷婷，袁超，刘建斌，牛春娥，孙晓萍，岳耀敬，冯瑞林，陈来运，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62