RHAU基因在制备肺鳞癌辅助诊断与预后判断工具中的应用制造技术

本发明专利技术目的在于提供RHAU基因在制备肺鳞癌辅助诊断与预后判断工具中的应用。本发明专利技术提供的RHAU基因或其片段作为与肺鳞癌辅助诊断与预后判断相关的生物标志物，只在肺鳞癌中高表达，而在肺腺癌中没有差异，相较于传统的肿瘤标志物，RHAU作为新型的生物标志物，特异性高的特点，运用qRT‑PCR技术检测具有灵敏性高的特点。

【技术实现步骤摘要】
RHAU基因在制备肺鳞癌辅助诊断与预后判断工具中的应用
本专利技术属于基因工程及肿瘤学领域，具体涉及RHAU基因在制备肺鳞癌辅助诊断与预后判断工具中的应用。
技术介绍
肺癌是全球范围内死亡率最高的肿瘤，每年约有160万人死于肺癌，是危害生命健康的重大公共卫生问题。据世界卫生组织统计，预计到2025年，我国肺癌患者年死亡率将达到100万，成为世界第一肺癌大国。非小细胞肺癌约占每年新诊断肺癌的85％，其组织学类型主要包括肺腺癌(50％)和肺鳞癌(30％)。随着驱动基因的发现及其靶向抑制剂的临床应用，如表皮生长因子受体(EGFR)和间变性淋巴瘤激酶(ALK)融合基因等，肺腺癌的个体化治疗取得了显著的进展。但迄今肺鳞癌尚无有效的应用于临床的分子靶向药物。肺鳞癌的治疗仍是手术和以铂类为基础的化疗，患者的5年生存率仍徘徊在15％。因此，寻找和鉴定出和肺鳞癌相关的基因，将有利于该疾病的早期筛查和诊断，及时控制病程的进展。RHAU，又名DHX36和G4R1,是筛选AREs(AUrichelements)结合蛋白时发现的一个蛋白。它最初被确定为一个与尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)mRNA的AU-rich元件(ARE)相关联RNA解旋酶。进一步的研究发现，RHAU还可以结合到RNA和DNA的G4结构上并且解开其G4结构。近年来研究表明，G4(G-quadruplex)结构是具有潜在癌症靶标作用的DNA/RNA二级结构，很有希望成为抗癌药物开发的重要靶点。前人研究表明，在小鼠心脏发育过程中，RHAU调控了心肌细胞的增殖。RHAU在雄性小鼠的生殖细胞中特异性地敲除后，小鼠生殖细胞的增殖显著降低，凋亡显著增加。在造血系统中特异性敲除RHAU后造成血球祖细胞增殖障碍。因此，RHAU可能是一个细胞增殖相关基因。在肿瘤研究领域，有文献报道，RHAU在乳腺癌细胞株中表达上调。RHAU可以与癌症相关基因PITX13’UTR结合调控其翻译。在肠癌细胞中紫外线照射引起DNA损伤的情况下，RHAU可紫外线依赖地结合到p53pre-mRNA的3’端，促进p53pre-mRNA的3’端的加工。这提示我们RHAU可能是肿瘤增殖的重要调节因子。肺鳞癌作为一种至今无治疗进展的癌症，RHAU与肺鳞癌相关的研究尚未见报道。因此，开展RHAU表达水平与肺鳞癌发展相关性的研究，对于用于肺鳞癌的早期筛查和诊断，具有重大的实际意义。
技术实现思路
本专利技术的第一方面在于提供一种与肺鳞癌辅助诊断与预后判断相关的生物标志物。本专利技术的第二方面在于提供检测RHAU基因或其片段表达的产品在制备诊断肺鳞癌的工具中的应用。本专利技术的第三方面在于提供用于肺鳞癌辅助诊断和治疗的工具。为实现上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案为：本专利技术的第一方面提供了一种应用于肺鳞癌辅助诊断与预后判断的生物标志物，所述生物标志物为人RHAU基因或其片段。在一种具体实施方式中，本专利技术RHAU基因的片段的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。本专利技术的第二方面提供了检测RHAU基因或其片段表达的产品在制备诊断肺鳞癌的产品中的应用。在一种具体实施方式中，本专利技术RHAU基因的片段的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。本专利技术所述的诊断肺鳞癌的产品包括但不限于通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片、或高通量测序平台检测RHAU基因或其片段的表达水平以诊断肺鳞癌的产品。进一步的，所述用RT-PCR诊断肺鳞癌的产品至少包括一对特异扩增RHAU基因或其片段的引物；所述用实时定量PCR诊断肺鳞癌的产品至少包括一对特异扩增RHAU基因或其片段的引物；所述用免疫检测诊断肺鳞癌的产品包括：与RHAU基因或其片段表达的蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断肺鳞癌的产品包括：与RHAU基因或其片段的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断肺鳞癌的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与RHAU基因或其片段表达的蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与RHAU基因或其片段的核酸序列杂交的探针。在一种具体的实施例中，本专利技术所述的产品为通过实时定量PCR检测RHAU基因或其片段的表达水平以诊断肺鳞癌的产品。在一种具体的实施例中，用实时定量PCR诊断肺鳞癌的产品至少包括一对针对RHAU基因或其片段的特异性引物对；优选的，特异性引物对的上游引物序列如SEQIDNO:2所示，下游引物序列如SEQIDNO:3所示。本专利技术的第三方面提供了一种用于诊断肺鳞癌的工具，所述工具能够通过检测样本中的RHAU基因或其片段的表达来诊断肺鳞癌。在一种具体实施方式中，本专利技术RHAU基因的片段的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。本专利技术所述的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。本专利技术提供了上述基因标志物及其引物在制备肺鳞癌辅助诊断与预后判断试剂盒以及在制备治疗肺鳞癌的药物中的应用。本专利技术所述的试剂盒可以包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测RHAU基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括RHAU蛋白的特异性抗体。在一种具体的实施方式中，本专利技术所述试剂盒至少包括用于扩增RHAU基因或其片段的特异性引物对。进一步地，所述的特异性引物对的上游引物序列如SEQIDNO:2所示，下游引物序列如SEQIDNO:3所示。进一步地，所述的试剂盒还包括用于扩增内参肌动蛋白基因β-actin的特异性引物对，所述特异性引物对的上游引物序列如SEQIDNO:4所示，下游引物序列如SEQIDNO:5所示。本专利技术的第四方面在于提供用于肺鳞癌辅助诊断和治疗的试剂盒及药物。所述试剂盒在制备非小细胞肺癌筛查检测产品中应用具体包括如下步骤：具体地说，本专利技术解决问题的技术方案包括：(1)建立统一标准的标本库和数据库：以标准操作程序(SOP)采集符合标准的组织样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料。研究样本选择：初治、未行手术以及放化疗干预且经病理确认为肺鳞癌的患者。(2)采集受试者的癌和正常癌旁组织样品，利用TRIZOL试剂提取待测组织样品的总RNA；将提取的待测组织样品总RNA反转录为cDNA；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析RHAU在癌和正常癌旁组织样品中RHAU的mRNA表达水平变化(3)分析不同时期的肺鳞癌患者中RHAU的表达，明确这些mRNA诊断肺鳞癌的能力。(4)RHAU诊断试剂盒的研制：根据肺鳞癌患者癌与正常癌旁组织中RHAU的差异表达开发RHAU诊断试剂盒。(5)分析RHAU在肺鳞癌细胞中的作用，揭示RHAU与肺鳞癌的关系，为将来研制RHAU相关治疗肺鳞癌的药物提供依据。(1)研究样本选择：初治、未行手术以及放化疗干预且经病理确认为肺鳞癌的患者。利用TRIZOL试剂提取肺鳞癌和正常癌旁组织中的RNA，将提取的待测组织样品总RNA反转录为cDNA；通过qRT-PCR的方法，检测RHAU在组织中的表达差异。(2)利用引物进行实时荧光定量PCR检测RHAU基因片段的表达水平，对扩增产物定量和均一化后，进行数据分析；计算所述RHAU基因片段的Ct与内参肌动蛋白基因的Ct值之差ΔΔCt，根据ΔΔCt计算RHAU基因的相对表达量。(3)采用群体测定值分布比较法，将步骤(2)中所述RHAU基因片段的相对表达量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.RHAU基因或其片段在肺鳞癌辅助诊断与预后判断的生物标志物中的应用。

【技术特征摘要】
1.RHAU基因或其片段在肺鳞癌辅助诊断与预后判断的生物标志物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，RHAU基因片段的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。3.检测RHAU基因或其片段表达的产品在制备诊断肺鳞癌的产品中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，RHAU基因片段的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片、或高通量测序平台检测RHAU基因或其片段的表达水平以诊断肺鳞癌的产品。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，用实时定量PCR诊断肺鳞癌的产品至少包括一对针对RHAU基因或其片段的特异性引物对；优选的，特异性引物对的上游引物序列如SEQIDNO:2所示，下游引物序列如SEQIDNO:3所示。7.一种用于诊断肺鳞...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晨曦，吴晓渊，张斌，
申请(专利权)人：南京市胸科医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32