一种香蕉组培中更简化的消毒方法技术

本发明专利技术属于香蕉组织培养技术领域，具体涉及一种香蕉组培中更简化的消毒方法。本发明专利技术充分利用香蕉本体内部无菌的特性，对外表层进行冲洗晾干后，逐层剥除叶鞘，并多次使用75％的酒精对表层灭菌，不破坏内部环境，最终获得内部无菌的外植体材料。本发明专利技术的方法去除了组培过程中重离子化学药品的使用，操作更简化更安全，减少了组培的生产时间以及生产成本，同时与原有方法在增殖率上有所提高。

A simpler disinfection method in banana tissue culture

The invention belongs to the technical field of banana tissue culture, in particular to a simpler disinfection method in banana tissue culture. The invention makes full use of the sterile characteristics of the banana body, washes and dries the outer layer, strips the leaf sheath layer by layer, and repeatedly uses 75% alcohol to sterilize the surface layer, without destroying the internal environment, and finally obtains the internal sterile explant material. The method of the invention eliminates the use of heavy ion chemicals in tissue culture process, simplifies the operation and is safer, reduces the production time and cost of tissue culture, and improves the multiplication rate with the original method.

【技术实现步骤摘要】
一种香蕉组培中更简化的消毒方法
本专利技术属于香蕉组织培养
，具体涉及一种香蕉组培中外植体的消毒方法。
技术介绍
香蕉属于芭蕉科(Musaceae)芭蕉属(Musa)植物，是世界性的水果之一，在热带、亚热带地区普遍种植，中国作为主产区之一，种植面积达43万余公顷居世界第五，产量达1332万余吨居世界第二(FAO2016)，是我国南方农业支柱产业之一。常规香蕉栽培种为三倍体，繁殖手段为组织培养，主要是通过采集香蕉吸芽，经过消毒、诱导、增殖以及生根等获得组培苗，经过几十年的发展，技术基本没有改变，特别是在外植体的消毒方面，绝大部分都一直采用升汞或者其他化学药剂进行浸泡消毒，其方法一方面使材料表面褐化，残留升汞会持续影响细胞生长，减小繁殖系数，同时使操作过程更加繁琐；另一方面，消毒液为有毒物质，操作不当会对人体产生危害，而废弃液的处理不当甚至对整个环境产生不利影响。
技术实现思路
鉴于上述内容，本专利技术的目的是提供一种更简化的消毒方式，只需要利用75％的酒精，即可完成外植体的消毒，去除了重离子化学药品的使用，减少了组培的生产时间以及生产成本。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一种香蕉组培中更简化的消毒方法，包括以下步骤：(1)配置好75％酒精溶液，准备干净菜刀、砧板、灭菌的报纸和无菌纱布，待用；(2)挖取至少2天前无雨水、未灌溉的健壮香蕉吸芽，用无菌水冲洗后，晾干；(3)用菜刀削除吸芽外表层，剥除外层叶鞘，留下高20cm叶鞘、宽6cm×8cm的球茎基部，底部切平，用灭菌后的报纸包裹好，待用；(4)对外植体表层用75％酒精溶液擦拭后，放至超净工作台；(5)逐层剥去叶鞘，每剥一层用75％酒精溶液擦拭1次，剥除2-3层后，直接掰除叶鞘，换无菌手术刀切平，暴露中心生长点；(6)用另外一把无菌手术刀挖取基部中心2cm×2cm×2cm块茎，将其置于诱导培养基上，于28℃条件下黑暗培养30-40天，获得第一代。进一步的，步骤(3)中用刀削除吸芽外表层时，刀口不能过深，剥除叶鞘直至吸芽整体表面干净无刀口，然后用报纸包裹严实。进一步的，步骤(3)-步骤(4)的间隔时间不超过4小时。进一步的，步骤(5)中用刀环剥去除叶鞘时，刀口不能深入叶鞘内层，以每层叶鞘厚度为准。进一步的，步骤(6)中的诱导培养基为MS+6-BA3mg/L+NAA0.1mg/L。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术只需采用75％酒精即可完成灭菌，无需使用升汞或者其他有毒化学药剂，省时省钱的同时，人工操作更安全。(2)本专利技术对组培材料损伤更少，可以获得更多的生长点，提高增殖率。附图说明图1为本专利技术的香蕉组培中更简化的消毒方法对香蕉出芽数及增值率指标测定图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。在不背离本专利技术精神和本质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。实施例：一种香蕉组培中更简化的消毒方法，包括以下步骤：前期准备：配置好诱导培养基，分装灭菌后待用，所述诱导培养基的配方为MS+6-BA3mg/L+NAA0.1mg/L；配置好75％酒精，准备干净菜刀、砧板以及灭菌的报纸、无菌纱布等待用，做好组培的准备工作。外植体的选取：在生长季节，挖取至少2天无雨水未灌溉的健壮、无病毒植株40-50cm的香蕉吸芽，用无菌水冲洗后，放置通风阴凉处晾干24-48小时。外植体的处理：用菜刀削除吸芽根系和球茎外表层，剥除外层叶鞘直至吸芽整体表面干净无刀口，留下高20cm叶鞘、宽6cm×8cm的球茎基部，底部切平，用灭菌后的报纸包裹好待用；对外植体表层用75％酒精充分擦拭后，放至超净工作台；用刀环剥逐层剥去叶鞘，每剥一层用75％酒精擦拭一次，剥除2～3层后，直接用手掰除叶鞘，分离叶鞘与球茎，换手术刀切平叶鞘与球茎连接处，暴露中心生长点。用无菌手术刀挖取基部中心2cm×2cm块茎，整块置于诱导培养基上，于28℃条件下，黑暗培养30-40天，获得第一代；然后对第一代增殖培养后同样培养条件下培养20-30天，获得第二代。对照组：前期及外植体的选取一致，在外植体的处理上，留下高6cm叶鞘、宽6cm×8cm的球茎基部，对外植体表层用75％酒精充分擦拭后，放至超净工作台，用刀环剥逐层剥去叶鞘，留取4cm×6cm球茎基部，用75％酒精浸泡1min,无菌水冲洗1次，再用0.1％的升汞溶液消毒杀菌15min,并不断摇动处理液,然后用无菌水冲洗4-5次，切除褐化部分，最后取基部中心约2cm×2cm块茎，整块置于诱导培养基上，于28℃条件下，黑暗培养30-40天获得第一代，对第一代增殖培养后同样培养条件下培养20-30天获得第二代。两组实验均采用“威廉斯”系列香蕉吸芽，起始每组设3次重复，每次重复5瓶，每瓶一个外植体，第二代切除丛芽，把外植体对半切后放置增殖培养基，增殖培养基配方为MS+6-BA4mg/L+NAA0.1mg/L。通过统计污染率、第一代和第二代出芽数量进行对比，具体数据见表1。表1使用本专利技术方法对香蕉组培影响的数据统计由表1可知，在同等条件下，实施组与对照组均处理15瓶，每瓶一个外植体的情况下，实施组的污染数量相比对照组更多，主要原因是在逐层剥去叶鞘阶段操作不熟练所致，实施组对操作要求更高；而第一代出芽不管是实施组还是对照组，每个外植体基本只出一个芽，两者之间的增殖率无显著差异，可见不同处理对香蕉组培的第一代出芽率影响不大；而从第二代出芽数上来说，实施组增殖率为2.93，对照组为2.42，表现出一定差异性，且实施组增殖率更高，可见，本专利技术的消毒方法能够明显提高香蕉组培的增殖率。综上所述，本专利技术的方法参照现在普遍采用的香蕉组培方法，结合香蕉吸芽的特性，去除了重离子化学药品的使用，过程中只使用75％的酒精进行灭菌，减少了组培的生产时间以及生产成本，避免了对人体以及环境产生危害。采用本专利技术方法，已经培养了数批香蕉组培苗，此方法在操作不熟练的情况下，污染率比使用升汞略高，而出苗数无显著差异；在操作熟练后，可以降低污染率，能获得更高的增殖率。本专利技术方法为香蕉组培提供了新方法，在实际工作中具有很好的应用前景。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种香蕉组培中更简化的消毒方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)先配置好75％酒精溶液，再准备干净菜刀、砧板、灭菌的报纸和无菌纱布，待用；(2)挖取至少2天前无雨水、未灌溉的健壮香蕉吸芽，用无菌水冲洗后，晾干；(3)用菜刀削除吸芽外表层，剥除外层叶鞘，留下高20cm叶鞘、宽6cm×8cm的球茎基部，底部切平，用灭菌后的报纸包裹好，待用；(4)对外植体表层用75％酒精溶液擦拭后，放至超净工作台；(5)逐层剥去叶鞘，每剥一层用75％酒精溶液擦拭1次，剥除2‑3层后，直接掰除叶鞘，换无菌手术刀切平，暴露中心生长点；(6)用另外一把无菌手术刀挖取基部中心2cm×2cm×2cm块茎，将其置于诱导培养基上，于28℃条件下黑暗培养30‑40天，获得第一代。

【技术特征摘要】
1.一种香蕉组培中更简化的消毒方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)先配置好75％酒精溶液，再准备干净菜刀、砧板、灭菌的报纸和无菌纱布，待用；(2)挖取至少2天前无雨水、未灌溉的健壮香蕉吸芽，用无菌水冲洗后，晾干；(3)用菜刀削除吸芽外表层，剥除外层叶鞘，留下高20cm叶鞘、宽6cm×8cm的球茎基部，底部切平，用灭菌后的报纸包裹好，待用；(4)对外植体表层用75％酒精溶液擦拭后，放至超净工作台；(5)逐层剥去叶鞘，每剥一层用75％酒精溶液擦拭1次，剥除2-3层后，直接掰除叶鞘，换无菌手术刀切平，暴露中心生长点；(6)用另外一把无菌手术刀挖取基部中心2cm×2cm×2cm块茎，将其置于诱导培养基上...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓彪，尧金燕，方仁，龙兴，张继，周双云，高一宁，黄伟雄，唐文忠，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院园艺研究所，
类型：发明
国别省市：广西,45