一种二甲戊灵半抗原与抗原的制备方法及应用技术

一种二甲戊灵半抗原与抗原的制备方法及应用，其特征在于：所述二甲戊灵半抗原是由N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺与4‑溴丁酸乙酯反应生成烃基化N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺，再与浓硝酸反应生成硝基烃化N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺，然后与氢氧化钾反应得到；所述二甲戊灵抗原是由二甲戊灵半抗原与载体蛋白偶联得到。本发明专利技术制备的抗原呈现出特异性的二甲戊灵抗原决定簇，使得筛选出高特异性的二甲戊灵单克隆抗体成为可能。产生的抗体特异性高、灵敏度高，可用于建立酶联免疫吸附测定方法和胶体金试纸快速测定法，从而实现烟草及食品中二甲戊灵的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种二甲戊灵半抗原与抗原的制备方法及应用
本专利技术涉及一种二甲戊灵半抗原与抗原的制备方法及应用。属于农药免疫化学

技术介绍
二甲戊灵（Pendimethalin）属于二硝基苯胺类除草剂，其作用机制为抑制分生组织细胞分裂。双子叶植物吸收二甲戊灵的部位为下胚轴，单子叶植物吸收部位为幼芽。二甲戊灵适用于玉米、大豆、小麦、花生、棉花等多种旱地作物防除马唐、狗尾草、马齿苋等一年生禾本科和阔叶杂草。烟草上主要用于化学抑芽和烟草杂草防除。依据中国农药急性毒性分级标准，二甲戊灵被划分为一种低毒的化合物。依据美国环保局EPA的毒物分类标准，二甲戊灵属于III类，低毒化合物，安全摄入量为每天0.13mg/kg。根据我国2016年发布的国家标准《GB2763-2016食品中农药最大残留限量》的规定，稻谷、韭菜、结球甘蓝、普通白菜、菠菜、芹菜、大白菜中二甲戊灵的最大残留限量为0.2mg/kg，糙米、玉米、棉籽、大蒜、莴苣中二甲戊灵的最大残留限量为0.1mg/kg。国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）规定烟草中二甲戊灵的指导性残留限量为5mg/kg。目前二甲戊灵的检测方法主要是仪器检测方法，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种二甲戊灵半抗原的制备方法，其特征在于：是由N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺与4‑溴丁酸乙酯反应生成烃基化N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺，再与浓硝酸反应生成硝基烃化N‑(1‑乙基丙基)‑3,4‑二甲基苯胺，然后与氢氧化钾反应得到，其分子结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种二甲戊灵半抗原的制备方法，其特征在于：是由N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺与4-溴丁酸乙酯反应生成烃基化N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺，再与浓硝酸反应生成硝基烃化N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺，然后与氢氧化钾反应得到，其分子结构式为：。2.如权利要求1所述的二甲戊灵半抗原的制备方法，其特征在于：该制备方法的具体步骤如下：1）取1.00gN-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺，加80mL丙酮溶解，加0.35g氢氧化钾，加1.21g4-溴丁酸乙酯，加热回流反应3h，TLC检测，原料全部反应完成，停止反应，冷却到室温，旋蒸，除去丙酮，加60mL水，加50mL二氯甲烷萃取，有机相无水硫酸钠干燥，蒸干浓缩，上硅胶柱，使用体积比为10:1的石油醚/乙酸乙酯洗脱分离，得到中间体烃基化N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺1.51g；2）取1.50g中间体烃基化N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺，加5mL浓硫酸溶解澄清，在冰浴下缓慢滴加浓硝酸3mL，恢复至室温，继续搅拌4h，停止反应，冰浴下加蒸馏水30mL，加氢氧化钠溶液调节pH值到7，加50mL乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥蒸干，得到红色油状物，使用体积比为1:5的二氯甲烷/正己烷重结晶，得到硝基烃化N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺1.81g；3）取1.80g硝基烃化N-(1-乙基丙基)-3,4-二甲基苯胺加2mol/L氢氧化钾水溶液，60℃搅拌3h，TLC检测，原料无剩余，停止反应，冷却到室温，加稀盐酸，调节pH值到6，加80mL乙酸乙酯萃取，有机相水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干，使用体积比为1:1的乙醚/正己烷重结晶，得到二甲戊灵半抗原产...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈黎，范子彦，刘惠民，唐纲岭，崔华鹏，樊美娟，赵乐，武侠书，鲁亚辉，曹东山，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，国家烟草质量监督检验中心，北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41