一种聚乙烯亚胺超支化琼脂糖基硼亲和材料的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及分离技术领域，公开了一种聚乙烯亚胺超支化琼脂糖基硼亲和材料的制备方法及其应用，制备方法包括：1)琼脂糖微球的制备；2）环氧化琼脂糖的制备；3）环氧化琼脂糖的氨基化修饰；4）苯硼酸琼脂糖的制备。本发明专利技术制备的基于琼脂糖基的高柱容量高生物相容性硼亲和材料，其中琼脂糖被选作为基架，聚乙烯亚胺作为超支化配基进行修饰，同时3,5‑二氟‑4‑甲酰基苯硼酸作为亲和基团；琼脂糖具有更高的亲和性及柱容量和可操作性。本发明专利技术克服了一系列技术问题，成功将硼亲和材料应用于细胞水平的识别与分离，与现有技术相比，取得了显著的进步。

【技术实现步骤摘要】
一种聚乙烯亚胺超支化琼脂糖基硼亲和材料的制备方法及其应用
本专利技术涉及分离
，尤其涉及一种聚乙烯亚胺超支化琼脂糖基硼亲和材料的制备方法及其应用。
技术介绍
由细菌引起的疾病发病率在世界范围内正呈上升趋势，并已成为世界各国一种隐形负担。因此细菌尤其致病菌检测及分析开发具有重要的意义，这就要求需要纯度相对较高的菌体；但是细菌的生长环境比较复杂，尤其是样品中富含蛋白质，脂肪，糖类，无机盐等复杂基质，给细菌分析一个巨大的挑战；此外样品基质种类复杂多样且没有可循规律，这就进一步增加了细菌纯化或者检测难度。如基于聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）对于DNA检测灵敏度可达到15～16ngDNA/mL（<10cfu），但是样品提取过程中残留的磷酸盐、MgCl2，以及食品中原有的胶原，黑色素，亚铁血红素，肌红蛋白和乳铁蛋白等对于PCR检测造成严重影响，造成实际样品检测限偏高（>103cfu）。目前细菌分离纯化的主要方法有免疫磁珠，试剂盒，离心等，但是这些方法通用性较低且仍旧会残留部分基质。因此寻找新型的细菌识别材料并对细菌进行有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种聚乙烯亚胺超支化琼脂糖基硼亲和材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1) 琼脂糖微球的制备；2）环氧化琼脂糖的制备；3）环氧化琼脂糖的氨基化修饰：以5g环氧化琼脂糖计，将5g环氧化琼脂糖与15 mL体积浓度为5‑15%的聚乙烯亚胺的乙腈溶液充分混合，55‑65℃搅拌反应10‑15h，得到氨基化琼脂糖；4）苯硼酸琼脂糖的制备：以0.2 g氨基化琼脂糖计，将0.2g氨基化琼脂糖加入到15‑25mL重蒸甲醇中，超声后依次加入2.6‑2.7mmol的3,5‑二氟‑4‑甲酰基苯硼酸和5.3‑5.4mmol的氰基硼酸钠，常温搅拌反应70‑75h，产物用无水甲醇，NaHCO3溶液，氯化钠溶液和水多...

【技术特征摘要】
1.一种聚乙烯亚胺超支化琼脂糖基硼亲和材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)琼脂糖微球的制备；2）环氧化琼脂糖的制备；3）环氧化琼脂糖的氨基化修饰：以5g环氧化琼脂糖计，将5g环氧化琼脂糖与15mL体积浓度为5-15%的聚乙烯亚胺的乙腈溶液充分混合，55-65℃搅拌反应10-15h，得到氨基化琼脂糖；4）苯硼酸琼脂糖的制备：以0.2g氨基化琼脂糖计，将0.2g氨基化琼脂糖加入到15-25mL重蒸甲醇中，超声后依次加入2.6-2.7mmol的3,5-二氟-4-甲酰基苯硼酸和5.3-5.4mmol的氰基硼酸钠，常温搅拌反应70-75h，产物用无水甲醇，NaHCO3溶液，氯化钠溶液和水多次冲洗，真空干燥。2.如权利要求1所述的一种聚乙烯亚胺超支化琼脂糖基硼亲和材料的制备方法，其特征在于，步骤1）中，琼脂糖微球的制备方法如下：以0.5g琼脂糖干粉计，将0.5g琼脂糖干粉溶于10-20mL水中，搅拌煮沸为透明凝胶状，混匀作为水相；将3-5gSpan80加入到100mL液体石蜡中，75-85℃恒温混匀后作为油相；在搅拌下将水相滴加到油相中，随后持续搅拌后冷却至室温，再持续搅拌使微球成形；制得的微球用石油醚和异丙醇的混合洗涤液洗涤，再分别用石油醚和水清洗，得到琼脂糖微球。3.如权利要求2所述的一种聚乙烯亚胺超支化琼脂糖基硼亲和材料的制备方法，其特征在于，步骤1）中，水相滴加到油相过程中搅拌速率为800-900rpm，随后以200-300rpm持续搅拌8-12min后冷却至室温，再持续搅拌2-8min使微球成形。4.如权利要求2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹立民，郑洪伟，林洪，隋建新，王博成，殷佳珞，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东,37