一种蝴蝶兰茎尖脱毒再生快繁的方法技术

本发明专利技术公开了一种蝴蝶兰茎尖脱毒再生快繁的方法，该方法同时结合多次茎尖剥离技术、防褐化处理、病毒抑制剂处理以及交替变温热处理技术，有效降低组培苗毒素含量，提高茎尖成活率。多次茎尖剥离技术能够防止植株其他部分的病毒向茎尖分生组织蔓延，其中切取带有叶原基的茎尖组织，可以在有效减少毒素在茎尖中含量的同时提高组培苗的成活率；茎尖预处理过程可以显著降低茎尖褐化死亡率，提高茎尖成活率，与此同时病毒抑制剂结合交替变温处理，能够有效脱出CyMV和ORSV病毒。

A Method for Virus-free Regeneration and Rapid Propagation of Phalaenopsis Stem Tips

The invention discloses a method for rapid propagation of Phalaenopsis stem tip virus-free regeneration. The method combines multiple stem tip stripping technology, anti-browning treatment, virus inhibitor treatment and alternating temperature heat treatment technology, effectively reduces the toxin content of tissue culture seedlings and improves the survival rate of stem tip. Multiple Stem-tip stripping can prevent virus from spreading to meristem of other parts of plant. Cutting the Stem-tip tissue with leaf primordium can effectively reduce the toxin content in the Stem-tip and improve the survival rate of tissue-cultured seedlings. The process of Stem-tip pretreatment can significantly reduce the browning mortality of the Stem-tip and improve the survival rate of the stem-tip. At the same time, virus inhibitors combine alternately. CyMV and ORSV viruses can be effectively removed by temperature-changing treatment.

【技术实现步骤摘要】
一种蝴蝶兰茎尖脱毒再生快繁的方法
本专利技术涉及一种蝴蝶兰茎尖脱毒再生快繁的方法，属于花卉组培

技术介绍
蝴蝶兰(Phalaenapsis)又称蝶兰，属兰科，蝴蝶兰属，因其花形美丽、花色艳丽、花期长而深受消费者青睐，素有“花中皇后”的美称。近年来，国际市场花卉产业发展迅速，蝴蝶兰市场更是蓬勃发展，已成为我国现代乡村振兴花卉产业优质高效的主流品种之一，经济前景非常广阔。随着蝴蝶兰种苗组培快速繁殖以及国际贸易日趋频繁，兰花病毒病成为阻碍蝴蝶兰产业发展的技术瓶颈。由于病毒可通过日常管理操作中的机械性伤口、媒介昆虫进行传播，而蝴蝶兰商品苗主要采用组织培养方式快繁，若感染病毒，很容易快速蔓延造成严重损失。迄今，在蝴蝶兰上分离到的病毒超过25种，其中危害最重、分布最广的是建兰花叶病毒(Cymbidiummosaicvirus，CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossumringspotvirus，ORSV)。当这两种病毒复合感染时，会加重病症，严重的影响兰花的观赏价值和经济价值。迄今为止，获得无毒苗的主要途径包括茎尖剥离、热处理和病毒抑制剂等方法(刘黎卿等，2010)。其中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蝴蝶兰茎尖脱毒再生快繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)第一次茎尖剥离：选取携带CyMV和ORSV复合感染的蝴蝶兰组培苗，洗净后切取带2‑3片叶原基的茎尖分生组织，接种在脱毒培养基上进行第一次脱毒培养，获得一次脱毒茎尖；所述脱毒培养基为：1/3MS+6‑BA 0.2‑1.0mg·L‑1+NAA 0.05‑0.2mg·L‑1+蔗糖12‑15g·L‑1+牛肉蛋白胨0.8‑1g·L‑1+活性炭0.8‑1.0g·L‑1；2)第二次茎尖剥离：待步骤1)所获得的一次脱毒茎尖长出2‑3片成熟小叶后，切取带2‑3片叶原基的茎尖分生组织，接种在步骤1)所述的脱毒培养基上进行第二次脱毒培养，获得二次脱...

【技术特征摘要】
1.一种蝴蝶兰茎尖脱毒再生快繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)第一次茎尖剥离：选取携带CyMV和ORSV复合感染的蝴蝶兰组培苗，洗净后切取带2-3片叶原基的茎尖分生组织，接种在脱毒培养基上进行第一次脱毒培养，获得一次脱毒茎尖；所述脱毒培养基为：1/3MS+6-BA0.2-1.0mg·L-1+NAA0.05-0.2mg·L-1+蔗糖12-15g·L-1+牛肉蛋白胨0.8-1g·L-1+活性炭0.8-1.0g·L-1；2)第二次茎尖剥离：待步骤1)所获得的一次脱毒茎尖长出2-3片成熟小叶后，切取带2-3片叶原基的茎尖分生组织，接种在步骤1)所述的脱毒培养基上进行第二次脱毒培养，获得二次脱毒茎尖；3)茎尖防褐化预处理：待步骤2)获得的二次脱毒茎尖长出成熟小叶后，切取带1-2片叶原基的茎尖组织接种到防褐化培养基上暗处理，防止褐化死亡；4)病毒抑制剂结合交替变温预培养：将上述步骤3)中处理后的茎尖转接到添加病毒唑和氨基寡糖素的病毒抑制剂培养基上，同时结合交替变温热处理；所述交替变温热处理为33℃培养4h，转而20℃培养6h，两种温度条件在培养期间循环交替进行，培养湿度50-60％，暗处理12-15天后，光照800-1000lux，光照培养时间30-40天；5)茎尖再生培养：将经过上述步骤4)处理后的茎尖，转接到茎尖再生培养基中，获得茎尖再生组培苗；6)脱毒苗快速繁殖：将步骤5)获得的茎尖再生组培苗切去叶片和根部后接种于增殖培养基进行增殖培养，获得脱毒苗。2.如权利要求1所述的蝴蝶兰茎尖脱毒再生快繁的方法，其特征在于，所述步骤1)中的第一次脱毒培养的培养条件为温度25-28℃，湿度50-60％，暗处理5-7天后，再光照800-1000lux，光照培养时间30-40天。3.如权利要求1所述的蝴蝶兰茎尖脱毒再生快繁的方法，其特征在于，所述步骤2)中的第二次脱毒培养的培养条件为温度25-28℃，湿度50-60％，暗处理5-7天后，再光照800-1000lux，光照培养时间30-...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘译阳，朱娇，李国卫，崔凤，韩燕，
申请(专利权)人：山东省农业科学院生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：山东,37