一种通过基因编辑将番茄红果材料转变为粉果材料的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过基因编辑将番茄红果材料转变为粉果材料的方法。本发明专利技术公开了SlMYB12基因CRIPSR/Cas9基因编辑的两个sgRNA靶点序列，并获得了含有上述两个靶点的基因编辑载体，将该载体转化红果番茄材料可对其SlMYB12基因进行精确编辑，并可以从其自交子代中筛选出SlMYB12基因纯合突变的非转基因粉果材料，进而培育相应的粉果杂交种。通过实验证明：本发明专利技术的基因编辑方法适用于不同的番茄品种，且编辑效率高。与传统的y位点回交转育相比，该方法可以极大地缩短转育时间，1年内实现亲本果色性状的快速精准转化，且不受连锁累赘和转基因安全等因素的限制，具有极大的育种应用前景和经济价值。

A Method of Transforming Tomato Red Fruit Material into Pink Fruit Material by Gene Editing

The invention discloses a method for transforming tomato red fruit material into pink fruit material by gene editing. The present invention discloses two sgRNA target sequences edited by CRIPSR/Cas9 gene of SlMYB12 gene, and obtains gene editing vectors containing the above two targets. The vector can be transformed into red fruit tomato material to edit its SlMYB12 gene accurately, and non-transgenic powdery fruit material with homozygous mutation of SlMYB12 gene can be screened out from its self-bred offspring, and the corresponding powdery fruit hybridization can be cultivated. Species. The experiment proves that the gene editing method of the present invention is suitable for different tomato varieties and has high editing efficiency. Compared with traditional Y-locus backcross breeding, this method can greatly shorten the time of transfer, achieve rapid and accurate transformation of fruit color traits of parents within one year, and is not limited by the factors such as linkage redundancy and transgenic safety, so it has great application prospects and economic value in breeding.

【技术实现步骤摘要】
一种通过基因编辑将番茄红果材料转变为粉果材料的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种通过基因编辑将番茄红果材料转变为粉果材料的方法。
技术介绍
番茄是世界范围内广泛种植的蔬菜和水果兼用类作物，深受各国消费者喜爱。番茄果实的颜色是重要的商品性状。目前国内市场销售的番茄以红色和粉红色两种为主。通常而言，红果番茄植株长势旺，抗病抗逆性强，果实形状好硬度高产量高；粉果番茄颜色更受我国消费者喜爱，相应品质更好。红果番茄和粉果番茄的果肉均呈红色，其颜色的差异主要由果皮颜色决定。前者果皮因积累柚皮素查尔酮而呈黄色，后者果皮不能积累该物质呈透明无色。黄色和无色是一对相对性状，黄色为显性，无色为隐性，受Y基因控制。最近的研究表明Y基因编码SlMYB12，控制果皮中柚皮素查尔酮的积累。红果番茄SlMYB12基因正常，粉果番茄SIMYB12基因的上游存在1个603bp的缺失，导致该基因不能正常表达，进而导致粉果表型。高品质粉果番茄品种的培育一直是我国育种的重要目标之一。但我国不是番茄的原产地，种质资源大多引自国外，且多数为红果材料，不符合我国大众的消费习惯。因此在育种中常需要将红果材料转育为粉果材本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将番茄红果材料转变为粉果材料的方法，包括如下步骤：利用CRISPR/Cas9系统对番茄红果材料基因组中的果皮颜色调控基因SlMYB12进行编辑，进而使所述果皮颜色调控基因SlMYB12功能丧失，得到番茄粉果材料；所述CRISPR/Cas9系统中包括两个sgRNA，分别命名为sgRNA1和sgRNA2；所述sgRNA1和所述sgRNA2识别的靶序列均为所述番茄红果材料基因组中编码SlMYB12蛋白的DNA片段。

【技术特征摘要】
1.一种将番茄红果材料转变为粉果材料的方法，包括如下步骤：利用CRISPR/Cas9系统对番茄红果材料基因组中的果皮颜色调控基因SlMYB12进行编辑，进而使所述果皮颜色调控基因SlMYB12功能丧失，得到番茄粉果材料；所述CRISPR/Cas9系统中包括两个sgRNA，分别命名为sgRNA1和sgRNA2；所述sgRNA1和所述sgRNA2识别的靶序列均为所述番茄红果材料基因组中编码SlMYB12蛋白的DNA片段。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述sgRNA1识别的靶序列为序列2所示的DNA分子；或，所述sgRNA2识别的靶序列为序列3所示的DNA分子。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述编辑的方法为将向所述番茄红果材料中导入番茄基因组编辑的载体；或，所述番茄基因组编辑的载体含有所述sgRNA1的编码基因、所述sgRNA2的编码基因和Cas9蛋白的编码基因；或，所述sgRNA1的编码基因为序列4第7260-7354位所示的DNA分子；或，所述sgRNA2的编码基因为序列4第7496-7590位所示的DNA分子；或，所述Cas9蛋白的编码基因为序列4第2753-6856所示的DNA分子。4.如权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括筛选SlMYB12纯合突变体的步骤。5.一种非转基因番茄粉果材料的获得方法，包括如下步骤：将权利要求1-4中任一所述方法获得的番茄粉果材料自交，得到自交子代，选择SlMYB12纯合突变且不携带外源DNA片段的自交子代，即为非转基因番茄粉果材料。6.权利要求5所述的方法在培育粉果杂交种中的应用。7.如下(1)-(4)中任一种生物材料：(1)权利要求3中所述的番茄基因组编辑的载体；(2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：李传友，邓磊，李常保，孙传龙，杜敏敏，周明，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：北京,11