HER2基因荧光原位杂交探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种HER2基因荧光原位杂交探针及其制备方法和应用。本发明专利技术的HER2基因荧光原位杂交探针的制备方法以及采用该制备方法制备得到的HER2基因荧光原位杂交探针，专门针对基因组非重复区设计，可以降低非特异反应，减少背景干扰；构建的探针是单链DNA，较之传统的BAC或PCR产物等双链探针，可以减少探针与自身的配对，增加杂交效率；并且构建的单链DNA探针片段小，可以更加快速的与靶向序列结合，减少杂交时间。

HER2 gene fluorescence in situ hybridization probe and its preparation and Application

The invention discloses a HER2 gene fluorescence in situ hybridization probe, a preparation method and application thereof. The preparation method of the HER2 gene fluorescence in situ hybridization probe and the HER2 gene fluorescence in situ hybridization probe prepared by the method are specially designed for the non-repetitive region of the genome, which can reduce the non-specific reaction and background interference. The constructed probe is single-stranded DNA and can reduce the pairing of the probe with itself compared with the traditional double-stranded probes such as BAC or PCR products. To increase the efficiency of hybridization, and to construct a single-stranded DNA probe fragment is small, which can more quickly bind to the targeted sequence and reduce the hybridization time.

【技术实现步骤摘要】
HER2基因荧光原位杂交探针及其制备方法和应用
本专利技术涉及分子生物学检测领域，尤其是涉及一种HER2基因荧光原位杂交探针及其制备方法和应用。
技术介绍
荧光原位杂交技术(Fluorescenceinsituhybridization，FISH)是根据已知种群特异的DNA序列，以利用荧光标记的DNA片段作为探针，与细胞基因组中DNA分子杂交，检测该特异DNA的存在与丰度。FISH的基本原理是将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记，然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析。FISH具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点，不但能显示中期分裂相，还能显示于间期核。目前商业化的HER2等基因FISH检测主要使用BAC(BacterialArtificialChromosome)或者PCR产物作为探针经过荧光分子标记后进行杂交检测。然而，BAC和PCR产物探针存在一些非特异序列，探针特异性不高，信号背景偏高。现有探针片段普遍偏大，一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种HER2基因荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：构建探针文库：选择包含HER2基因的人类基因组17号染色体上非重复的目标基因区域，每隔1‑10bp构建一个与目标基因区域完全互补的长度为35nt‑200nt的单链片段作为候选探针，通过BLAST比对，获得非特异杂交的Tm值，去除非特异Tm值对于45℃的候选探针，并选择非重叠的候选探针，在筛选得到的候选探针的两端分别加上扩增引物片段，得到目的探针文库；扩增所述目的探针文库；对扩增产物进行体外转录，制备与所述目的探针文库对应的文库RNA；对所述文库RNA进行反转录，制备单链DNA探针；对制备的单链DNA探针进行荧光标记，即得...

【技术特征摘要】
1.一种HER2基因荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：构建探针文库：选择包含HER2基因的人类基因组17号染色体上非重复的目标基因区域，每隔1-10bp构建一个与目标基因区域完全互补的长度为35nt-200nt的单链片段作为候选探针，通过BLAST比对，获得非特异杂交的Tm值，去除非特异Tm值对于45℃的候选探针，并选择非重叠的候选探针，在筛选得到的候选探针的两端分别加上扩增引物片段，得到目的探针文库；扩增所述目的探针文库；对扩增产物进行体外转录，制备与所述目的探针文库对应的文库RNA；对所述文库RNA进行反转录，制备单链DNA探针；对制备的单链DNA探针进行荧光标记，即得。2.如权利要求1所述的HER2基因荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于，所述候选探针的长度为40-50nt。3.如权利要求1所述的HER2基因荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于，所述扩增引物片段的序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。4.如权利要求1所述的HER2基因荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于，所述构建探针文库是使用芯片合成技术在基因芯片上合成所述目的探针文库。5.如权利要求1～...

【专利技术属性】
技术研发人员：李怡，
申请(专利权)人：广州简册生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44