【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】扩展临床组织样本的方法相关申请本申请要求2016年2月25日提交的美国临时申请序列号62/299,754的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
在病理学中，使用衍射限制的显微镜检查细胞结构和分子组成一直是诊断各种疾病前和疾病状态的关键。然而，生物分子本身在尺度上是纳米级的并且在整个细胞和组织中配置有纳米级精度。在基础科学中，已经开始使用先进的超分辨率显微镜方法以及电子显微镜方法探究，但是这种策略需要复杂的硬件，可能呈现陡峭的学习曲线，并且难以应用于大规模样品，诸如人组织。因此，超分辨率成像和纳米显微学尚未在病理学的临床实践中找到常规用途。因此，需要可以与当前衍射限制的显微镜一起工作并且可以以纳米级精度光学放大样品，例如组织切片或肿瘤，的更高分辨率的显微镜检查。
技术实现思路
本专利技术提供了一种用于制备扩展生物样本的方法。扩展生物样本适合用于显微镜分析。通过“显微镜分析”是指使用任何技术分析样本，该技术提供对于用肉眼看不到的样本的方面的可视化，即不在正常眼睛的分辨率范围内。通过“制备扩展生物样本”，通常是指，生物样本相对于在暴露于本文所述的方法之前的样本物理地扩展...
【技术保护点】
1.一种用于制备可扩展生物样本的方法，包括以下步骤(a)使所述样品与将与所述样品内的生物分子结合的大分子接触；(b)用双官能交联剂处理所述样本；(c)用可溶胀聚合物的前体渗透所述样本；(d)聚合所述前体以在所述样本内形成可溶胀聚合物；(e)将所述生物分子锚定到所述可溶胀聚合物上；以及(f)将所述样品与约1至约100U/ml的非特异性蛋白酶在具有约4至约12之间的pH的缓冲液中，在约50℃至约70℃下温育约0.5至约3小时，所述缓冲液包括约5mM至约100mM的金属离子螯合剂，约0.1％至约1.0％的非离子表面活性剂，和约0.05M至约1.0M的单价盐。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.25 US 62/299,7541.一种用于制备可扩展生物样本的方法，包括以下步骤(a)使所述样品与将与所述样品内的生物分子结合的大分子接触；(b)用双官能交联剂处理所述样本；(c)用可溶胀聚合物的前体渗透所述样本；(d)聚合所述前体以在所述样本内形成可溶胀聚合物；(e)将所述生物分子锚定到所述可溶胀聚合物上；以及(f)将所述样品与约1至约100U/ml的非特异性蛋白酶在具有约4至约12之间的pH的缓冲液中，在约50℃至约70℃下温育约0.5至约3小时，所述缓冲液包括约5mM至约100mM的金属离子螯合剂，约0.1％至约1.0％的非离子表面活性剂，和约0.05M至约1.0M的单价盐。2.根据权利要求1所述的方法，其中，通过使所述可溶胀聚合物与溶剂或液体接触以引起所述可溶胀聚合物溶胀而扩展所述可扩展样本。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样本是先前保藏的临床样品。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述样品是福尔马林固定石蜡包埋的(FFPE)或苏木精和伊红(H&E)染色的组织样品，或新鲜冷冻的样品，并且其中，在接触步骤(a)之前，所述方法还包括以下步骤(i)如果所述样品是封固的，将所述样品去盖玻片；(ii)如果所述样品是封固的，对所述样品进行封固介质去除；(iii)如果执行了步骤(ii)，对所述样品进行再水化；以及(iv)对所述样品进行抗原修复。5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述蛋白酶选自蛋白酶K，枯草杆菌蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶和弹性蛋白酶。6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷，柠檬酸盐，磷酸盐，碳酸氢盐，MOPS，硼酸盐，TAPS，N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸，三(羟甲基)甲基甘氨酸，HEPES，TES和MES。7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述螯合剂选自EDTA，EGTA，EDDHA，EDDS，BAPTA和DOTA。8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述表面活性剂选自曲拉通X-100，吐温20，吐温80，脱水山梨糖醇，聚山梨醇酯20，聚山梨醇酯80，PEG，癸基葡糖苷，癸基多聚葡萄糖和椰油酰胺DEA。9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述盐选自Na+，K+，铵和Cs+。10.根据权利要求1所述的方法，其中，将所述样品在包括8U/ml蛋白酶K，50mM三羟甲基氨基甲烷，25mMEDTA，0.25％曲拉通X-100和0.4MNaCl的缓冲液中温育。11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述双官能交...
【专利技术属性】
技术研发人员：爱德华·斯图尔特·博伊登，安德鲁·汉诺·贝克，招泳欣，奥克塔文·布库尔，
申请(专利权)人：麻省理工学院，贝斯以色列护理医疗中心有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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