禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，旨在解决工程菌禽法氏囊病毒VP2蛋白表达量低的技术问题。该发酵工艺包括以下步骤：（1）菌种活化；（2）种子培养；（3）补料分批发酵：I.细胞快速繁殖阶段：制备基础培养基置于发酵罐中，将二级种子液按4～6%的接种量接入发酵罐中发酵，待溶氧量急剧上升开始补料；II.蛋白表达阶段：加入终浓度为0.5mmol/L诱导剂；加入补料培养基之二，继续发酵至结束即成。本发明专利技术的工艺方法蛋白表达量高，能够缩短生产周期、减少设备投资，降低生产成本，提高生产效率，能够极大地提高产品在商场上的竞争力，为IBDV基因工程亚单位疫苗的研制和生产奠定了基础。

High-expression Fermentation of VP2 Protein of Avian Bursal Disease Virus

The invention discloses a high expression fermentation process of avian bursal virus VP2 protein, aiming at solving the technical problem of low expression of avian bursal virus VP2 protein of Engineering bacteria. The fermentation process includes the following steps: (1) activation of bacteria; (2) seed culture; (3) fed batch fermentation: I. Rapid cell proliferation stage: preparation of basic culture medium in fermentation tank, the second-stage seed liquid was put into fermentation tank according to 4-6% inoculation amount, and the amount of dissolved oxygen increased sharply to start feeding; II. protein expression stage: the final concentration of 0.5mmol/L inducer was added; Add the second of the feeding medium and continue to ferment until the end. The process method of the invention has high protein expression, can shorten production cycle, reduce equipment investment, reduce production cost, improve production efficiency, can greatly improve the competitiveness of products in the market, and lays a foundation for the development and production of IBDV genetic engineering subunit vaccine.

【技术实现步骤摘要】
禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺
本专利技术涉及发酵工程
，具体涉及一种禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺。
技术介绍
禽法氏囊病（InfectiousBursalDisease，IBD）是一种急性、高度接触性传染病，主要感染雏鸡的免疫器官法氏囊，引起免疫抑制甚至死亡，该病主要危及3～7周的雏鸡，对禽业影响巨大。禽法氏囊病是由传染性法氏囊病毒（InfectiousBursalDiseaseVirus，IBDV）引起的，病毒在感染后迅速侵入法氏囊，并在法氏囊内增殖，使得法氏囊中的B淋巴细胞裂解、死亡，最终产生严重的免疫抑制。长期的免疫抑制使鸡群容易受到其他病原体的感染，且机体对疫苗的免疫反应力下降，不能正常诱导保护性免疫反应，从而造成免疫失败。IBDV的VP2蛋白是由454个氨基酸组成，分子量约为37KD，占病毒总蛋白的51%，是IBDV的主要结构蛋白和保护性抗原，也是构成病毒衣壳的主要成分。VP2蛋白可以诱导与识别病毒中和抗体、也影响着病毒的毒力及抗原的变异、还可以诱导细胞凋亡等。因此，生产和科研上均迫切需要大量制备VP2蛋白，以为IBDV的防治和新型亚单位疫苗的研发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，包括以下步骤：（1）菌种活化：将含有禽法氏囊病毒VP2蛋白基因的基因工程菌菌种划线接种在含有卡那霉素的LB固体培养基表面，于37℃培养8～16h；（2）种子培养：将活化后的菌种接种一级种子培养基中，37℃振荡培养8～10～12h，得一级种子液；再将一级种子液按1～2%的接种量接入二级种子培养基中，37℃振荡培养4～6h，得二级种子液；（3）补料分批发酵：I. 细胞快速繁殖阶段a. 制备基础培养基置于发酵罐中，初始pH 6.54，121℃灭菌20min，降温至35℃，调节pH为6.8～7.2，再将二级种子液按4～6%的接种量接入发酵罐中发酵，控制发...

【技术特征摘要】
1.一种禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，包括以下步骤：（1）菌种活化：将含有禽法氏囊病毒VP2蛋白基因的基因工程菌菌种划线接种在含有卡那霉素的LB固体培养基表面，于37℃培养8～16h；（2）种子培养：将活化后的菌种接种一级种子培养基中，37℃振荡培养8～10～12h，得一级种子液；再将一级种子液按1～2%的接种量接入二级种子培养基中，37℃振荡培养4～6h，得二级种子液；（3）补料分批发酵：I.细胞快速繁殖阶段a.制备基础培养基置于发酵罐中，初始pH6.54，121℃灭菌20min，降温至35℃，调节pH为6.8～7.2，再将二级种子液按4～6%的接种量接入发酵罐中发酵，控制发酵温度为35～37℃，溶氧量维持在20～30%；b.待基础培养基营养物质耗尽时，以0.3～3L/h的速率加入补料培养基之一；II.蛋白表达阶段：a.待发酵液的OD600达到75～85，将发酵液温度降至30℃，加入终浓度为0.5mmol/L诱导剂；b.溶氧量维持在20～30%；以0.3～3L/h的速率加入补料培养基之二；工程菌的比生长速率为0.01～0.1；继续发酵至结束即成。2.根据权利要求1所述的禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，其特征在于，所述基因工程菌的宿主为E.coliBL21(DE3)pLySs，其表达载体为pET-28a，表达重组蛋白为禽法氏囊病毒VP2蛋白。3.根据权利要求1所述的禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，其特征在于，所述一级种子培养基为LB培养基，pH值为7.0，接种前加入浓度为100ug/mL的卡那霉素。4.根据权利要求1所述的禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺...

【专利技术属性】
技术研发人员：张改平，刘运超，邓瑞广，邢广旭，陈玉梅，刘东民，魏蔷，冯华，周景明，刘艳凯，赵孟孟，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，河南中泽生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41