一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法，它包括聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的筛选，聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的洗涤,聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的浸泡和聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的再洗涤。本发明专利技术一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法，能够制备生产出高质量血型检测卡用微柱凝胶，用该方法制备的微柱凝胶生产的血型检测卡能够明显提高产品灵敏度、特异性。

【技术实现步骤摘要】
一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法
本专利技术涉及一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法。
技术介绍
输血发展史上里程碑事件是1900年奥地利维也纳大学科学家KarlLandersteiner等发现了A、B、O血型。两年后，他的学生又发现了AB型血型，从而开创了安全输血的新时代，Landersteiner也因此于1930年获得了诺贝尔医学奖。1927～1947年间相继发现MNS、P和Rh系统，安全的输血技术才得以初步建立。临床有效用血首先要求临床医生明确哪些患者在何种情况下需要输血，有效治疗凝血障碍和防止输血的不良反应，我国卫生部2000年颁布的《临床输血技术规范》要求输血前对受血者和供血者的ABO血型进行复查，并常规检查患者Rh血型等等。血型检测的常用方法有经典试管法、微柱凝胶法、微孔板法、玻片法等，其中微柱凝胶法是目前较为先进和流行的检验技术方法，它是红细胞膜抗原与抗体结合的技术、凝胶介质中分子筛技术、离心技术等多项技术相结合的新型血型检测方法。微柱凝胶技术较其它方法具有试验灵敏度更高，结果更准确，操作标准化，重复性好，结果稳定，容易掌握，可减少实验误差。目前市场微柱凝胶血型卡类产品良莠不齐，而高质量的血型微柱凝胶卡的制备的核心就是微柱凝胶的制备，经检索，目前尚无针对微柱凝胶这一核心技术的论文及专利，且市面上的微柱凝胶在筛选游离分子的时候，特异性不好，所以导致灵敏度不高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对上述现有技术提供一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法，其灵敏度高、特异性好。本专利技术的目的是这样实现的：一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法，包括以下几个步骤：步骤一、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的筛选选用为聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶，凝胶粒径为10～100纳米的比例≥65％，每1克凝胶，用20ml生理盐水浸泡24～48小时；步骤二、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的洗涤葡聚糖凝胶溶胀胶充分混匀，使用900g离心力离心2分钟，吸去上清；再加入等体积0.9％氯化钠溶液，重复该操作3-5次，直至上层无细颗粒为止；步骤三、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的浸泡凝胶浸泡液配方如下：氯化钠2.5×10-3g/mlPEG400(2.2-2.6)×10-3g/ml琥珀酰亚胺丙酸酯4×10-5g/ml以上试剂用纯化水溶解，并调节pH为7.2-7.4，浸泡洗涤好的葡聚糖凝胶15-30分钟；步骤四、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的再洗涤所述凝胶洗涤液的配方如下：以上试剂用纯化水溶解，调节pH为6.6-6.8，使用该凝胶洗涤液，按体积比1:1的比例洗涤凝胶3-5次，即可获得颗粒均匀的凝胶颗粒。具体实施方式步骤一、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的筛选选用为聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶，凝胶粒径为10～100纳米的比例≥65％，每1克凝胶，用20ml生理盐水浸泡24～48小时，确保凝胶充分膨胀。步骤二、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的洗涤充分膨胀的聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶，需洗去溶液中破损的凝胶碎片和的细颗粒。具体方法如下：葡聚糖凝胶溶胀胶充分混匀，使用900g离心力离心2分钟，吸去上清。再加入等体积0.9％氯化钠溶液，重复该操作3-5次，直至上层无细颗粒为止。步骤三、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的浸泡凝胶浸泡液配方如下：氯化钠2.5×10-3g/mlPEG400(2.2-2.6)×10-3g/ml琥珀酰亚胺丙酸酯4×10-5g/ml以上试剂用纯化水溶解，并调节pH为7.2-7.4。PEG400具有广泛相容性，琥珀酰亚胺丙酸酯可以修饰PEG400，可以有效增加其他物质的溶解度。使用该凝胶浸泡液，浸泡洗涤好的葡聚糖凝胶15-30分钟，可以使凝胶得到进一步溶胀，颗粒大小更均匀。步骤四、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的再洗涤所述凝胶洗涤液的配方如下：以上试剂用纯化水溶解，调节pH为6.6-6.8；对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙脂所具有的酚羟基结构，可以破坏微生物的细胞膜，使细胞内的蛋白值变相，有效抑制微生物的生长；乙二胺四乙酸二钾可以与血液中的钙离子形成螯合物，从而阻止血液的非特异性凝固，提高了产品的灵敏度和特异性。牛血清白蛋白有免疫原性，但是单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯再修饰牛血清白蛋白可以降低其免疫活性，提高凝集效果，不会发生拖尾现象。使用该凝胶洗涤液，按体积比1:1的比例洗涤凝胶3-5次，即可获得颗粒均匀的凝胶颗粒，可用于微柱凝胶的免疫试验。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：GEG400具有广泛相容性，可以有效增加其他物质的溶解度，减慢了分子通过凝胶的速度，增加了反应时间。对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙脂所具有的酚羟基结构，可以破坏微生物的细胞膜，使细胞内的蛋白值变相，有效抑制微生物的生长，防止凝胶或抗体因为细菌繁殖而失效；乙二胺四乙酸二钾可以与血液中的钙离子形成螯合物，从而阻止血液的非特异性凝固，提高了产品的灵敏度和特异性；PEG400和牛血清白蛋白作为缓冲液体，凝集效果好，无拖尾情况发生。修饰过的PEG本身不能特异性修饰蛋白，但是通过增加乙二胺四乙酸二钾之后，克服了这一缺点；牛血清白蛋白有免疫原性，但是修饰过的PEG再修饰牛血清白蛋白可以降低其免疫活性，提高凝集效果，不会发生拖尾现象，使得具备了特异性和灵敏度，延长了反应时间，实验效果增加明显。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下几个步骤：步骤一、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的筛选选用为聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶，凝胶粒径为10～100纳米的比例≥65％，每1克凝胶，用20ml生理盐水浸泡24～48小时；步骤二、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的洗涤葡聚糖凝胶溶胀胶充分混匀，使用900g离心力离心2分钟，吸去上清；再加入等体积0.9％氯化钠溶液，重复该操作3‑5次，直至上层无细颗粒为止；步骤三、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的浸泡凝胶浸泡液配方如下：氯化钠 2.5×10‑3g/mlPEG400 (2.2‑2.6)×10‑3g/ml琥珀酰亚胺丙酸酯 4×10‑5g/ml以上试剂用纯化水溶解，并调节pH为7.2‑7.4，浸泡洗涤好的葡聚糖凝胶15‑30分钟；步骤四、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的再洗涤所述凝胶洗涤液的配方如下：

【技术特征摘要】
1.一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下几个步骤：步骤一、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的筛选选用为聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶，凝胶粒径为10～100纳米的比例≥65％，每1克凝胶，用20ml生理盐水浸泡24～48小时；步骤二、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的洗涤葡聚糖凝胶溶胀胶充分混匀，使用900g离心力离心2分钟，吸去上清；再加入等体积0.9％氯化钠溶液，重复该操作3-5次，直至上层无细颗粒为止；步骤三、聚丙烯酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉平，陈芳芳，王布强，薄薇，
申请(专利权)人：江苏力博医药生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32