本发明专利技术公开了一种ABO正反定型和RhD血型定型检测卡，属于血型定型测试领域。本发明专利技术的检测卡包含8个微柱，其制备方法为：（1）制备抗体稀释液和反定缓冲液（2）分别用抗体稀释液将抗A抗体、抗B抗体、抗D抗体稀释成1:64‑1:256效价的抗A抗体溶液、抗B抗体溶液、抗D抗体溶液；（3）在1‑4微柱中依次加入15‑25微升抗A抗体溶液、抗B抗体溶液、抗D抗体溶液、抗体稀释液，5‑8微柱中分别加入反定缓冲液；（4）在8个微柱中分别加入玻璃微珠；（5）用铝箔加热封口。本发明专利技术的检测卡凝集反应稳定性好，结果判定客观性强，准确性高，有效防止了误判现象；判读结果的有效时间可达几小时，有效防止了操作时间把控不当造成的判读失误。
【技术实现步骤摘要】
ABO正反定型和RhD血型定型检测卡
本专利技术涉及血型定型测试领域，特别涉及一种ABO正反定型和RhD血型定型检测卡。
技术介绍
ABO血型的发现，解决了输血的基本问题，为医学科学的飞速发展奠定了基础。时至今日，血型血清学仍然是输血研究的重要课题，血型鉴定和交叉配血是保证输血安全的核心技术。正定型属于细胞抗原定型，反定型属于血清抗体定型。单独采用正定型来鉴定ABO血型，在某些情况下会出现误判。ABO血型误判，对于临床输血来说风险极大，会造成ABO血型异型输血，易引起急性溶血性输血反应的发生，对患者的生命安全造成威胁。ABO正定型和反定型之间可以相互印证，因此同时进行正反定型可以保证血型的准确性。2000年卫生部颁发的《临床输血技术规范》(卫医发[2000]184号)第四章第十五条明确规定：“输血科(血库)要逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型(正反定型)，并常规检查患者的Rh(D)血型，正确无误时可进行交叉配血。”英国药典中特别强调“检测ABO血型要检测红细胞抗原和血清或血浆中抗体两方面。”目前，ABO正反定型和RhD血型定型常用微柱凝胶检测卡。微柱凝胶免疫检测技术是20世纪90年代产生的一种免疫检测技术，其基本原理是利用分子筛技术、离心技术和特异性免疫反应技术原理，把血型血清学技术与凝胶分子筛技术有机结合起来，可灵敏地检测出可能存在的微弱血型抗原抗体反应，被认为是血型血清学检验的里程碑。目前国内外已有一些厂家生产ABO正反定型及RhD血型检测卡，但是存在以下一些不足：葡聚糖凝胶或聚丙烯葡聚糖凝胶作为填充物，其灵敏度与特异性较差，造成检测精确性不高；凝胶法稳定性差，必须在几分钟之内判读结果，易造成误判；杂蛋白和红细胞易发生非特异性吸附，对分型造成干扰。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种稳定性好，结果判定客观性强，准确性高的ABO正反定型和RhD血型定型检测卡。本专利技术的技术方案为：一种ABO正反定型和RhD血型定型检测卡，包含8个微柱，其制备方法为：（1）制备抗体稀释液和反定缓冲液，抗体稀释液成分如下（每1000mL水）：Na2HPO4·12H2O2.3-3.5gNaH2PO4·2H2O0.23-0.35gNaCl6-12g牛血清白蛋白5-15g酪蛋白钠0.8-4.5gNaN30.5-1g乙二胺四乙酸二钠3-4.5g反定缓冲液成分如下（每1000mL水）：Na2HPO4·12H2O2.3-3.5gNaH2PO4·2H2O0.23-0.35gNaCl6-12g牛血清白蛋白5-15g酪蛋白钠0.8-4.5gNaN30.5-1g乙二胺四乙酸二钠3-4.5g（2）分别用抗体稀释液将抗A抗体、抗B抗体、抗D抗体稀释成1:64-256效价的抗A抗体溶液、抗B抗体溶液、抗D抗体溶液；（3）在1-4微柱中依次加入15-25微升抗A抗体溶液、抗B抗体溶液、抗D抗体溶液、抗体稀释液，5-8微柱中分别加入15-25微升反定缓冲液；（4）在1-8微柱中分别加入30mg-50mg玻璃微珠；（5）用铝箔加热封口；优选的，玻璃微珠粒径为70-110微米。进一步优选为，玻璃微珠使用前在干燥箱内，150℃-190℃下干燥1-5小时。进一步优选为，抗体稀释液和反定缓冲液中，每1000mL水中还添加曲拉通1-3ml。本专利技术中酪蛋白钠与曲拉通（TritonX-100）联合应用，以阻止杂蛋白与红细胞发生非特异性吸附，消除干扰因子，进一步保证红细胞与相应抗体发生特异性反应。进一步优选为，抗体稀释液和反定缓冲液中，每1000mL水中还添加硫柳汞钠0.5-1.5g。本专利技术硫柳汞钠与NaN3协同作为防腐剂，防腐效果更确切，进一步保证溶液不被微生物污染，消除微生物污染对定型的影响。本专利技术中使用的玻璃微珠的材质为硼硅酸盐，圆球形，大小均匀，表面光滑，白色，无杂质。本专利技术采用玻璃微珠代替葡聚糖凝胶，凝集反应的敏感性更好，检测精确性更高，可检测到微弱的红细胞凝集。抗体稀释液和反定缓冲液成分相同，其中Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、NaCl三种成分共同组成缓冲体系，能保证溶液的离子强度与pH值相对恒定，维持抗体及红细胞的生物活性；BSA（牛血清白蛋白）能保证溶液的胶体渗透压相对恒定，与缓冲体系协同维持抗体及红细胞的生物活性，为特异性免疫反应的发生提供条件。乙二胺四乙酸二钠可以维持红细胞的生物活性，防止其变性或发生非正常凝集。酪蛋白钠用来阻止杂蛋白与红细胞发生非特异性吸附，消除干扰因子，保证红细胞与相应抗体发生特异性反应。NaN3保证溶液不被微生物污染，消除微生物污染对定型的影响。本专利技术检测卡使用方法为：（1）取待检抗凝/不抗凝全血，离心1800-2200rpm，4-5min；（2）吸取上层血清/血浆到试管中，备用；下层为压积红细胞；（3）以生理盐水配制红细胞悬液（0.8%-2%），备用；（4）将待检红细胞悬液（0.8%-2%）分别加入到第1、2、3、4、8柱中，每柱20-50微升；（5）将已知0.8%-2%A型、B型、O型反定型用红细胞悬液分别依次加入到第5、6、7柱中，每柱20-50微升；（6）将待检血清/血浆分别加入到第5-8微柱中，每柱30-50微升；（7）轻弹试剂卡，使微柱上部的反应物混匀；（8）用专用卡式离心机离心（两相离心，第一相：离心力50g-60g，110s-130s；第二相：离心力190g-210g，160s-190s）；（9）判读结果并记录。凝集表现为红细胞停留于玻璃微珠分离介质上表面或分布在分离介质中，未凝集则表现为红细胞通过分离介质留在微柱的底部。红细胞凝集是阳性结果，表明样本中存在相应的抗原/抗体；未凝集是阴性结果，表明样本中不存在相应的抗原/抗体。本专利技术的有益效果：1、本专利技术的检测卡凝集反应稳定性好，结果判定客观性强，准确性高，有效防止了误判现象；判读结果的有效时间可达几小时，有效防止了操作时间把控不当造成的判读失误。2、本专利技术采用玻璃微珠代替葡聚糖凝胶，凝集反应的敏感性更好，检测精确性更高，可检测到微弱的红细胞凝集。3、本专利技术中酪蛋白钠与曲拉通（TritonX-100）联合应用，以阻止杂蛋白与红细胞发生非特异性吸附，消除干扰因子，进一步保证红细胞与相应抗体发生特异性反应。4、牛血清白蛋白（BSA）能保证溶液的胶体渗透压相对恒定，与缓冲体系协同维持抗体及红细胞的生物活性，为特异性免疫反应的发生提供条件。5、本专利技术硫柳汞钠与NaN3协同作为防腐剂，防腐效果更确切，进一步保证溶液不被微生物污染，消除微生物污染对定型的影响。6、本专利技术乙二胺四乙酸二钠可以维持红细胞的生物活性，防止其变性或发生非正常凝集。附图说明图1为本专利技术的ABO正反定型和RhD血型定型检测卡的结构示意图。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行进一步说明，此处所描述的具体实施例仅用以解释本公开，并不用于限定本公开。实施例1本专利技术的检测卡包含8个微柱，采用下述步骤制备ABO正反定型和RhD血型定型检测卡：（1）制备抗体稀释液和反定缓冲液；抗体稀释液和反定缓冲液成分相同，抗体稀释液和反定缓冲液配方见表1；（2）分别用抗体稀释液将抗A抗体、抗B抗体、抗D抗体稀释成1:64-1:256效价的抗A本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种ABO正反定型和RhD血型定型检测卡，其特征在于，所述检测卡包含8个微柱，其制备方法为：（1）制备抗体稀释液和反定缓冲液，抗体稀释液成分如下，每1000mL水：Na2HPO4·12H2O 2.3‑3.5gNaH2PO4·2H2O 0.23‑0.35gNaCl 6‑12g牛血清白蛋白 5‑15g酪蛋白钠 0.8‑4.5gNaN3 0.5‑1g乙二胺四乙酸二钠 3‑4.5g反定缓冲液成分如下，每1000mL水：Na2HPO4·12H2O 2.3‑3.5gNaH2PO4·2H2O 0.23‑0.35gNaCl 6‑12g牛血清白蛋白 5‑15g酪蛋白钠 0.8‑4.5gNaN3 0.5‑1g乙二胺四乙酸二钠 3‑4.5g（2）分别用抗体稀释液将抗A抗体、抗B抗体、抗D抗体稀释成1:64‑256效价的抗A抗体溶液、抗B抗体溶液、抗D抗体溶液；（3）在1‑4微柱中依次加入15‑25微升抗A抗体溶液、抗B抗体溶液、抗D抗体溶液、抗体稀释液，5‑8微柱中分别加入15‑25微升反定缓冲液；（4）在8个微柱中分别加入30mg‑50mg玻璃微珠；（5）用铝箔加热封口。...
【技术特征摘要】
1.一种ABO正反定型和RhD血型定型检测卡，其特征在于，所述检测卡包含8个微柱，其制备方法为：（1）制备抗体稀释液和反定缓冲液，抗体稀释液成分如下，每1000mL水：Na2HPO4·12H2O2.3-3.5gNaH2PO4·2H2O0.23-0.35gNaCl6-12g牛血清白蛋白5-15g酪蛋白钠0.8-4.5gNaN30.5-1g乙二胺四乙酸二钠3-4.5g反定缓冲液成分如下，每1000mL水：Na2HPO4·12H2O2.3-3.5gNaH2PO4·2H2O0.23-0.35gNaCl6-12g牛血清白蛋白5-15g酪蛋白钠0.8-4.5gNaN30.5-1g乙二胺四乙酸二钠3-4.5g（2）分别用抗体稀释液将抗A抗体、抗B抗体、抗D抗体稀释成1:64-256效价的抗A抗体溶液、抗B抗体溶液、抗D抗体溶液；（3）在1-4微柱...
【专利技术属性】
技术研发人员：王振华，李胜斌，刘春辉，
申请(专利权)人：河北鑫辉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13
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