一种基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒，包括两个盒体以及与所述盒体相连的翻盖式盒盖，两个盒体分别为A盒体和B盒体；所述的A盒体内放置第一纸托，所述第一纸托上设置20个试剂孔槽和/或离心管放置加样槽；B盒体内放置第二纸托，所述第二纸托上设置有6个试剂孔槽。本发明专利技术所述试剂盒具有既可以进行新鲜组织的乳腺癌表达谱分型、又可进行乳腺癌FFPE样本的分子分型、分型准确性高，灵敏度高，稳定性强等特点；既能够满足检测灵敏度的要求，又能够节约大量资本，另外还具有操作简单等特点，不仅能带来可观经济效益，还能实现快速检测。

A Library-Building kit for breast cancer typing based on Illumina platform

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to a breast cancer typing detection library kit based on Illumina platform, which comprises two box bodies and a flip-over cover connected with the box body, the two box bodies are A box body and B box body respectively; the first paper bracket is placed in the A box body, and the first paper bracket is provided with 20 reagent hole grooves and/or centrifugal tube for placing sample adding grooves; A second paper holder is placed inside, and six reagent hole grooves are arranged on the second paper holder. The kit has the characteristics of high accuracy, high sensitivity and strong stability, which can not only classify breast cancer expression profiles of fresh tissues, but also FFPE samples of breast cancer. It not only meets the requirements of detection sensitivity, but also saves a lot of capital, and has the characteristics of simple operation, which can not only bring considerable economic benefits, but also bring about considerable economic benefits. Achieve rapid detection.

【技术实现步骤摘要】
一种基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒。
技术介绍
目前乳腺癌在临床仍以患者年龄、原发瘤大小、临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移和激素受体状态等指标，预测乳腺癌预后和指导选择治疗方案。但乳腺癌个体差异性较显著，上述标准无法进一步精确地预测预后，难以满足乳腺癌治疗方案“个体化”。比较分析乳腺正常组织和肿瘤的基因表达谱，可以明确mRNA水平的基因表达差异，从而根据基因表达情况预测患者的临床转归，采取相应诊疗措施。基于基因表达谱的各种乳腺癌标签表现出更加客观、准确的预后预测能力，具有良好的发展前景。自20世纪90年代中期基因芯片的出现，便被广泛用于癌症相关的基因表达谱分析，并用于预测人类癌症中复杂多样的生物学特征和临床特征。虽然基因表达谱分析被广泛应用于人类癌症的研究中，但在患者的临床治疗方面的应用却受到很大的局限。这是由于目前所获得的大部分临床病例肿瘤样本都是通过甲醛固定或石蜡包埋的方式储存，而很少通过低温冻存的方式保存。为了尝试利用这些丰富的肿瘤样本，研究者尝试通过RT-PCR或DASL等方式进行表达量的分析，但这些方法并不能够进行精确的定量，且只能对少数的已知转录本进行定量。近些年，随着二代测序的出现以及测序成本的不断下降，可以通过二代测序的方式分析FFPE样本中mRNA的表达水平，从而克服微阵列技术对于FFPE样本检测的限制，并对功能基因组学产生革命性的影响。传统的mRNA测序技术是通过oligodT反转录引物将mRNA反转录成cDNA，然后打断建库或是通过将带有oligodA尾的mRNA富集下来然后打断、逆转录、建库。这两个方法都需要获得高质量的RNA得以实现。随着高通量测序技术的发展，有研究者通过将配对的新鲜组织标本与甲醛固定组织标本分别用微阵列芯片的方法和高通量测序的方法进行组织基因的定量，结果发现通过高通量测序的方法获得的新鲜组织与固定组织的基因表达水平相关性较高，相关系数达0.82，而通过HEEBO微阵列芯片对新鲜组织和FFPE组织得到结果的相关系数仅0.54，相关性较差。目前大部分临床病例实验室所获得的肿瘤样本都是通过甲醛固定或石蜡包埋的方式储存，而很少通过低温冻存的方式保存。为了尝试利用这些丰富的肿瘤样本，研究者通过RT-PCR或DASL的方式进行表达量的分析，但这些方法并不能够进行精确的定量，且只能对少数的已知转录本进行定量，因此通过本方案可以从FFPE样本中获得更可靠的数据来源。由于乳腺癌是一种高度异质性的疾病，因此其种类及特性也多种多样，而传统的固有分型、21基因风险预测以及70基因预后等在临床应用上效果有限，通过二代测序获取的数据信息可以为乳腺癌的分子分型提供更为广阔和可靠的数据来源，可能为乳腺癌的精准分型及治疗提供更广阔的前景。
技术实现思路
有鉴于现有的关于乳腺癌的mRNA测序及定量手段主要是用新鲜组织进行的转录组测序，对于样本有较高的要求，无法适应临床诊断的需要。本专利技术的目的是提供一种不需要质量较好的mRNA，即便降解样本也可以得到较优结果的基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：一种基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒，其特征在于：包括两个盒体以及与所述盒体相连的翻盖式盒盖，两个盒体分别为A盒体和B盒体；所述的A盒体内放置第一纸托，所述第一纸托上设置20个试剂孔槽和/或离心管放置加样槽，所述20个试剂孔槽和/或离心管放置加样槽内分别放入1管Bio-B-TVN引物、1管dNTPmix、1管5xFirst-strandbuffer、1管0.1MDTT、1管RNaseinhibitor、1管SuperscriptⅢ逆转录酶、1管10xTaqDNApolymeraseBuffer、1管TaqDNApolymerase、1管RNaseH、1管Terminaltransferasebuffer、1管ddNTP、1管500mMEDTA溶液、1管100μMPrimer-A-Random引物溶液、2管EB、3管PhusionMasterMix、1管Primer-A引物、1管Primer-B引物；B盒体内放置第二纸托，所述第二纸托上设置有6个试剂孔槽，分别放入1瓶无核酸酶水、1瓶AmpureXP磁珠、1瓶DyanabeadsMyoneStreptavidinC1磁珠、1瓶0.1MNaOH、2瓶WashBuffer。所述Bio-B-TVN引物为含有19个oligoT的锚定引物及测序接头的逆转录引物序列。Primer-A的3’末端带有6碱基随机引物的illumina接头序列。Bio-B-TVN引物、dNTPmix、5xFirst-strandbuffer、DTT、RNaseinhibitor、SuperscriptⅢ逆转录酶的管盖带有蓝色垫片，所述的Terminaltransferasebuffer、ddNTPmix、terminaltransferase、500mMEDTA的管盖带有绿色垫片，所述的Primer-A-Random引物溶液、TaqDNApolymerase、10xTaqDNApolymeraseBuffer、RnaseH管盖带有红色垫片，所述的PhusionMasterMix2X、primer-A和PrimerB引物管盖带有黄色垫片，所述的EB、及无核酸酶水带有透明管盖；所述Ampurexp磁珠、DyanabeadsMyoneStreptavidinC1磁珠、NaOH及WashBuffer的管盖带有白色垫片。所述Bio-B-TVN引物如SEQIDNo.1所示；Primer-A-Random引物如SEQIDNo.2所示；Primer-A引物如SEQIDNo.3所示；Primer-B引物如SEQIDNo.4-6的任意一个序列所示。所述的乳腺癌分型检测建库试剂盒的具体组成为：相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：本专利技术所述试剂盒具有既可以进行新鲜组织的乳腺癌表达谱分型、又可进行乳腺癌FFPE样本的分子分型、分型准确性高，灵敏度高，稳定性强等特点；既能够满足检测灵敏度的要求，又能够节约大量资本，另外还具有操作简单等特点，不仅能带来可观经济效益，还能实现快速检测。附图说明以下附图形成本专利技术书的一部分，并且用于进一步说明本专利技术的某些方面。本专利技术可通过参考与本文提出的特定实施方案的详细描述结合的这些附图中的一个或多个来更好地理解。图1是本专利技术所述基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒A的结构示意图；图2是本专利技术所述基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒A的纸托的结构示意图；图3是本专利技术所述基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒B的结构示意图；图4是本专利技术所述基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒B的纸托的结构示意图；其中：1、A盒盒体；2、A盒盒盖；3、A盒盒纸托；4、B盒盒体；5、B盒盒盖；6、B盒纸托；11、Bio-B-TVN引物；12、dNTPmix；13、5xFirst-strandbuffer；14、DTT(0.1M)；15、RNaseinhibito本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒，其特征在于：包括两个盒体以及与所述盒体相连的翻盖式盒盖，两个盒体分别为A盒体和B盒体；所述的A盒体内放置第一纸托，所述第一纸托上设置20个试剂孔槽和/或离心管放置加样槽，所述20个试剂孔槽和/或离心管放置加样槽内分别放入1管Bio‑B‑TVN引物、1管dNTP mix、1管5xFirst‑strand buffer、1管0.1M DTT、1管RNase inhibitor、1管SuperscriptⅢ逆转录酶、1管10x TaqDNA polymerase Buffer、1管TaqDNA polymerase、1管RNase H、1管Terminal transferase buffer、1管ddNTP、1管500mM EDTA溶液、1管100μM Primer‑A‑Random引物溶液、2管EB、3管Phusion Master Mix、1管Primer‑A引物、1管Primer‑B引物；B盒体内放置第二纸托，所述第二纸托上设置有6个试剂孔槽，分别放入1瓶无核酸酶水、1瓶Ampure XP磁珠、1瓶DyanabeadsMyone Streptavidin C1磁珠、1瓶0.1M NaOH、2瓶Wash Buffer。...

【技术特征摘要】
1.一种基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒，其特征在于：包括两个盒体以及与所述盒体相连的翻盖式盒盖，两个盒体分别为A盒体和B盒体；所述的A盒体内放置第一纸托，所述第一纸托上设置20个试剂孔槽和/或离心管放置加样槽，所述20个试剂孔槽和/或离心管放置加样槽内分别放入1管Bio-B-TVN引物、1管dNTPmix、1管5xFirst-strandbuffer、1管0.1MDTT、1管RNaseinhibitor、1管SuperscriptⅢ逆转录酶、1管10xTaqDNApolymeraseBuffer、1管TaqDNApolymerase、1管RNaseH、1管Terminaltransferasebuffer、1管ddNTP、1管500mMEDTA溶液、1管100μMPrimer-A-Random引物溶液、2管EB、3管PhusionMasterMix、1管Primer-A引物、1管Primer-B引物；B盒体内放置第二纸托，所述第二纸托上设置有6个试剂孔槽，分别放入1瓶无核酸酶水、1瓶AmpureXP磁珠、1瓶DyanabeadsMyoneStreptavidinC1磁珠、1瓶0.1MNaOH、2瓶WashBuffer。2.根据权利要求1所述的一种基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒，其特征在于：所述Bio-B-TVN引物为含有19个oligoT的锚定引物及测序接头的逆转录引物序列。3.根据权利要求1所述的一种基于illumina平台的乳腺癌分型检测建库试剂盒，其特征在于：Primer-A的3...

【专利技术属性】
技术研发人员：张吉保，张明航，岳伟，
申请(专利权)人：江苏苏博生物医学科技南京有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32