一种屋尘螨过敏原Der p 22基因重组蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种屋尘螨过敏原Der p 22基因重组蛋白及其应用。本发明专利技术屋尘螨过敏原Der p 22基因如SEQ ID NO：2所示，该重组蛋白由屋尘螨过敏原Der p 22基因经表达、纯化后得到，序列如SEQ ID NO：1所示。该重组蛋白用于制备精准医学检测屋尘螨引起的过敏性疾病的诊断试剂或生物制品方面。本发明专利技术首次发现屋尘螨Der p 22基因序列全长，并通过基因克隆、表达、纯化获得其重组蛋白，该重组蛋白用于Western blotting实验精准医学检测16例屋尘螨引起的过敏性哮喘患儿，阳性率93.75％，而对照组无阳性。

A recombinant protein of Der P 22 gene of house dust mite allergen and its application

The invention discloses a house dust mite allergen Der P 22 gene recombinant protein and its application. The Der P 22 gene of house dust mite allergen is shown in SEQ ID NO:2. The recombinant protein is expressed and purified by Der P 22 gene of house dust mite allergen, and the sequence is shown in SEQ ID NO:1. The recombinant protein is used to prepare diagnostic reagents or biological products for accurate medical detection of allergic diseases caused by house dust mites. The full length of Der P 22 gene sequence of house dust mite was found for the first time, and its recombinant protein was obtained by gene cloning, expression and purification. The recombinant protein was used to accurately detect 16 children with allergic asthma caused by house dust mite in Western blotting experiment, and the positive rate was 93.75%, while the control group was not.

【技术实现步骤摘要】
一种屋尘螨过敏原Derp22基因重组蛋白及其应用
本专利技术属于变态反应学领域，尤其涉及一种屋尘螨过敏原Derp22基因重组蛋白及其在制备精准医学检测屋尘螨引起的过敏性疾病的诊断试剂或生物制品方面的应用。
技术介绍
尘螨(housedustmites)指孳生于居室地毯、床、纺织品和家具等处积尘中的螨类，文献报道多达100种以上。世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)和国际免疫学会联盟(InternationalUnionofImmunologicalSocieties，IUIS)授权的过敏原命名委员会网站(http://www.allergen.org/)已公布了粗脚粉螨(Acarussiro)、热带无爪螨(Blomiatropicalis)、粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae)、微角尘螨(Dermatophagoidesmicroceras)、屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus)、梅氏嗜霉螨(Euroglyphusmaynei)、家食甜螨(Glycyphagusdomesticus)、害嗜鳞螨(Lepidoglyphusdestructor)、腐食酪螨(Tyrophagusputrescentiae)。因此，引起过敏反应的螨种很多。2006年2月至2007年3月，采用皮肤点刺试验对我国西部、东部、西南和南部沿海17座城市6304例哮喘或/和鼻炎门诊患者的大规模调查表明，粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae)阳性率为59.0％、屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus)阳性率为57.6％。说明粉尘螨和屋尘螨是中国大陆重要的致敏螨种，排第1、2位。每种螨均可以产生上千种蛋白，有的是过敏原，有的不是。能够引起尘螨过敏性疾病患者机体内产生特异性IgE抗体、并与过敏性疾病患者血清在体内发生结合的螨虫成份称为过敏原组分(Groups)。迄今，临床诊断均采用粉尘螨和/或屋尘螨粗提物为抗原建立免疫学检验方法。由于螨体粗提物中含有多种过敏原组分，同一组分在不同批次产品中含量不一致，很难实现产品的标准化。因此，了解每种螨的过敏原组分，制备过敏原单组分生物制品，基于单组分建立检验方法，精准检测过敏性疾病患者是因某种组分或是某些组分致敏，为临床制订精准脱敏治疗方案提供依据。因此，系统地鉴定、表征屋尘螨和粉尘螨过敏原组分，对这两种螨的临床应用具有重要的价值。国际过敏原命名委员会已经命名了粉尘螨过敏原第22组分Derf22，但是没有公布屋尘螨第22组分Derp22及其编码基因。粉尘螨过敏原却无法替代屋尘螨过敏原，这是因为：即便只是相差1个氨基酸也会引起临床误诊，不同物种之间具有相似序列的蛋白质更是如此。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种屋尘螨过敏原第22组分Derp22基因重组蛋白，用于精准医学检测屋尘螨引起的过敏性疾病的诊断试剂或生物制品方面的应用，旨在解决现有尘螨引起的过敏性疾病无法得到精准医学检测的问题。。本专利技术是这样实现的，一种屋尘螨过敏原Derp22基因重组蛋白，该蛋白序列如SEQIDNO：1所示。本专利技术进一步公开了上述屋尘螨过敏原Derp22基因重组蛋白在精准医学检测屋尘螨引起过敏性疾病的诊断试剂或生物制品方面的应用。优选地，所述诊断试剂或生物制品为屋尘螨过敏原Derp22基因经表达、纯化后的重组蛋白，或者所述诊断试剂或生物制品包括屋尘螨过敏原Derp22基因经表达、纯化后的重组蛋白。本专利技术提供一种屋尘螨过敏原Derp22基因重组蛋白及其应用。本专利技术通过转录组测序后，进行序列比对，得到一个片段与粉尘螨第22组分Derf22高度同源的序列，将该片段扩出来，然后通过cDNA末端快速扩增技术(rapidamplificationofcDNAends，RACE)获得编码基因全长，然后进行基因克隆表达纯化，将纯化的蛋白质与屋尘螨过敏患者血清进行Westernblotting，发现该基因编码的蛋白质具有高度的活性，并最终确定该序列为屋尘螨过敏原第22组分编码基因，如SEQIDNO：2所示，通过该基因克隆到Derp22基因重组蛋白，如SEQIDNO：1所示。相比现有技术的缺点和不足，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术首次发现屋尘螨Derp22基因序列全长，并通过基因克隆、表达、纯化获得其重组蛋白，该重组蛋白用于Westernblotting实验精准医学检测16例屋尘螨引起的过敏性哮喘患儿，阳性率93.75％，而对照组无阳性。附图说明图1是屋尘螨TotalRNA电泳图(1％琼脂糖)；其中，泳道M1为DL2,000DNAMarker，泳道1为CTG575TotalRNA；图2是Derp22全长基因克隆PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图；其中，泳道M1为DL2,000DNAMarker，泳道1为CTG0578的PCR产物；图3是质粒pET28(a)经BamHI/NotI双酶切电泳图；其中，泳道M2为λ-HindⅢdigest(CodeNo.3403)，泳道1为pET28(a)质粒，泳道2为pET28(a)-BamHI/NotI；图4是Derp22活性部分PCR扩增结果；其中，泳道M1为DL2,000DNAMarker，泳道1为PCR产物；图5是空质粒pET28a经BamHI/NotI双酶切的电泳图；其中，泳道M1为λ-HindIIIdigest，泳道1为pET28a-BamHI/NotI，泳道M2为DL2,000DNAMarker；图6是SDS-PAGE鉴定pET-28a(+)-Derp22活性部位在大肠杆菌中表达情况；其中，泳道M1为ProteinMWmarker(Broad)，泳道1为pET-28a(+)全细胞，泳道2为pET-28a(+)上清，泳道3为pET-28a(+)沉淀，泳道4为质粒pET-28a(+)-Derp22转化大肠杆菌后诱导表达的全细胞，泳道5为为质粒pET-28a(+)-Derp22转化大肠杆菌后诱导表达的上清，泳道6为为质粒pET-28a(+)-Derp22转化大肠杆菌后诱导表达的沉淀；图7是SDS-PAGE鉴定pET-28a(+)-Derp22活性部位在大肠杆菌中大量表达情况；其中，泳道M为ProteinMWmarker(Broad)，泳道1为pET28a(+)全细胞，泳道2为pET28a(+)上清，泳道3为pET28a(+)沉淀，泳道4为质粒pET-28a(+)-Derp22转化大肠杆菌后诱导表达的全细胞，泳道5为质粒pET-28a(+)-Derp22转化大肠杆菌后诱导表达的上清，泳道6为质粒pET-28a(+)-Derp22转化大肠杆菌后诱导表达的沉淀，泳道7为BSA(200ng)，泳道8为BSA(500ng)，泳道9为BSA(1000ng)，泳道10为BSA(1500ng)，泳道11为BSA(2000ng)；图8是WesternBlotting鉴定重组蛋白rDerp22；其中，Penta-HisAntibody为一抗，HRP-RabbitAnti-MouseIgG为二抗；泳道M1为PrecisionPlusProteinStandards，泳道1为2μL重组蛋白上样，泳道本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种屋尘螨过敏原Derp 22基因重组蛋白，其特征在于，该蛋白序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种屋尘螨过敏原Derp22基因重组蛋白，其特征在于，该蛋白序列如SEQIDNO：1所示。2.权利要求1所述的屋尘螨过敏原Derp22基因重组蛋白在制备精准医学检测屋尘螨引起的过敏性疾病的诊断试剂或生物制品方...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔玉宝，郁志伟，钱俊，杜晓燕，陈越新，吴国荣，周鹰，
申请(专利权)人：无锡市人民医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32