一种具有复合生物活性的抗菌肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种具有复合生物活性的抗菌肽及其制备方法与应用，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术的抗菌肽来源于拟穴青蟹，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，该抗菌肽的制备包括如下步骤：提取拟穴青蟹的总RNA作为模板，进行反转录获得cDNA；以cDNA作为模板进行PCR扩增获得含抗菌肽编码序列的核苷酸片段，扩增产物与表达载体通过酶切、连接、转化，构建可表达重组抗菌肽的大肠杆菌工程菌，大肠杆菌工程菌通过诱导培养，表达出重组抗菌肽。本发明专利技术的抗菌肽具有良好的抑菌、抗病毒活性，可用于制备抑菌剂或抗病毒剂，有良好的应用前景。

An Antimicrobial Peptide with Complex Biological Activity and Its Preparation Method and Application

The invention discloses an antimicrobial peptide with compound biological activity, a preparation method and application thereof, belonging to the technical field of molecular biology. The antimicrobial peptide of the present invention originates from Pointed Green Crab, and its amino acid sequence is shown in SEQ ID NO.1 and coding sequence is shown in SEQ ID NO.2. The preparation of the antimicrobial peptide includes the following steps: extracting the total RNA of Pointed Green Crab as a template, reverse transcription to obtain the cDNA; using the DNA as a template, PCR amplification to obtain the nucleotide fragment containing the coding sequence of the antimicrobial peptide, amplification products and expression vectors. E. coli engineering bacteria expressing recombinant antimicrobial peptides were constructed by digestion, ligation and transformation. E. coli engineering bacteria expressed recombinant antimicrobial peptides through induction culture. The antimicrobial peptide of the invention has good antimicrobial and antiviral activities, and can be used to prepare antimicrobial or antiviral agents, and has good application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种具有复合生物活性的抗菌肽及其制备方法与应用
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种拟穴青蟹来源具有复合生物活性的抗菌肽及其制备方法与应用。
技术介绍
在先天免疫的基础上，脊椎动物进化出了可以不断丰富的获得性免疫系统。这种免疫方式的出现，使得生物体在进化过程中具有了更广泛的免疫形式，同时从被动防御型的免疫方式转化成为了主动的免疫方式。然而，对于无脊椎动物来说，先天免疫系统是它们防御细菌、病毒、寄生虫等病原微生物侵染的唯一免疫防御形式，这个系统主要包括细胞免疫与体液免疫两种类型。细胞免疫主要涉及到结节的形成、包囊作用、细胞吞噬作用三种类型。体液免疫主要包括抗菌肽的形成与黑化作用。其中，抗菌肽分子被认为是一类重要的能够针对细菌和真菌的入侵，发挥免疫效应的蛋白质分子。目前，发现的抗菌肽分子种类较多，其中有一类分子的结构比较典型，在其氨基酸序列中存在着一个乳清酸性蛋白结构域(WAPdomain)，这个结构域的特点是存在着由8个半胱氨酸残基形成的4对二硫键。根据分子中存在的WAP结构域的个数，人为地将其分为具有单个WAP结构域的抗菌肽分子(SWD)和具有双WAP结构域的抗菌肽分子(D本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗菌肽，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽，其特征在于：氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.编码权利要求1所述的抗菌肽的核苷酸，其特征在于：序列如SEQIDNO.2所示。3.权利要求1所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)以提取的拟穴青蟹总RNA作为模板，以5’-CTGGGAAGAAATGACATG-3’作为反转录引物进行反转录PCR得到cDNA；(2)以cDNA作为模板进行PCR扩增获得含权利要求1所述抗菌肽编码序列的核苷酸片段，PCR扩增引物如下：F：5′-NnGGGAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜志强，沈秀丽，李新苍，王凯，
申请(专利权)人：内蒙古科技大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15