多奈哌齐－BHT杂合体、其制备方法及其用于治疗阿尔茨海默症技术

本发明专利技术涉及药物化学领域，具体涉及一类多奈哌齐‑BHT杂合体，这类化合物作为多功能制乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂及单胺氧化酶B(MAO‑B)抑制剂，且具有较好的体外抗氧化作用，对于过氧化氢(H2O2)诱导PC12神经细胞氧化损伤和细菌脂多糖(LPS)刺激BV‑2炎症损伤，有较好的神经保护作用，以及在动物实验上证明有较好的改善认知功能的作用，可考虑用作治疗阿尔茨海默症的候选药物。最优选的化合物结构如下：

Donepezil-BHT heterozygote, its preparation method and its application in the treatment of Alzheimer's disease

The invention relates to the field of pharmacochemistry, in particular to a class of donepezil-BHT heterozygotes, which act as multifunctional acetylcholinesterase (AChE) inhibitors and monoamine oxidase B (MAO_B) inhibitors, and have good antioxidant effect in vitro, and have good effects on oxidative damage of PC12 nerve cells induced by hydrogen peroxide (H2O2) and inflammation injury stimulated by bacterial lipopolysaccharide (LPS). Neuroprotective effects, as well as better cognitive improvement in animal experiments, can be considered as a candidate drug for the treatment of Alzheimer's disease. The optimum structure of the compounds is as follows:

【技术实现步骤摘要】
多奈哌齐-BHT杂合体、其制备方法及其用于治疗阿尔茨海默症
本专利技术涉及药物化学领域，具体涉及一类多奈哌齐-BHT杂合体，这类化合物作为多功能制乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂及单胺氧化酶B(MAO-B)抑制剂，且具有较好的体外抗氧化作用，对于过氧化氢(H2O2)诱导PC12神经细胞氧化损伤和细菌脂多糖(LPS)刺激BV-2炎症损伤，有较好的的神经保护作用，以及在动物实验上证明具有较好的改善认知功能的作用，可考虑用作治疗阿尔茨海默症的候选药物。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)又称为老年性痴呆，是一种在老年人中常见的神经退行性疾病。AD发病机制复杂，目前为止对阿尔兹海默病的病理学机制尚不完全清楚，其成因除了与脑内胆碱水平的降低相关外，也与氧化应激、神经炎症的发生、淀粉样蛋白(Aβ)的聚集、金属离子代谢的紊乱以及钙平衡的失调等因素密切相关。其中，胆碱能假说(cholinergichypothesis)，即胆碱能系统的改变与阿尔茨海默症的认知功能的损害程度密切相关。基于该理论，人们对乙酰胆碱受体的激动剂和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase，AChE)的抑制剂展开了大量研究。另外，针对脑内氧化应激的问题，主要解决办法是开发抗氧化剂，以及通过抑制单胺氧化酶来减少氧化应激对神经细胞的损伤并发挥神经保护作用。随着阿尔茨海默症致病机理的不断阐明，我们发现阿尔茨海默症的发生和发展是生物体内复杂的调控网络和调控因子的多重作用的结果，涉及多基因之间的关联。针对单一靶点的药物往往只能调控其中的某一个生理途径，而不能从根本上抑制阿尔茨海默症的病理进程。因此，寻找针对多个靶标或具有多方面治疗作用的药物成了阿尔茨海默症治疗药物研发的新趋势。多奈哌齐作为已经被FDA认可上市的治疗中度阿尔茨海默症患者的乙酰胆碱酯酶抑制剂，其明显的胆碱酯酶抑制活性以及无明显毒副作用的优势得到广大研究者的关注，具有良好的开发应用前景。2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)作为欧美常用的一种食品添加剂，因其无毒且具有较好的抗氧化活性而得到普遍关注，并且近年发现，其衍生物具有良好的抗炎等活性。因此，本专利技术设计并合成了一系列多奈哌齐-BHT杂合体，将其作为多功能抗阿尔茨海默症制剂。这类化合物作为多功能制乙酰胆碱酯酶抑制剂及单胺氧化酶B(MAO-B)抑制剂，且具有较好的体外抗氧化作用，对于过氧化氢(H2O2)诱导PC12神经细胞氧化损伤和细菌脂多糖(LPS)刺激BV-2炎症损伤，有较好的的神经保护作用，以及在动物实验上有较好的改善认知功能的作用，因此开发此类具有多奈哌齐-BHT骈合的新型多功能制剂不仅符合抗阿尔茨海默病的要求，而且具有良好的市场前景。
技术实现思路
本专利技术公开了一类多奈哌齐-BHT杂合体。药效学实验证明，本专利技术的化合物可作为多功能制剂，用于治疗阿尔茨海默症的治疗。本专利技术的化合物结构如下所示：其中n＝0，1，2；R分别为CH3，OCH3，NO2，CN，卤原子等。最优选的化合物结构如下：本专利技术化合物的药学上可接受的盐是通式化合物的盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、萘磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、乙酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、水杨酸盐、苯基乙酸盐、杏仁酸盐、碱性金属阳离子盐、碱土金属阳离子盐或铵阳离子盐。最优选为碱性金属阳离子盐。本专利技术实例化合物的制备方法如下：1)本专利技术实例化合物3a-i的制备方法如下：2)本专利技术实例化合物3j-1的制备方法如下：3)本专利技术实例化合物7a-m的制备方法如下：R的定义同前。本专利技术化合物均可以用上述或类似上述的制备方法制备得到，根据链长的变化、取代基的不同或取代基位置的不同选用相应的原料即可。反应基本过程：本专利技术多奈哌齐-BHT杂合体的制备方法包括酸胺缩合反应、取代反应、脱Boc保护基过程以及后处理各单元过程。化合物3a-i的合成优选：在单口烧瓶中加入不同链长的BHT类的酸(1a-c)(1.1eq)，用适量无水二氯甲烷溶解，再加入缩合剂1-羟基苯并三唑(HOBT)(1.1eq)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)(1.1eq)，滴加三乙胺(3eq)，冰浴下搅拌反应1小时后，滴加胺(1eq)的二氯甲烷溶液，反应过夜，监测反应至胺完，饱和碳酸氢钠洗涤3次，饱和氯化钠洗三次至HOBT洗干净后，有机相合并拌样过硅胶柱，二氯甲烷/甲醇积体系即得目标产物。化合物3j-1的合成优选：2-溴-3’，5’-二-叔丁基-4’-羟基苯乙酮(1d)(2eq)与不同胺(2a-c)(1eq)在碳酸钾(K2CO3)和碘化钾(KI)的催化剂下，以乙腈作溶剂反应过夜，监测反应，通过过硅胶柱纯化目标产物。化合物7a-m的合成优选：氨乙基哌啶Boc与不同溴苄在乙醇做溶剂，三乙胺做缚酸剂的条件下反应产生叔丁氧羰基氨乙基苄基哌啶，进一步在三氟乙酸作用下脱去叔丁氧羰基(Boc保护基)，最后进行酸胺缩合，方法同上。下面是本专利技术化合物的部分药理学实验及数据：一、胆碱酯酶活性：实验方法：乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BuChE)抑制活性测试方法为Ellman法。将化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，依次用缓冲液稀释至所需浓度，控制所配置溶液中的DMSO含量低于1％。往96空白中依次加入，160μl的1.5mM的5，5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)，50μl的AChE(0.22U/mL，用缓冲液B制得)和10μl的不同浓度抑制剂。37℃下孵化6分钟，然后快速加入30μl的碘化乙酰胆碱(15mM)。在405nm下测定0，60，120和180秒的吸光度变化。丁酰胆碱酯酶的测定方法同乙酰胆碱酯酶类似，将所用的乙酰胆碱酯酶换为丁酰胆碱酯酶(0.12U/mL)同时替换底物碘化乙酰胆碱为硫代碘化丁酰胆碱(15mM)。抑制率的计算为：[1-(实验组吸光度变化/空白组吸光度变化)]*100％。选择化合物的五至七个浓度测定酶的抑制率(0.001-100μM)并以该化合物摩尔浓度的负对数与酶抑制率进行线性回归，求得50％抑制时的摩尔浓度即为该化合物的IC50值。每个实验重复三次，实验结果表达为平均值±SEM。表1本专利技术化合物胆碱酯酶抑制活性a)IC50：抑制率达到50％时的化合物浓度；b)选择性系数＝人源丁酰胆碱酯酶的IC50/人源的乙酰胆碱酯酶IC50从表1可知，化合物3a-i整体上对乙酰胆碱有一定活性，但对丁酰胆碱活性较差，化合物3i的抑制活性最好(IC50＝0.53μM)。构效关系表明，乙酰胆碱酯酶的活性与链长变化有着密切关系，链长越长活性越好。在3i的基础上进一步改造，以下是其进一步修饰物的活性结果。化合物7a-m的乙酰胆碱活性与3i相当，基本在0-1μM之间。且化合物7d抑制人源乙酰胆碱活性显著，达到IC50＝0.075μM，对丁酰酯酶的抑制作用较差，选择性较好。此结果与多奈哌齐阳性药的效果基本相当，表明进一步改造的合理性，也说明了本专利技术所公开的化合物对乙酰胆碱酯酶具有较好的抑制作用。二、乙酰胆碱酯的动力学研究实验方法：用Ellman法对化合物3i和7d进行酶动力学研究。将化合物的三个不同浓度分别作动力学研究。往本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通式如下的多奈哌齐‑BHT杂合物或其药学上可接受的盐：

【技术特征摘要】
1.一种通式如下的多奈哌齐-BHT杂合物或其药学上可接受的盐：其中n＝0，1，2，R分别为CH3，OCH3，NO2，CN，卤原子等。2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中最优化合物是：3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中药学上可接受的盐是通式化合物的盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、萘磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、乙酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、水杨酸盐、苯基乙酸盐、杏仁酸盐、碱性金属阳离子盐、碱土金属阳离子盐或铵阳离子盐。4.一种药物组合物，含有权利要求1的通式的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。5.制备权利要求一种权利要求式(1)化合物的制备方法，该方法包括：1)不同链长的BHT类的酸与不同链长的苄基哌啶胺在缩...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔令义，王小兵，蔡佩，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32