胶原靶向血管内皮生长因子在陈旧性心肌梗死治疗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了胶原靶向血管内皮生长因子在陈旧性心肌梗死治疗中的应用。本发明专利技术所提供的胶原靶向血管内皮生长因子在陈旧性心肌梗死治疗中的应用中，胶原靶向血管内皮生长因子为在血管内皮生长因子的N端或/和C端融合胶原结合区得到的融合蛋白质，血管内皮生长因子为氨基酸序列为SEQ ID No.1的第1‑166位所示的蛋白质；胶原结合区为氨基酸序列为SEQ ID No.1的第178‑184位所示的蛋白质。实验证明，本发明专利技术的胶原靶向血管内皮生长因子具有结合细胞外基质的能力，能够较为特异地与缺血心肌细胞外基质结合，提高心肌缺血损伤的修复效果，还可避免VEGF高剂量用药的副作用，能用于治疗陈旧性心肌梗死。

Application of collagen-targeted vascular endothelial growth factor in the treatment of old myocardial infarction

The invention discloses the application of collagen targeting vascular endothelial growth factor in the treatment of old myocardial infarction. In the application of the collagen-targeted vascular endothelial growth factor in the treatment of old myocardial infarction, the collagen-targeted vascular endothelial growth factor is a fusion protein obtained in the N-terminal or/or C-terminal fusion collagen-binding region of the vascular endothelial growth factor, and the vascular endothelial growth factor is a protein shown in the 1st to 166th position of the amino acid sequence SEQ ID No.1. It is the protein shown at 178 184 of the amino acid sequence SEQ ID No.1. Experiments show that the collagen targeting vascular endothelial growth factor of the present invention has the ability to bind to extracellular matrix, can specifically bind to the extracellular matrix of ischemic myocardium, improve the repair effect of myocardial ischemic injury, and can avoid side effects of high-dose medication of vascular endothelial growth factor, and can be used to treat old myocardial infarction.

【技术实现步骤摘要】
胶原靶向血管内皮生长因子在陈旧性心肌梗死治疗中的应用
本专利技术涉及生物
中，胶原靶向血管内皮生长因子在陈旧性心肌梗死治疗中的应用。
技术介绍
缺血性心脏病及其继发的心肌损伤严重威胁着人类健康，其根本原因是由于心肌组织血供不足而引发心肌细胞坏死及心肌细胞外基质降解。对于急性心肌梗死的治疗而言，通过药物或手术及时改善心肌的血流灌注，恢复局部心肌的功能是其治疗的关键。然而，并非所有心梗患者能够在急性期得到有效治疗，引发潜在的心肌细胞死亡及心肌胞外基质降解，从而导致陈旧性心肌梗死。尽管经皮冠状动脉腔内成形术(VTCA)和冠状动脉旁路移植术(CABG)可通过增加血供部分恢复陈旧性心梗患者的心肌功能，但难以补偿坏死的心肌细胞及降解的心肌胞外基质，有文献报道约一半以上的心脏移植患者来源于陈旧性心梗患者。因此，新的治疗药物及治疗措施对陈旧性心肌梗死的治疗来说十分必要。在缺血性心脏病的治疗中，增加血供不仅能减少心肌细胞的坏死，并且能通过加速机体自我修复而保护心肌，因此，如何恢复缺血区的血供是治疗的关键所在。近年来，通过促进血管新生，在已经阻塞或狭窄的动脉周围重建旁路循环从而增加缺血区的供血，成为一种备受关注的新手段。血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是血管内皮细胞的特异性丝裂原，可有效促进血管内皮细胞的增殖、迁移和存活。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何治疗心肌梗死，尤其是陈旧性心肌梗死。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了胶原靶向血管内皮生长因子在制备治疗和/或预防心肌梗死产品中的应用。本专利技术所提供的胶原靶向血管内皮生长因子在制备治疗和/或预防心肌梗死产品中的应用中，所述胶原靶向血管内皮生长因子名称是CT-VEGF，为在血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)的N端或/和C端融合胶原结合区得到的融合蛋白质。上述应用中，所述血管内皮生长因子可为下述A1)或A2)的蛋白质：A1)氨基酸序列为SEQIDNo.1的第1-166位氨基酸所示的蛋白质；A2)在SEQIDNo.1的第1-166位的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有相同功能的由A1)衍生的蛋白质。上述应用中，所述胶原结合区可为下述D1)或D2)的蛋白质：D1)氨基酸序列为SEQIDNo.1的第178-184位氨基酸所示的蛋白质；D2)在SEQIDNo.1的第178-184位的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有相同功能的由D1)衍生的蛋白质。上述应用中，CT-VEGF可为下述E1)或E2)或E3)或E4)：E1)氨基酸序列为SEQIDNo.1所示的蛋白质；E2)氨基酸序列为SEQIDNo.1的第1-184位氨基酸所示的蛋白质；E3)在SEQIDNo.1或SEQIDNo.1的第1-184位的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有相同功能的由E1)衍生的蛋白质；E4)在E1)或E2)或E3)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。为了使E1)或E2)中的蛋白质便于纯化，可在由序列表中SEQIDNo.1或SEQIDNo.1的第1-184位所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。表1、标签的序列标签残基序列Poly-Arg5-6(通常为5个)RRRRRPoly-His2-10(通常为6个)HHHHHHFLAG8DYKDDDDKStrep-tagII8WSHPQFEKc-myc10EQKLISEEDL上述E3)中的CT-VEGF，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。上述E3)中的CT-VEGF可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述E3)中的CT-VEGF的编码基因可通过将SEQIDNo.2或SEQIDNo.2的第1-552位所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了与CT-VEGF相关的生物材料在制备治疗和/或预防心肌梗死产品中的应用。本专利技术所提供的与CT-VEGF相关的生物材料在制备治疗和/或预防心肌梗死产品中的应用中，所述生物材料为下述B1)至B12)中的任一种：B1)编码CT-VEGF的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；B9)含有B1)所述核酸分子的转基因细胞系；B10)含有B2)所述表达盒的转基因细胞系；B11)含有B3)所述重组载体的转基因细胞系；B12)含有B4)所述重组载体的转基因细胞系。上述应用中，B1)所述核酸分子可为如下b1)或b2)或b3)或b4)：b1)编码序列是序列表中SEQIDNo.2的cDNA分子或DNA分子；b2)编码序列是序列表中SEQIDNo.2的第1-552位的cDNA分子或DNA分子；b3)与b1)或b2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码CT-VEGF的cDNA分子或基因组DNA分子；b4)在严格条件下与b1)或b2)限定的核苷酸序列杂交，且编码CT-VEGF的cDNA分子或基因组DNA分子。其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。其中，SEQIDNo.2所示的DNA分子编码SEQIDNo.1所示的蛋白质。本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本专利技术的编码CT-VEGF的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本专利技术分离得到的CT-VEGF的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码CT-VEGF且具有CT-VEGF功能，均是衍生于本专利技术的核苷酸序列并且等同于本专利技术的序列。这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本专利技术的编码SEQIDNo.1或SEQIDNo.1的第1-184位所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。上述应用中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。上述应用中，B2)所述的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.胶原靶向血管内皮生长因子在制备治疗和/或预防心肌梗死产品中的应用，所述胶原靶向血管内皮生长因子为在血管内皮生长因子的N端或/和C端融合胶原结合区得到的融合蛋白质。

【技术特征摘要】
1.胶原靶向血管内皮生长因子在制备治疗和/或预防心肌梗死产品中的应用，所述胶原靶向血管内皮生长因子为在血管内皮生长因子的N端或/和C端融合胶原结合区得到的融合蛋白质。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述血管内皮生长因子为下述A1)或A2)的蛋白质：A1)氨基酸序列为SEQIDNo.1的第1-166位氨基酸所示的蛋白质；A2)在SEQIDNo.1的第1-166位的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有相同功能的由A1)衍生的蛋白质；和/或，所述胶原结合区为下述D1)或D2)的蛋白质：D1)氨基酸序列为SEQIDNo.1的第178-184位氨基酸所示的蛋白质；D2)在SEQIDNo.1的第178-184位的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有相同功能的由D1)衍生的蛋白质。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述胶原靶向血管内皮生长因子为下述E1)或E2)或E3)或E4)：E1)氨基酸序列为SEQIDNo.1所示的蛋白质；E2)氨基酸序列为SEQIDNo.1的第1-184位氨基酸所示的蛋白质；E3)在SEQIDNo.1或SEQIDNo.1的第1-184位的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有相同功能的由E1)衍生的蛋白质；E4)在E1)或E2)或E3)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。4.与权利要求1-3中任一所述胶原靶向血管内皮生长因子相关的生物材料在制备治疗和/或预防心肌梗死产品中的应用；所述生物材料为下述B1)至B12)中的任一种：B1)编码权利要求1中所述胶原靶向血管内皮生长因子的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；B9)含有B1)所述核酸分子的转基因细胞系；B10)含有B2)所述表达盒的转基因细胞系；B11)含有B3)所述重组载体的转基因细胞系；B12)含有B4)所述重组载体的转基因细胞系。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：B1)所述核酸分子为如下b1)或b2)或b3)或b4)：b1)编码序列是序列表中SEQIDNo.2的cDNA分子或DNA分子；b2)编码序列是序列表中SEQIDNo.2的第1-552位的cDNA分子或DNA分子；b3)与b1)或b2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1-3中任一所述胶原靶向血管内皮生长因子的cDNA分子或基因组DNA分子；b4)在严格条件下与b1)或b2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1-3中任一所述胶原靶向血管内皮生长因子的c...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴建武，陈冰，施春英，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11