【技术实现步骤摘要】
一种血小板-白细胞混合膜包被免疫磁珠及其制备方法与应用
本专利技术属于生物医药
，主要涉及一种血小板-白细胞混合膜包被免疫磁珠及其制备方法与应用。
技术介绍
循环肿瘤细胞(CTC)是由实体瘤进入循环系统的恶性细胞，在癌症早期检测，监测和预后方面已被证明是重要的。迄今为止，已经开发了各种平台来选择性地从循环中分离CTC，包括免疫磁珠(IMBs)，抗体-共轭纳米结构以及基于其物理特性的一些方法。其中，使用磁珠(MBs)作为分离介质的IMBs方法和MBs上特异性结合CTC的抗体是最常用的方法。由于外周血中循环肿瘤细胞的数量极其稀少，故捕获效率及纯度一直是限制循环肿瘤细胞研究的重要因素，目前大多数方法无法同时达到高效率及高纯度的捕获与检测。CellSearch系统是目前美国食品和药品管理局(FDA)唯一批准的检测循环肿瘤细胞的方法，虽然能实现捕获与检测，但该系统在加标血液样品中的细胞回收率只达到约40％，并且每毫升样品仍含有1000-3000个白细胞(WBC)，导致纯度低于0.5％，且价格昂贵。因此，急需制备即能够有效增强IMBs与CTCs结合，同时亦减少IMBs与...
【技术保护点】
1.一种用于分离循环肿瘤细胞的血小板‑白细胞混合膜包被的免疫磁珠HM‑IMBs，其特征在于，所述免疫磁珠为核‑壳结构，包含磁珠、血小板‑白细胞杂交膜HMs、HMs包被的磁珠上偶联有用于特异性识别与捕获循环肿瘤细胞的上皮细胞特异性抗体。
【技术特征摘要】
1.一种用于分离循环肿瘤细胞的血小板-白细胞混合膜包被的免疫磁珠HM-IMBs，其特征在于，所述免疫磁珠为核-壳结构，包含磁珠、血小板-白细胞杂交膜HMs、HMs包被的磁珠上偶联有用于特异性识别与捕获循环肿瘤细胞的上皮细胞特异性抗体。2.根据权利要求1所述的免疫磁珠HM-IMBs，其特征在于，所述磁珠，是具有超顺磁性的磁性微球，含有聚苯乙烯，Fe3O4，SiO2，脲醛树脂，γ-Fe2O3中的一种或多种，直径为50nm～10μm。3.根据权利要求1所述的免疫磁珠HM-IMBs，其特征在于，所述偶联是指通过共价偶联、疏水作用或者分子间作用力连接在一起。4.根据权利要求1所述的免疫磁珠HM-IMBs，其特征在于，所述上皮细胞特异性抗体，包括针对循环肿瘤细胞表面特异性抗原的多克隆抗体、单克隆抗体或重组抗体，以及核酸适配体的任意一种，优选为抗EpCAM抗体。5.一种如权利要求1-4任一项所述的用于分离循环肿瘤细胞的血小板-白细胞混合膜包被的免疫磁珠HM-IMBs的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：1)制备血小板(PLT)-白细胞(WBC)杂交膜HMs：A.制备PM-囊泡；B.制备WM-囊泡；C.HMs囊泡的制备：将得到的PM-囊泡和WM-囊泡按照1：1的质量比进行混合，然后在37℃下搅拌10分钟，混合均匀；再用混有蛋白酶抑制剂片剂的PBS重复三次洗涤后，将沉淀的膜悬浮于PBS中，使用浴超声波仪以53kHz的频率和100W的功率在封盖的玻璃小瓶中超声处理5分钟，然后在迷你挤推机上通过400和200nm聚碳酸酯多孔膜依次挤出；混有蛋白酶抑制剂片剂的PBS的配制：一片蛋白酶抑制剂片剂溶于10mL的PBS中；2)将HMs囊泡涂布到磁珠上获得HM-MBs：将1mL含有50μgMBs的PBS与从1mL血中分离得到的HMs囊泡混合；随后将混合物在迷你挤推机上通过200nm聚碳酸酯多孔膜依次挤出11次，然后以1,000g离心以除去多余的HMs囊泡；最后，将得到的HM-MBs在4℃下置于PBS中过夜以供进一步使用；3)将循环肿瘤细胞的上皮细胞特异性抗体缀合到HM-MBs得到HM-IMBs。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤1)A.PM-囊泡的制备：将10mL人全血以100×g离心20分钟，无制动；之后，将上清液以800×g离心20分钟，获得沉淀为PLT，用PBS洗涤PLT；将血小板悬浮液在-80℃下冷冻，在室温下解冻，在4000×g下离心3分钟使其沉淀，再用混有蛋白酶抑制剂片剂的PBS重复三次洗涤，然后将沉淀的膜悬浮于PBS中，使用浴超声波仪以53kHz的频率和100W的功率在封盖的玻璃小瓶中超声处理5分钟，...
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