一种lncRNA在预防或治疗高血压中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种长链非编码RNA，所述其核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，将其命名为AK098656。本发明专利技术还公开了所述lncRNA在制备预防、诊断或治疗高血压产品中的应用。进一步的，本发明专利技术还提供了一种AK098656抑制剂，所述抑制剂在制备预防或治疗高血压的药物组合物中的应用。本发明专利技术首次发现一种人类特有的在血管平滑肌细胞中优势表达的AK098656参与高血压的发生；本发明专利技术发现AK098656可以作为预防或治疗高血压提供新的分子靶点，指导相关药物的筛选和研发。

【技术实现步骤摘要】
一种lncRNA在预防或治疗高血压中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种lncRNA在预防或治疗高血压中的应用。
技术介绍
高血压是已有10亿人受影响的全球性的疾病。高血压是心血管疾病最重要的危险因素，从115/75mmHg开始，随着血压的升高，心血管疾病发病风险也相应增加。高血压是多种心脑血管疾病的重要病因、危险因素和主要的死亡原因之一，其发病机制十分复杂。lncRNA是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA，于2002年被OkazakiY等人在对小鼠全长cDNA文库的大规模测序过程中首次发现并命名。它的序列并没有特定的特征，有些具有poly(A)尾巴，有些没有poly(A)尾巴，分化过程中有动态的表达与不同的剪接方式，与编码基因相比，lncRNA表达量更低。目前并不能仅根据lncRNA的序列或者结构来推测它们的功能。lncRNA具有低序列保守性、低表达水平、高种属及组织特异性的特点。研究发现，lncRNA的表达水平明显低于编码蛋白质的基因，但并不影响lncRNA功能的发挥。相对于mRNA的广泛表达，lncRNA的表达具有比较高的组织或细胞特异性，而且它们的表达可以是高度的环境和时间依赖性。lncRNA可广泛分布于各个亚细胞结构中，在细胞质与细胞核中均有表达，其中分布于细胞核中的lncRNA最多。位于细胞核内的某些lncRNA可以与PcGs相互作用启动和维持染色质表观遗传学修饰(当然具体机制会各不相同)。有的lncRNA是亚细胞结构的重要组成部分，如NEAT1RNA。此外，需要说明的是，lncRNA能以稳定的形式存在于循环血浆、血液以及尿液中。lncRNA已被发现和多种生物途径和疾病相关，是近年来的研究热点，但在高血压领域的报道是较为缺乏的。lncRNA可以作为各种细胞增殖、分化的新的调节剂，参与到心血管疾病的发病机制中。高血压发病机制涉及多种因素，包括肾素-血管紧张素-醛固酮系统，血管平滑肌和血管内皮功能障碍，以及受损的血小板功能和肾相关因素。lncRNA在高血压机制的研究中占有重要地位，从而为高血压提供新型治疗策略。并且关于lncRNAs如何调控高血压的发生与进展的具体机制很少有报道，尚不清楚。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的是在于提供一种新的HASMC优势表达的lncRNA，AK098656，以及AK098656在制备预防、诊断或治疗高血压产品中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术首先提供了一种lncRNA，所述lncRNA核苷酸序列为SEQIDNO:1所示，将其命名为AK098656。优选的，所述AK098656在人的HASMCs的细胞质中优势表达。优选的，所述AK098656在高血压患者血液样本中呈高表达。优选的，所述lncRNA在制备预防、诊断或治疗高血压产品中的应用；优选的，所述lncRNA为AK098656。优选的，所述产品包括试剂、试剂盒或药物。进一步地，本专利技术提供一种AK098656抑制剂，所述的抑制剂包括：AK098656核酸的反义寡核苷酸、siRNA、shRNA以及AK098656的活性抑制剂。优选的，所述抑制剂能抑制AK098656表达或活性。优选的，所述活性抑制剂能与靶lncRNA相互作用，更具体地，与靶lncRNA结合，通过形成结合体，lncRNA功能减少或被阻断。优选的，所述抑制剂优选为siRNA，所述siRNA包括如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的核苷酸序列。进一步地，本专利技术还提供了所述的抑制剂在制备预防或治疗高血压的药物组合物中的应用。优选的，所述抑制剂能抑制HASMCs合成表型增加；所述抑制剂通过促进HASMCs由合成表型向收缩表型转化治疗高血压。优选的，所述HASMCs表型转换蛋白包括MYH11和FN1；所述MYH11是介导调节HASMCs收缩信号的SMC特异性基因，FN1是ECM调节HASMCs粘附、机械传导、收缩信号和僵硬度的必不可少的蛋白。优选的，所述MYH11的抗体和FN1的抗体能与AK098656有效结合，从而pull-downAK098656的RNA。本专利技术所述的AK098656与细胞分化、细胞运动、高血压相关疾病等信号通路相关，所述信号通路都涉及MYH11/FN1功能性紊乱。优选的，所述抑制剂通过抑制由溶酶体路径介导的部分MYH11/FN1降解治疗高血压。本专利技术AK098656可能作为脚手架拉动PSMD11(26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基11)靠近MYH11，因此加速MYH11的降解，并且可能通过增加收缩蛋白MYH11的降解促进HASMCs的表型转换。进一步地，本专利技术提供一种转基因大鼠模型在高血压发病机制的研究模型或治疗高血压药物的筛选或研发模型中应用，所述转基因大鼠模型是通过pCDNA3.1-AK098656表达载体构建的。进一步地，本专利技术还提供一种用于辅助诊断高血压的试剂盒，所述试剂盒包含检测AK098656的表达水平的工具，以及如何使用所述试剂盒的说明。优选的，所述试剂盒能够通过检测血液样本中的AK098656的表达水平来诊断患者是否患有高血压；所述AK098656在高血压患者血液样本中呈高表达。关于如何使用试剂盒的说明书优选告知高表达水平的AK098656预示患有高血压。检测AK098656表达水平的工具包括基因芯片、测序、实时定量PCR，优选的为实时定量PCR。优选的，所述工具包括用于特异性检测AK098656表达水平的引物对，所述引物对序列如SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示；以及包括与所述引物配合使用的探针，所述探针为SEQIDNO:6。本专利技术有益效果如下：(1)本专利技术首次发现一种人类特有在血管平滑肌细胞中优势表达的lncRNA，AK098656。(2)本专利技术发现AK098656可以作为核酸支架介导细胞骨架蛋白MYH11和FN1的稳定性，诱导HASMCs分化，进而导致阻力血管重构和血压升高。(3)本专利技术首次发现可以直接促使高血压升高的人源lncRNA。AK098656转基因大鼠模型与原发性高血压患者早期病理过程相似，这为高血压的发病机制及药物治疗提供了一个新的研究工具。(4)本专利技术发现AK098656可以作为预防或治疗高血压提供新的分子靶点，指导相关药物的筛选和研发。附图说明图1AK098656在高血压病人与血压正常者中的表达；图2AK098656在不同人的细胞系中的表达；图3RNAscope显示AK098656在细胞中的定位；图4AK098656在HASMCs中的亚细胞定位；图5EdU增殖检测实验；图6与细胞增殖相关的蛋白表达水平变化；图7Transwell迁移实验；图8HASMCs细胞划痕实验；图9与增值、迁移相关的蛋白表达水平；图10ChIRPpull-down与AK098656相互作用的蛋白的SDS-PAGE银染；图11(A)ChIRP方法pull-down与AK098656相互结合蛋白WesternBlot检测结果；(B)RIP检测MYH11-AK098656和FN1-AK098656的相互作用；图12MYH11/FN1的蛋白表达水平；图13给以H2O2刺激不同时间，MYH11/FN1不同程度的降解；图14溶酶体活性抑制剂氯喹能够阻断MYH11/FN1的降解；图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种lncRNA，其特征在于，所述lncRNA核苷酸序列为SEQ ID NO1所示，将其命名为AK098656。

【技术特征摘要】
1.一种lncRNA，其特征在于，所述lncRNA核苷酸序列为SEQIDNO1所示，将其命名为AK098656。2.如权利要求1所述lncRNA，其特征在于，所述AK098656在高血压患者血液样本中呈高表达。3.权利要求1或2所述lncRNA在制备预防、诊断或治疗高血压产品中的应用。4.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述lncRNA与细胞分化、细胞运动、高血压相关疾病信号通路相关；所述信号通路都涉及MYH11/FN1功能性紊乱。5.一种AK098656抑制剂，其特征在于，所述抑制剂包括：AK098656核酸的反义寡核苷酸、siRNA、shRNA以及AK098656的活性抑制剂。6.权利要求5所述抑制剂在制备预防或治疗高血压的药物组合物中的应用。7.权利要求6所述应用，其特征在于，所述抑制剂通过促进HASMCs由合成表型向收缩表型转...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡军，耿彬，崔庆华，金翎，林宪娟，
申请(专利权)人：中国医学科学院阜外医院，
类型：发明
国别省市：北京,11