一种基于重组核受体蛋白的生物效应物质高通量筛查鉴定方法技术

本发明专利技术涉及一种基于重组核受体蛋白的生物效应物质高通量筛查鉴定方法。利用带标签的选定重组核受体蛋白选择性地吸附到磁珠载体上，再根据核受体与小分子亲和结合的原理，利用重组核受体蛋白特异性地从复杂环境介质中捕获具有结合活性的效应物质，再结合超高效液相色谱‑四级杆静电场轨道阱高分辨质谱技术进行高通量、非靶向效应物质的分析。本发明专利技术提高了物质鉴定的特异性和效率，能够应用于环境中与核受体结合的效应物质的快速筛选和结构鉴定，也可以用于药物开发。

【技术实现步骤摘要】
一种基于重组核受体蛋白的生物效应物质高通量筛查鉴定方法
本专利技术属于生物化学检测领域，涉及一种筛查与重组核受体蛋白特异性结合的生物效应物质的方法，特别涉及一种重组核受体蛋白固定于镍磁珠上的亲和结合筛选方法及其基础上建立的高通量非靶向效应物质鉴定方法。
技术介绍
全球化学品正在以爆炸性的速度增长，迄今为止美国化学文摘社登记了超过1.087亿个商用化学品，这些物质在给人们生活带来便利的同时也以各种形式进入环境介质，如室内灰尘，饮用水等。大量研究表明环境中一些化学物质会干扰内分泌系统，从而影响生态与人类健康，但是对于导致这些问题的特定的效应物质，知之甚少。鉴定复杂环境介质中有毒的化合物组成主要障碍在于环境基质的复杂性，目前环境中生物效应物质的鉴定主要是利用效应导向的化学物质鉴定方法(Effectsdirectedanalysis,EDA，可参见BrackW.Effect-directedanalysis:apromisingtoolfortheidentificationoforganictoxicantsincomplexmixtures.AnalBioanalChem.2003.37本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于重组核受体蛋白的生物效应物质筛查鉴定方法，其步骤包括：将带标签的选定重组核受体蛋白与待测环境介质混合，使上述重组核受体蛋白结合环境介质中的生物效应物质；将结合生物效应物质的重组核受体蛋白固定到磁珠载体上；洗脱得到核受体蛋白与生物效应物质的混合物；对混合物进行液液萃取得到样品；采用不表达上述重组核受体蛋白的空载体蛋白，基于上述同样过程得到对照；筛选样品与对照之间的差异化合物；通过化学数据库和质谱数据库搜索以鉴定上述差异化合物。

【技术特征摘要】
1.一种基于重组核受体蛋白的生物效应物质筛查鉴定方法，其步骤包括：将带标签的选定重组核受体蛋白与待测环境介质混合，使上述重组核受体蛋白结合环境介质中的生物效应物质；将结合生物效应物质的重组核受体蛋白固定到磁珠载体上；洗脱得到核受体蛋白与生物效应物质的混合物；对混合物进行液液萃取得到样品；采用不表达上述重组核受体蛋白的空载体蛋白，基于上述同样过程得到对照；筛选样品与对照之间的差异化合物；通过化学数据库和质谱数据库搜索以鉴定上述差异化合物。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，对差异物质的筛选采用的多元统计方法包括主成分分析和正交偏最小二乘判别分析，根据变量重要性因子VIP、非参数T检验、样品组与对照组峰面积倍数关系(foldchange)来筛选上述差异化合物，筛选条件为：VIP>1,p<0.05,foldchange>1和VIP<1,p<0.05,foldchange&...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡建英，张虹，贾映亭，胡文欣，张照斌，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京,11